Metodos de introduccion del vector
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METODOS DE INTRODUCCION DEL VECTOR:
El siguiente paso será introducir el vector de clonación que contiene el gen que se quiere clonar en la célula hospedadora, para que ésta, al multiplicarse, origine un clon celular que lleve el gen concreto.
Existen varios métodos que dependerán del tipo de célula fundamentalmente.
Existen varios métodos que dependerán del tipo de célula fundamentalmente.
En bacterias (células procariotas), mediante estos procesos:
Transformación. Ocurre espontáneamente en ciertos tipos d.e bacterias y se consigue artificialmente sometiendo a la célula bacteriana a tratamientos físicos (choques térmicos y eléctricos) y químicos.
La célula capta moléculas de ADN que se encuentran en el medio externo, las introduce en su interior y las incorpora a su genoma. En las siguiente animación puede verse el proceso.
Transducción. Este método consiste en introducir el ADN en la célula hospedadora mediante un virus, utilizando como vector de clonación el genoma del virus.
La molécula de ADN recombinante se replica en la célula huésped. Cuando ésta se divide, las células descendientes heredan el ADN recombinante, creándose así una población de células idénticas, es decir, un clon que contiene el ADN deseado. Los segmentos de ADN clonados pueden recuperarse de la célula huésped, purificarse y analizarse. 2.2.- El proceso de la ingeniería genética: Se lleva a cabo de la siguiente manera: 1ª.- El ADN que contiene el gen deseado se corta con un tipo de enzimas de restricción. 2ª.- Se corta el ADN del vector con las mismas enzimas de restricción de forma que los puntos de corte serán complementarios. 3ª.- Se unen el fragmento de ADN del gen deseado al vector. 4ª.- La molécula resultante es un ADN recombinante (se ha recombinado el gen que procedía de un ADN con el ADN del vector). Se introduce este ADN recombinante en una célula huésped. 5ª.- La célula huésped, normalmente una bacteria, se divide muchas veces obteniéndose una población de células idénticas que contienen todas ellas el gen deseado. 6ª.- El gen deseado puede después recuperarse de las células huésped, purificarse y analizarsePor este proceso, por ejemplo, se ha logrado introducir el gen que lleva la información para la producción de insulina en bacterias (células huésped) y al dividirse éstas muchas veces se han obtenido mucha cantidad de insulina pura. La insulina que se inyectan los diabéticos se fabrica así por ingeniería genética.