Proteinas

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PROTEINAS 
 formadas por a.a
con un grupo amino: bases 
 con un grupo carboxilo: ácido

los a.a esenciales no son sintetizados por el organismo

los a.a se diferencian entre ellos en la estructura de las cadenas laterales que son los grupos R

caracter anfótero: se comportan conmo partículas cargadas o no cargadas según el pH del medio

pH ácido carga positiva 
 pH básico carga negativa
ión híbriodo o witterion: ión dipolar con carga cero
PI ( punto isoeléctrico) 
 a.a con carga neta cero
 a.a ? 2 o más unidades al PI: carga neta negativa
 a.a ? 2 o más unidades al PI: carga neta positiva
 ESCTRUCTURA DE LAS PROTEINAS
PRIMARIA

 orden o secuencia de a.a de una proteína

la secuencia de información genética del ADN es la transcriptasa al ARNm

 SECUNDARIA

 ordenación regular y periódica en el espacio a lo largo de una dirección

3 conformaciones:

hélice ?
 lámina plegada
 espiral al azar
 TERCIARIA

 doblamiento o plegamiento sobre si mismas de la estructura secundaria

es exclusiva de cada proteína

da las propiedades biológicas

 CUATERNARIA unión de varias cadenas polipeptídicas
  
CLASIFICACION PROTEINAS 

 SIMPLES: sólo contienen a.a

GLOBULARES 

cadenas polipeptídicas

plegadas

forma esférica o globular

ALBUMINA 
 GLOBULINAS
 HISTONAS
 
 FIBROSAS cadenad polipeptídicas ordenadas de forma paralela ( fibras o láminas largas)
COLAGENO 
 QUERATINA
 ELASTINA
 2 TIPOS 
MIOSINA  ( músculo )
 FIBRINOGENO

 CONJUGADAS: proteínas con otras sustancias químicas

componente no proteíco: APOPROTEINA

componente no proteíco: GRUPO PROSTETICO

TIPOS  
 NUCLEOPROTEINAS ADN/ ARN
 MUCOPROTEINAS Hc > 4%
 GLUCOPROTEINAS HC < 4%
 LIPOPROTEINAS 
 METALOPROTEINAS con metales
FUNCIONES PROTEINAS  
 enzimas catalizadores biológicos
 estructural de clas y tejidos
 defensiva o protectora anticuerpos
 transporte de moléculas Hb/ lipoproteínas/ albúmina
 hormonas 
 receptores transmiten el mensaje al interior de la cla
 presión oncótica presión q ejercen las proteínas que se oponen a la salida de agua de los capilares sanguíneos

PROTEINAS SERICAS ( 6,2-8,5 g/dl) 

 
 PLASMA

 90% de agua

contiene fibrinógeno ( en el suero está ausente)

 PROTEINAS SERICAS

 son sintetizadas en el hígado

no Ig in tp Hb

  
METODOS DETERMINACION  
 KJELDAHL

 detecta el contenido total de N en una muestra

oxida compuestos nitrogenados a NH4 y éste a NH3

no se usa

 BIURET

 determina las proteínas séricas totales

los enlaces peptídicos lo las proteínas en medio alcalino reacciona con iones cúpricos ( Cu ++)

se forma un complejo violeta q se mide por espectrofotometría a 540 nm

es el método de referencia

su empleo está automatizado

 LOWRY

 la muestra se trata con solución alcalina de Cu

se adiciona reactivo fenólico de Folin y Ciocalteau

se produce color xq se reduce el ácido fosfotungstico y fosfomolibdico a azul de tungsteno y azul de moblideno

 ABSORCION ULTRAVIOLETA

 se absorbe luz a 210 nm

manual o automático

 REFRACTOMETRIA

 mide el índice de refracción

la luz incide sobre una sustancia con solutos

la luz sufre un cambio de dirección ( refracción ) q depende de la cantidad de solutos q contenga

método manual

 ELECTROFORESIS PROTEINAS 
 DEFINICION

 se basa en el movimiento de partículas cargadas en un campo electrico

partículas cargadas negativa/  emigran al electrodo positivo o ANODO
  positiva/ migran al electrodo negativo o CATODO
   
 TIPOS ELECTROFORESIS 
LIBRE O MOVIL  utiliza un medio líquido
 ZONAL O DE SOPORTE

 se realiza en un medio de soporte inerte

proporciona mejor resolución de bandas

 Ph Y BUFFER

 las proteínas son moléculas anfóteras ( + o - según su pH)

conociendo el PI se puede elegir un buffer o tampón

si se emplea buffer de pH 8,6, las proteínas tienen carga negativa, entonces migrarán al polo + o ánodo

la función del buffer: mantenes el pH constante ( cada proteína mantendrá una carga cte. durante la separación electroforética)

si  ? la fuerza iónica del buffer, la migración se hace más lenta ( las bandas migradas son más nítidas pero están más juntas)

buffers más utilizados

buffer barbital a pH 8,6 ( más utilizado) 
 tras-barbital con lactato de Ca ++ a pH 8,6
si el Tº ? se producen banadas más anchas
 TIPOS SOPORTES 
 GEL POLIACRILAMIDA

 ADEPENDE DE LA CARGA Y EL TAMAÑO DE LA PARTÍCULA

PRODUCE MUCHAS BANDAS

imagen compleja dificil de interpretar

 GEL ALMIDON

 tb depende del tamaño y la carga de la petrículas

da tb muchas bandas

 PAPEL para separar moléculas de pequeño tamaño
 ACETATO CELULOSA

 se obtienen 5-6 bandas

son los más utilizados

 GEL AGAROSA

 método de elección

se obtiene 5-6 banadas

son los más utilizados

 PASOS

 separación electroforética mediante un campo electrico

fijación al soporte de las fracciones proteícas ya separadas

revelado de las fracciones proteicas para identificar su presencia y separación con colorantes: negro amido o Ponceau S

decoloración: metanol- acético o acético-agua

cuantificar las fracciones electroforéticas

 CUANTIFICACION FRACCIONES 
ELUCCION 

 se cortan las fracciones

se eluye con disolvente adecuado

se mide la A para calcular la proporción de cada una de las fracciones

 DENSITOMETRIA

 con fotómetros especiales se cuantifica el colorante fijados cada una de las fracciones

se representa con una gráfica y se llama espectro o patrones electroforéticos

 FRACCIONES ELECTROFORETICAS 
 ?1-GLOBULINAS 
? 1- ANTITRIPSINA

 inactiva la tripsina y la plasmina

reactante fase aguda

? : reacciones inflamatorias

? : enfisema

 ? 1- LIPOPROTEINA

 trnsporta colesterol y vitaminas liposolubles

? : hiperlipemias

? : enf. hepática

 ? 1- GLUCOPROTEINA reactante fase aguda
 PROTROMBINA

 factor II de la coagulación

? : enf hepática

 GLOBULINA FIJADORA HORMONAS TIROIDEAS

 transporta hormonas tiroideas

? : embarazo / anticonceptivos orales

? : nefropatias

 ?2-GLOBULINAS 
? 2- MACROGLOBULINA

 neutraliza la tripsina, plasmina y calicreina

? : sindroma nefrotico / enfisema / diabetes / embarazo

? : mieloma / artriris reumatoide

 ? 2- LIPOPROTEINA

 transporta lípidos

? : hiperlipemias

? : enf hepática

 HAPTOGLOBINA

 fija la Hb

? : neoplasias / infartos miocardio / inflamación

? : enf hepática / anemia hemolítica / anemia megaloblástica

 CERUOLPLASMINA

 fija del cobre

reactante fase aguda

? : embarazo / anticonceptivos orales

?enf. Wilson ( trastorno metabolismo del cobbre xq no se produce ceruloplasmina)

 ERITROPOYETINA

 estimula la eritropoyesis

? : anemias

? : enf renal

 ?-GLOBULINAS 
? - LIPOPROTEINA

 transporta lípidos y hormonas

? : hiperlipemias / nefropatias

? : inanición

 TRANSFERRINA

 transporta Fe++

? : anemias ferropénicas

? : enf hepática / neoplasias

 C3 Y C4

 componentes del complemento

? : LES / anemia hemolítica autoinmune

 HEMOPEXINA

 transporta grupos HEMO

? : neoplasias / infarto miocardio

? : enf hepática / anemia hemolítica / anemia megaloblástica

GAMMA-GLOBULINAS 
INMUNOGLOBULINAS ( Ig)  
 PROTEINA C RECTIVA 

? : enf hepática / infecciones crónicas / mieloma múltiple

? : edad avanzada / LLC / agammaglobulinemias

 ALBUMINA 
?  en deshidratación ( pérdida de volumen)
 ? enf hepática/ neoplasia / enf renal / malnutrición
 FIBRINOGENO APARECE EN FRACCIONES BETA Y GaMMA ( si la muestra es plasma)
PROPORCION  FRACCIONES ELECTROFORETICAS 
 
ALTERACION PATRON ELECTROFORETICO  
 ENFERMEDAD HEPATICA

 ?  albúmina

? ?- globulina

? gamma-globulina

 ENFERMEDAD INFLAMATORIA
AGUDA 

 ? ?1-globulina

? ?2- globulina

? albúmina

 CRONICA

 ? gama-globulina

? o = album

? ?1, ?2 y ?-globulinas

 SINDROME NEFROTICO

 ? albúmina

? o = gama-globulina

? ?2- globulina

 GAMMAPATIA MONOCLONAL

 ? gama-globulinas

mielomas multiples

macroglobulinemia de Waldenstrom ( proliferación monocloanl de L.B y componente monoclonal Ig M)

 CIRROSIS HEPATICA

 ? o = ?

? gamam-globulina

LIPOPROTEINAS PLASMATICAS 

 son sustancias insolubles en agua

moléculas anfipáticas ( contienen grupos polares y apolares)

son solu