Siembra en tubo con medio solido

Cultivo anaerobiosis

Se considera microorganismos anaerobio estricto a todo microorganismo incapaz de desarrollarse en contacto con el oxigeno a concentraciones superiores al 0,5%. Las bacterias anaeróbicas no crecen en medios de cultivos normales debido a que tienen unas exigencias nutritivas mayores al ser el metabolismo anaerobio menos eficaz que el aeróbico.

En general precisan medios con una elevada proporción de peptonas e hidratos de carbono. Asimismo, deben tener bajo potencial red-ox. Los medios de cultivo llevan incorporado un compuesto reductor como tioclicolato, acido ascórbico, cisteína. Para reducir el contenido de oxigeno. Hasta hace pocos años los microorganismos anaerobios conocidos eran los procedentes del medio ambiente estos producían infecciones invasivas y proteoliticas. Clostridium tetan, capaz de producir tétanos. Clostridium septicum responsable de la gangrena gaseosa, clostridium perfringes y botulinum capaces de de producir intoxicaciones alimentarias.

Los microorganismos aerobios humanos son saprofitos de muchas zonas de nuestro organismo donde se establece un equilibrio. En lesiones importantes y profundas se produce una invasión de bacterias aeróbicas que consumen el O2 yb establecen las condiciones para el crecimiento anaeróbico. Las bacterias anaeróbicas crecen bien en medios con algún antibiótico ya que presentan resistencia factor que puede ayudar a su identificación.  El uso creciente de antibióticos en dosis cada vez más elevadas ha aumentado su incidencia y el interés por su estudio.

Métodos de cultivo en anaerobiosis

Para realizar un cultivo en anaerobiosis se pueden conseguir los sigts métodos:

+siembra en profundidad: doble capa. No es muy eficaz porque el O2 difunde pronto.

+ Siembra en tubo con medio sólido: transferir el inoculo con pipeta o asa de siembra a un tubo con el medio de cultivo fundido a 45-50ºc dejar solidificar el agar antes de poner los tubos a incubar.

+ Siembra en tubo co medio líquido: transferir el inoculo a un tubo con caldo y añadir una capa de vaselina estéril, de forma que la superficie de caldo que tatolmente cubierta para impedir la difusión de O2 almedio. Antes de inocular es conveniente hervir el medio durante 10mn para liberar el O2.

+ Utilización de jarras de anaerobios: se consiguen condiciones de anaerobiosis mas estrictas que con los métodos anteriores. Son jarras con cierre hermético que disponen de un generador de hidrogeno (h2+ o2->H2O) o de co2 y un indicador de anaerobiosis redox (papel filtro impregnado con un compuesto por Ej.: azul de metileno que se vuelve blanco cuando se reduce).

+ Método de la vela: colocar las placas y los tubos sembrados junto con una vela encendida (mariposa) en el interior de un frasco con tapa rosca. Cerrar el frasco se apaga consiguiendo de esta manera una atmosfera anaerobia.

Aislamiento de clostridium

Las bacterias del genero clostridium son bacilos Gram. Positivos, esporulados, anaeróbicos estrictos y con metabolismo fermentativo. Como la mayoría de anaeróbicos estrictos, los clostridios no tienen coenzimas hemiticos y son catalasa negativos. Una de las características más importantes de los clostridios es su capacidad para fermentar azúcar. Partes: tapa, catalizador, soporte del catalizador, placas de cultivo y indicador.