Virus

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VIRUS 
 
CARACTERISTICAS 

 son particulas pequeñas ( 20-300 ?m)

son parásitos intracelulares obligados

tiene un solo tipo de ácido nucleico ( ADN o ARN)

se multiplican dentro de las clas vivas

VIROIDES: son pequeñas particulas de ADN monocatenario q contiene información genética para su propia replicación en el núcleo de la cla

PRIONES: son proteinas infecciosas de ? Pm no antigénicas

RETROVIRUS:son virus ARN q tiene transcriptasa inversa ( se trascribe el ADN bicatenario a partir de ARN, se sintetiza ARN tomando como molde el ADN provirico

el virus q incluye solo una parte del genoma y q son particulas defectivas y no pueden replicarse por si mismas

PSEUDOVIRIONES: incluye el genoma de la cla parasitada, no se replican

el virus no tiene capacidad para generar E ( xq no tienen enzimas metabólicas)

el virus utiliza el material de la cla huesped para reproducirse y multiplicarse

 ESTRUCTURA VIRICA

 la estructura básica del virus es el VIRION

el virión está formado por:

ac. nucleico 

 es ADN o ARN

está en el núcleo o core

el material genético:

 ARN ribovirus

 monocatenarios

excepto reovirus

 ADN desoxirribovirus

 bicatenarios

excepto parvovirus y fagos

 cápsidees la cubierta proteica 

CAPSOMEROS: son subunidades q forman la cápside

NUCLEOCAPSIDE: está formado por:

GENOMA 

es el ácido nucleico 

la molécula de ácido nucleico puede ser:

 linel, continua o fragmentada
 circular, plana o superenrollada
 CAPSIDE 
la nucleocapside puede estar:
desnudo  
 envuelto por peplos

IDENTIFICACION DE LOS AC. NUCLEICOS: ( TINCIÓN DE NARANJA DE ACRIDINA):

VIRUS ARN ( monocatenarios) ROJOS
 VIRUS ADN ( bicatenarios) AMARILLOS
 MORFOLOGIA VIRUS según la cápside:
 helicoidales

 la capside es un cilindro hueco y helicoidal

es un tubo hueco formado por un filamento de ácido nucleico en espiral

está formado por protómeros ( q son las unidades q se unen en forma de cinta)

 icosaedricos o poliédricos

 la cápside tiene múltiples caras ( gral/ icosaedro)

es una estructura compacta de máxima fortaleza

 virus con envuelta tiene forma esférica
 virus completos 
SIMETRIA MIXTA: tiene simetria cúbica y una cola helicoidal
 AISLAMIENTO DE VIRUS se produce el aislamiento:
 animales vivos 
 huevos con embrión 

CULTIVOS CELULARES O DE TEJIDOS:

PRIMARIOS 

 se obtienen a partir de un trozo de tejido se separan de forma individual las clas

dan lugar a una monocapa

tiene una vida corta

 SECUNDARIOS

 se obtienen a partir de cultivos clares primarios

tiene una vida mayor

 LINEAS CELULARES CONTINUAS

 son los más utilizados

son clas transformadas

son mantenidas indefinida/ en cultivo

los más importantes: HeLa, KB, Hep2

 DIAGNOSTICO DE INFECCIONES VIRALES

 se realiza con microscopio eléctronico

se hace un cultivo

se hace una serologia para detectar titulos de Ac ( ELISA, IF, AHE)

las muestras se obtienen a parttir de:

secrección nasal 
 frotis faringeos
 liquidos vesiculares
 raspados de piel
 orina, heces, LCR, biopsias
 EFECTO CITOPATICO

 son aquellos q originan un daño o muerte de la clas hospedadora

estos efectos pueden ser:

multiplicación en el interior de la cla 
 alteración de la permeabilidad de la cla hospedadora
 inhibición de la sintesis de ADN o ARN de la cla hospedadora
se manifiesta como:
cuerpos de inclusión 
 policariocitos
 daño cromosómico
 CICLO VIDA DE VIRUS 
 adsorción a las cla diana 
 penetraciónendocitosis 
 liberación de la particula viral

 transcripción

replicación

formación de proteinas y acidos nucleicos

 expresión del genoma viral 
 ensamblaje de las nuevas  particulas virales 
 salida de la cla para infectar a otras 
TIPOS DE VIRUS 
 
VIRUS ARN O RIBOVIRUS  son monocatenarios excepto los reovirus
SIMETRIA ICOSAEDRICA  
SIN ENVOLTURA  
reoviridae ( bicatenario) 
 caliciviridae
 picornaviridae
 CON ENVOLTURA 
flaviviridae 
 togaviridae
 retroviridae
 SIMETRIA HELICOIDAL 
 VIRUS ADN O DESOXIRRIBOVIRUS son bicatenarios excepto los parvovirus
CICLO VIDA DEL VIRUS 
 
 ADHESION del virus a los receptores de superficie de la cla diana ( mediante elementos de fijación como son las hemaglutininas
 PENETRACION por medio de fagocitosis
 REPLICACION para formar ARNm a partir del genoma ( ADN o ARN)
 RECOMBINACION es la unión de proteinas y el material genético sintetizado
 LIBERACION

 destruyendo la pared clar ( lisis clar)

modificando la membrana clar

CULTIVO DE VIRUS 
 
 IDENTIFICACION DE LOS VIRUS

inocular la muestra en diferentes lineas celulares

observar el efecto citopático q el virus produce en estas lineas celulares 

 PROPIEDADES FISICAS pH y capacidad tamponadora ( con rojo de fenol):
pH óptimo rojo 
 pH 7,0 naranja
 pH 6,5 amarillo
 Ph 7,6 azul-rojo
 PH 7,8 púrpura
 COMPOSICION M.C 
soluciones salinas equilibradas ( BSS) 
 aminoacidos ( glutamina)
 vitaminas ( medio MEM: vit B)
 glucosa ( fuente de E)
 hormonas y factores de crecimiento
suero de ternera ( es el + usado)CF 
 suero bovino fetal FCS
 suero caballo HS
 suero humano HuS
 M.C DE LOS VIRUS 
BME 

es el medio basal de Eagle

tiene aminoacidos esenciales

con suero bovino fetal al 10%

en este medio crece:

fibroblastos de ratón 
 clas HeLa
 
 MEM

 es el medio minimo esencial de Eagle

es el medio más utilizado

tiene a.a y suero al 10%

 RPMI 1640 crece:
linfoblastos 
 lineas celulares leucémicas
 IMDM

 es el medio modificación Iscove del medio DMEM

incluye:

albúmina bovina 
 transferrina
 selenito

cultivo de linfocitos en medio libre de suero

 McCOY 5A para crecimiento de lineas celulares diploides ( rata, humanos)
 MEDIO 199 se utiliza para:
 cultivo de clas no diferenciadas
 estudio de cromosopatias
 ANTIBIOTICOS Y ANTIFUNGICOS se utilizan como mezclas de:
 penicilina + streptomicinaantimicrobiano 
 penicilina + sterptomicina + fungizona antimicrobiano y antifungico
 gentamicina antimicrobiano ( alternar con penicilina y streptomicina)
 anfotericina B antifungico y antilevaduras
CULTIVO DE VIRUS 

 por inoculación en animales de experimentación

desarrollo sobre huevos embrionados

CULTIVOS CELULARES:

PRIMARIOS 

 son fragmentos de tejidos

se disgrega tripsina ( monocapa)

se hace con:

clas de riñón de mono 
 fibroblastos

se utilizan para 2-3 semanas

tiene varios tipos de clas

residen 5-10 subcutaneos

el más utilizado esla cla de r´ñón embrionario humano( REU)

 SECUNDARIOS se obtienen de un cultivo primario
 LINEAS CELULAS DIPLOIDES

 constituidas por un solo tipo de clas

son fibroblastos de pulmón

se utiliza para:

producción de vacunas 
 aislamiento viral
 sustratos para probar materiales tóxicos

el 75% de clas tiene igual cariotipo q la original

son fibroblastos embrionarios

el nº de subcultivos: no ? a 50 pases

 LINEAS DE CLAS CONTINUAS

 el 75% de clas diploides

de tejidos cancerosos

los más importantes: HeLa, VERO, RK-13

 CULTIVO DE ORGANOS 

LINEAS CELULARES:

se utilizan monocapas clares adheridas al lecho de un tubo

requiere:

sustratos esenciales 
 solución amortiguadora
 pH adecuado
 suero fetal bovino

la monocapa se inocula con una muestra tratada

el virus se descubre por el desarrollo de un efecto clar ( EC): de 3-4 dias

EFECTO CITOPATICO ( Ec) tipos:
formación de sinticios 
 formación de vesiculas
 inclusiones
 redondeamiento
 desprendimiento de la monocapa
 
 LINEAS las lineas celulares q más se utilizan son:
Hep-2 
 HeLa
 VERO

DIPLOIDES: las q se utilizan son:

PARA DETECTAR EL CRECIMIENTO VIRICO EN M.C 
 
 POR SU ACCION O EFECTO CITOPATICO 
a nivel clar 
alteraciones nucleares 
 alteraciones citoplasmáticas
 aparición de cuerpos de inclusión
 formación de sincitios
 
 a nivel monocapa 
retracción clar 
 despegamiento del tubo
 distribución irregular
 POR APARICION COMPONENTE DEL VIRUS EN EL M.C 
hemaglutininas 
 Ag fijadores del complemento
 POR HEMADSORCION O FIJACION de eritrocitos en membrana de clas infectadas
 POR IFD con Ac especificos
 POR INTERFERENCIA de la acción citopática con otros virus infectantes
 POR MICROSCOPIA ELECTRONICA 

TOMA DE MUESTRA:

obtención templana de la muestra

en condiciones de esterilidad

no dejar la muestra a tª ambiente, incubadora, no congelar ni tp descongelar

se guardan en nevera 4ºC -8ºC o en hielo de agua hasta q se pueda inocular

si el tº de inoculación es ? de 4 dias se congela a -70ºC

CRIOPRESERVANTES:

 DMSO ( dimetil sulfóxido)
 suero/ leche descremada / proteinas / sorbitol
 glicerol / sacarosa
 CLASIFICACION DE VIRUS ARN
 
FAMILIA REOVIRIDAE ROTAVIRUS
produce gastroenteritis en lactantes y niños entre 6-24 semanas 
 incuba 1-3 dias
 se detecta en heces ( aglutinación con particulas de látex)
 
 FAMILIA CALICIVIRIDAE HEPATITIS E
 FAMILIA PICORNAVIRIDAE 
ENTEROVIRUS 

produce parálisis, meningitis, miocarditis

HEPATITIS A ( tipo 72)

la transmisión es fecal-oral 

 RHINOVIRUS causa el resfriado común
 F. TOGAVIRIDAE Y F. FLAVIRIDAE 
RUBEOLA 

causa malformacioneas congénitas

sintomas respiratorios

tb hay erupción eritematosa

en gestantes produce sordera, cataratas, pbs cardiacos

se incuba: 14-21 dias

su diagnóstico:por medios serológicos para detectar Ig G e Ig M ( infección aguda)

los métodos utilizados son:

ELISA 
 FC
 AGLUTINACION CON LATEX

VACUNA TRIPLE VIRICA:a los 15 meses y 9 años

paperas 
 sarampion
 rubeola
 HEPATITIS C

 transmisión fecal-oral

es crónica

 F. RETROVIRIDAE LENTOVIRUS:  VIH ( SIDA)
 F. ORTHOMYXOVIRIDAE 
 F. PARAMYXOVIRIDAE 
PARAINFLUENZAE ( VPI) infección del tracto respiratorio
 VIRUS RESPIRATORIO SINCITIAL ( VRS) produce neumonia
 SARAMPION

 por via respiratoria

la rubeola es una enfermedad aguda y febril en la q aparecen manchas de koplk

vacuna triple-virica

 PAROTIDITIS

 produce paperas

incubación: 18-21 dias

por transmisión aérea

se utilizan métodos serológicos ( para detectar Ig M)

puede afectar a testiculos y ovarios

 
  
 
 F. ARENAVIRIDAE 
 VIRUS DE LASSA 
 VIRUS MACHUPO 
 VIRUS JUNIN 
 F. RHABDOVIRIDAE 
VIRUS HEPATITIS 
 
 ARN
HEPATITIS A 

 transmisión fecal-oral

no son crónicas

 HEPATITIS E

 transmisión fecal-oral

no son crónicas

 HEPATITIS C

 transmisión parenteral

son crónicas

 HEPATITIS D

 transmisión parenteral

son crónicas

 ADN 
CLASIFICACION VIRUS ADN 
 
F. PARVOVIRIDAE  
 F. PAPOVIRIDAE

 tiene efecto potencial cancerigeno

causan:

 verrugas
 papilomas
 F. ADENOVIRIDAE

 es una patologia del tracto respiratorio y ocular

se da sobre todo en niños ? de 6 años

se aisla cultivos celulares a partir de secrecciones nasofaringeas

 F. HEPADNVIRIDAE 
 F. HERPESVIRIDAE 
VIRUS HERPES SIMPLE ( VHS) 

 producen infecciones latentes

TIPOS:

 VHS-1 ? cintura
 VHS-2 genitales
con la tinción de Wright o Giemsa: las clas se ven grandes y multinucleadas
 CITOMEGALOVIRUS ( CMV)

 en pacientes inmunodeprimidos

su transmisión es por contacto

se encuentra en saliva, orina, semen, leche materna

al microscopio aparece el ojo de lechuza

 VIRUS VERICELA-ZOSTER ( VVZ)

 produce la viruela loca o varicela

se da cuando ? la inmunidad

 VIRUS EPSTEIN-BARR ( VEB)

 produce la mononucleosis infecciosa

está asociado al linfoma de Burkitt

se hace la prueba de Paul Bunnell ( para detectar Ac heterófilos

el virus ataca a los L.B pero no a los L.T

 HERPES VIRUS HUMANO 6 ( HHV)

 elevación brusca de tª ( 40ºC de 2-4 dias)

en niños de 3 meses- 6 años

 
ESQUEMA CLASIFICACION VIRUS 
 
 ARN
ROTAVIRUS 
 
 RUBEOLA
 RABIA
 VIH ( SIDA)
 GRIPE
 SARAMPION
 PAROTIDITIS
 
 ADN 
PARVOVIRUS 
 VERRUGAS/ PAPILOMAS
 HEPATITIS B ( VHB)
 HERPES SIMPLE ( VHS)
 CITOMEGALOVIRUS ( CMV)
 VARICELA-ZOSTER ( VVZ)
 EPSTEIN-BARR ( VEB)
 VIRUELA
VIRUS VIH ( SIDA) 
 
CARACTERISTICAS 

 pertenece a la familia retroviridae, subfamilia lentivirus

es ARN ( monocatenario: formado por una sola cadena de ARN)

sintetiza ADN a aprtir de ARN viral por la acción de la transcriptasa inversa

posee: nucleocápside y envoltura

GENES:

 estructurales 
genes core

transcriptasa inversa

proteinas ( q son Ag: 

p24  
 p17 
 p15 
 genes envoltura

 glicoproteinas ( gp):

 gp120siente tropismo por el receptor CD4 de los L.T4 ( L.T h o cooperadores) 
 gp41 facilita la aproximación del virus a la cla diana
 gp160 
 reguladores para la replicación del virus
tat 
 rev
 nef
 tev
 vpr

el virus se une a los receptores CD4 de los L.T4

se produce una destrucción de L.T4 ( CD4: L.Th o cooperadores)

hay una pérdida de respuesta inmunitaria tanto clar como humoral

la respuesta inmunitaria frente al virus suele tardar entre 6-8 semanas ( periodo ventana)

al pasar este tº, el ADN se pone en circulación y se integra en el ADN de la cla ( periodo de latencia: 2-8 años)

transmisión vertical: intrauterina

TIPOS:

VIH-1 produce SIDA 
 VIH-2 produce inmunodeficiencia

GENES PRINCIPALES:

 envcodifica glicoproteinas de la envoltura 
 gag codifica proteinas del core
p55 
 p24
 p17
 p15
 pol codifica enzimas necesarias para la replicación virica
transcriptasa inversa por medio de este enzima se produce la sintesis de ADN a partir de ARN virico cuando el virus entra en la cla 
 proteasa 
 endonucleasa 

el CD4 tb expresan: macrófagos, clas glía y clas de langerhans

SEROCONVERSION: de 6 semanas a 6 meses

 DIAGNOSTICO DE LABORATORIO DATOS DE LABORATORIO:
L.Th < 400  
 trombocitopenia 
 leucopenia 
 anemia 
 hipergammaglobulinemia ? gamma-globulinas
 serologia VIH +
 aparecen neoplasias 
 sarcoma de kaposi 
 linfoma de clas B 
 infecciones oportunistas 
protozoos 

 toxoplasma

criptosporidium

isospora

 bacterias

 micobacterias

treponemas

salmonellas

lagionella

 hongos

 pneumocystis carinii

criptococcus neoformans

candida albicans

 virus

 herpes simple

epstein-Barr

citomegalovirus

TECNICAS DE CRIBADO  ELISA ( si es + se confirmar con otras técnicas)
 TECNICAS DE CONFIRMACION 
 IFI 
 RIPA: radioinmunoprecipitación

 el virus se expone a una sustancia marcada

se detecta por autorradiografia los inmunoprecipitados q se han formado

 WB se utiliza para diferenciar o distinguir los Ac frente a las diferentes proteinas del virus
 CULTIVO 
 PCR 
 MARCADORES SEGUIMIENTO DE ENFERMEDAD 
detección del Ag p24  en fases precoces y tardias
 detección de Ac anti-p24en fases tardias 
 recuento clar de L.T4 o cociente respecto a L.T8 
 WESTR-BLOT ( WB) 
 RIPA 
TECNICAS DE CRIBADO 

prueba de aglutinación con látex o Htes

tecnicas de quimioluminiscencia 

ELISA ( si es + se confirmar con otras técnicas):para detectar Ig G especifica contra VIH

tipos de ELISA:

 indirectosson más sensibles 
 competitivos son más especificos
 sandwich son de tercera generación
 TECNICAS DE CONFIRMACION 
 IFI

en una fase sólida se encuentran las clas infectadas por el VIH

se añade un Ac marcado o fijado a un fluorocromo ( para ver la reacción Ag-Ac)

se utiliza el microscopio de fluorescencia 

 RIPA: radioinmunoprecipitación

 el virus se expone a una sustancia marcada

se detecta por autorradiografia los inmunoprecipitados q se han formado

el virus crece en las clas y se expone a una sustancia radiomarcada q tras el procesamiento permite detectar por autorradiografia los inmunoprecipitados q se han formado

la p24 se detecta peor

 WB

 se utiliza para diferenciar o distinguir los Ac frente a las diferentes proteinas del virus

se somete las proteinas del virus a una electroforesis en gel de poliacrilamida ( se separan y forman unas bandas según su Pm ( las proteinas de bajo Pm emigran más lejos)

estas bandas ( las q contienen las fracciones de proteinas) reaccionan con el suero produciéndose la reacción Ag-Ac

luego se añade anti_Ig G humana marcada por una enzima

el wb demuestra la presencia de Ac frente a cada una de las proteinas del virus por separado

según la OMS: la presencia de al menos 2 bandas de envoltura demuestra la positividad del VIH ( VIH+)

las bandas más comunes son: en orden decreciente

gp160 
 gp120
 p24
si con las pruebas de cribado y de confirmación la serologia es indeterminada entonces se hace el cultivo viral o PCR
 CULTIVO 
 PCR 
 MARCADORES SEGUIMIENTO DE ENFERMEDAD 
detección del Ag p24 

 en fases precoces y tardias

es el primer marcador serologico q positiviza después de la infección

puede reconocerse este Ag durante la primoinfección

 detección de Ac anti-p24en fases tardias 
 recuento clar de L.T4 o cociente respecto a L.T8 
 WESTR-BLOT ( WB) 
 RIPA 

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