Cultivos Celulares y Animales Transgénicos: Técnicas, Aplicaciones y Monitoreo Ambiental

Las células en cultivo se diferencian de las líneas celulares en:

• Conservar la morfología.
• Cromosomas con número diploide (2n).
• Crecimiento in vitro limitado.
• Inhibición por contacto.

Cultivo Primario

Para el cultivo primario se usa:

• Tejidos: fibroblastos, epitelios (dependen de anclaje).
• Células: macrófagos, linfocitos (no dependen de anclaje).

Totipotencia

Totipotencia: Capacidad de toda célula de dividirse, diferenciarse y dar lugar a un individuo idéntico al que le dio origen.

Tipos de Cultivo

• Cultivo de monocapa: Flexibilidad para desarrollar cultivo primario, facilidad de remoción del medio, alta concentración del producto.
• Cultivo en suspensión: Cuando se presentan problemas con la capacidad de anclaje de un determinado tipo celular, se generan productos continuos para producir a mayor escala.

Microscopía Invertida

Microscopio invertido: Seguimiento del cultivo: viabilidad, multiplicación, contaminación.

El virus de la diarrea bovina tiene efecto citopático en cultivo de testículo bovino.

Tipos de Medios

• Eagle: Para crecimiento celular.
• HAT: Selección celular. El indicador es rojo de fenol.

Líneas Celulares Continuas

Línea celular continua: HELA, CHO, BHK, VERO. Desventaja: da origen a factores carcinogénicos.

Animales Transgénicos

• Transgén: Es el gen introducido, tiene una porción de ADN o todo el genoma.
• Animal transgénico: Todas sus células presentan el gen foráneo.
• Animal quimérico: El transgén no está en todas sus células.
• Transgénesis: Es la tecnología necesaria para lograrlo.

Técnicas de Obtención de Animales Transgénicos

• Microinyección del ADN en núcleo de ovocito.
• Microinyección de ADN en pronúcleo o citoplasma del cigoto.
• Transferencia de gametos.
• Clonaciones.

Transgén limpio: Que lleve solo una característica determinada, que se exprese.

Para estabilidad del transgén: Usa tampones de microinyección de baja fuerza iónica.

Para la superovulación: HCG (Human Chorionic Gonadotropin) y PMSG (Pregnant Mare's Serum Gonadotropin).

Inserción del Genoma al Azar

Se provoca sobreovulación, se fecundan in vitro y se coloca el gen en el núcleo del óvulo. La inserción es al azar.

Transferencia por Retrovirus

El retrovirus más utilizado es leucemia murina MULV, tiene eficiencia del 100%. El virus solo afecta una célula si forma un animal quimérico. Se hacen cruces de animales quiméricos para obtener animales transgénicos.

Ejemplos de Animales Transgénicos

• Oveja Tracey: Produjo alfa-antitripsina, cura edema pulmonar, bajo dirección de promotor ovino de beta lactoglobulina produce 35g/l.
• Cerda Genie: Fabrica en su leche proteína C humana (desórdenes hemofilia).
• Antitrombina humana III (coagulante sanguíneo) en leche de cabra transgénica.
• Esta cabra produce BIOSTEEL: fibra hecha por el hombre con propiedades de tela de araña.

Contaminación Ambiental

• Contaminación del aire: Óxidos de azufre, óxidos de nitrógeno, CO2, CO.
• Contaminación del agua: Cloruros, fosfatos, nitratos, bióxido de azufre, amoniaco.
• Contaminantes orgánicos: Solventes, aceites, breas, clorantes.

Monitoreo de la Contaminación

• Mytilus edulis: Acumula metales.
• DBO (Demanda Bioquímica de Oxígeno): Se usa cuando hay materia orgánica elevada, parámetro para estudio de aguas residuales con gran cantidad de materia orgánica.
• DQO (Demanda Química de Oxígeno): Mide toda la materia oxidable en el residuo. La resta de DQO-DBO da como resultado la cantidad de materia orgánica no biodegradable.

Plantas que Absorben Metales

• Phragmites sp. (caña común).
• Eichhornia crassipes (jacinto de agua).