Determinación cuantitativa de proteínas: métodos de Biuret y Folin–Lowry para laboratorio clínico

Determinación cuantitativa de proteínas: métodos de Biuret y Folin–Lowry

Introducción

Las proteínas son macromoléculas que desempeñan un rol básico en la función y estructura celular. Los análisis de ciertas proteínas y enzimas que circulan en la sangre se emplean extensamente con propósitos de diagnóstico. Cada una de las moléculas de proteínas adquiere una estructura especial que depende exclusivamente de la composición de aminoácidos (aa) y del orden en que van dispuestos. La estructura tridimensional definitiva de una proteína depende del entorno que rodea a la molécula (pH, fuerza iónica, temperatura), así como de la presencia de otras moléculas; estas condiciones serán determinantes en el equilibrio de las interacciones precisas que deben darse dentro de la molécula para que ésta cumpla su función biológica.

Métodos para la determinación cuantitativa de proteínas

El método de Biuret

El método de Biuret: utilizado como método cualitativo y cuantitativo en la determinación de proteínas de materiales biológicos. La reacción consiste en tratar la proteína con sulfato de cobre en ambiente alcalino. El sulfato de cobre, en solución alcalina, reacciona con compuestos que tienen dos o más enlaces peptídicos dando un complejo de coloración violeta. La intensidad del color obtenido es una medida del número de enlaces peptídicos presentes en la solución. El color se debe a la formación de un complejo de coordinación del átomo de cobre con cuatro átomos de nitrógeno, dos de cada cadena peptídica. Requiere de mayor cantidad de proteínas (10 a 20 mg) para desarrollar el color.

El método de Folin–Lowry

El método de Folin–Lowry: aplicado a material seco o a soluciones de proteínas. Es un método cualitativo muy sensible, tanto así que se pueden medir muestras que contengan alrededor de 5 g de proteínas fácilmente. El color formado por el reactivo de Folin se debe a la reacción de la proteína con el cobre en solución alcalina y a la reducción de Cu2+ a Cu+ por los residuos de tirosina y triptófano de las proteínas. Los iones cuprosos (Cu+) reducen las sales de fosfomolibdato-fosfotungstato del reactivo, formando un complejo de color azul intenso. La intensidad del color depende del número de aminoácidos aromáticos presentes en la proteína. Sin embargo, debido a que el contenido de estos aminoácidos varía entre las proteínas, el color por miligramo de proteína no es constante; no obstante, el método es utilizado para seguir los cambios en el contenido de proteínas durante la purificación de las mismas.

Objetivos

• Preparar curvas de calibrado para la determinación de proteínas por ambos métodos.
• Determinar la concentración de proteínas, por ambos métodos, en una muestra problema.