Electroforesis: Principios y Procedimientos

Introducción

La electroforesis es una técnica fundamental en biología molecular y bioquímica que permite separar moléculas cargadas, como ácidos nucleicos y proteínas, en función de su tamaño y carga. Este documento describe los componentes y procedimientos clave de la electroforesis.

Componentes de la Electroforesis

Buffer de Electroforesis

El buffer de electroforesis tiene la misma composición y pH que el buffer utilizado para preparar el gel. Sus funciones principales son:

• Proporcionar el medio para la transmisión de la corriente eléctrica.
• Mantener el pH estable durante la electroforesis.

Para ácidos nucleicos, se utilizan comúnmente dos tipos de buffer:

• **TBE (Tris-borato-EDTA):** Contiene Tris base, ácido bórico y EDTA, con un pH de 7.2.
• **TAE (Tris-acetato-EDTA):** Contiene Tris base, ácido acético, ácido bórico y EDTA, con un pH de 8.5.

La electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE) se realiza generalmente con TBE.

Marcador de Peso Molecular

Los marcadores de peso molecular son moléculas de ADN o proteínas de tamaño conocido que se utilizan para determinar el tamaño de los fragmentos de ácidos nucleicos o proteínas en la muestra. Estos marcadores están disponibles comercialmente.

• **Marcadores de ADN:** Pueden ser fagos o plásmidos cortados con enzimas de restricción, o moléculas de ADN sintéticas.
• **Marcadores de proteínas:** Suelen ser una serie de proteínas de peso molecular conocido.

Buffer de Carga

El buffer de carga se mezcla con la muestra antes de cargarla en el gel. Sus funciones son:

• Aportar peso y densidad a la muestra, facilitando su depósito en el pocillo.
• Añadir color a la muestra, permitiendo monitorizar su migración durante la electroforesis.

La proporción de buffer de carga a muestra suele ser de 1:3 para ácidos nucleicos y 1:6 para proteínas.

• **Buffer de carga para ácidos nucleicos:** Contiene Tris, azul de bromofenol, azul de xileno y glicerol.
• **Buffer de carga para proteínas:** Contiene Tris-HCL (pH 6.8), ditiotritiol (DTT), dodecilsulfato de sodio (SDS), glicerol y azul de bromofenol.

Transiluminador Ultravioleta

El transiluminador ultravioleta emite luz UV que permite visualizar los ácidos nucleicos teñidos con bromuro de etidio u otros fluoróforos en el gel de agarosa. Es un sistema simple y efectivo para la visualización de resultados.

Tipos de Electroforesis

Electroforesis Horizontal

Se utiliza con gel de agarosa para la separación de ácidos nucleicos. El buffer puede cubrir completamente el gel (electroforesis submarina) o solo la parte inferior (carga en seco).

Electroforesis Vertical

Se utiliza exclusivamente con gel de poliacrilamida para la separación de proteínas o ácidos nucleicos de pequeño tamaño. El gel se coloca entre dos placas de vidrio y se sumerge completamente en el buffer.

Procedimiento General de una Electroforesis

1. **Preparación del gel:** Preparar el gel de agarosa o poliacrilamida a la concentración adecuada.
2. **Preparación de la muestra:** Mezclar las muestras con el buffer de carga correspondiente.
3. **Carga de la muestra:** Cargar las muestras en los pocillos del gel.
4. **Corrida electroforética:** Aplicar el voltaje adecuado para la separación de las moléculas.
5. **Visualización:** Visualizar los ácidos nucleicos o proteínas utilizando métodos de tinción apropiados.