Espectroscopía y Técnicas Ópticas en Química: Fundamentos y Aplicaciones

Espectroscopía de Absorción Atómica

La espectroscopía de absorción atómica (EAA) es una técnica óptica de espectroscopía que se basa en el intercambio de energía entre la radiación electromagnética y la materia. Estos cambios se deben a transiciones entre distintos niveles energéticos, desde niveles fundamentales a niveles excitados.

Preparación de la Muestra

Los analitos se encuentran en la muestra de forma ionizada y deben transformarse en átomos. Para ello, existen dos posibilidades, dependiendo de la naturaleza de la muestra:

• Muestras gaseosas o líquidas: Se utiliza el sistema de llama, un sistema de medida continuo y el más utilizado. Se aspira la muestra por un capilar hasta llegar a una cámara de mezclado, donde se forman aerosoles que se mezclan con el combustible y el comburente (agente oxidante). En el interior de la cámara, unos deflectores reducen el tamaño de las partículas. La mezcla pasa a la llama, donde se produce una desolvatación, secado o evaporación rápida del líquido que contiene el analito, seguida de una volatilización y, finalmente, la atomización, donde se rompen los enlaces del analito, transformándolo en átomos elementales, la especie absorbente. Se debe evitar la excitación excesiva o la ionización de estos átomos, ya que no absorberán. La temperatura debe estar controlada.
• Muestras líquidas o sólidas: Se utiliza la atomización electrotérmica, un sistema de medida discreto. Se sitúa una alícuota de la muestra en un horno de grafito y se somete a un programa de cambio de temperatura, como la calcinación (destrucción de la matriz sólida) y la atomización.

Fundamento

Los átomos se encuentran en su estado fundamental (ni excitados ni ionizados) en una nube atómica, donde son capaces de absorber radiación UV-Vis. Se hace pasar a través de la nube atómica una radiación de λ determinada, correspondiente a una línea del espectro de absorción del átomo absorbente (identificación). Los átomos absorbentes pasan del estado electrónico fundamental a un estado excitado (salto de electrones externos del átomo a un nivel electrónico superior). A mayor absorción, mayor concentración de átomos en la nube atómica y, por tanto, mayor concentración del analito en la muestra original (cuantificación).

Componentes

• Fuente monocromática (contiene el elemento a determinar)
• Dispositivo atomizador (llama o electrotérmico)
• Monocromador (selector λ)
• Detector

Aplicaciones

Se utiliza para la determinación de metales pesados como los alcalinotérreos (Ca, Cu, Pb).

Espectroscopía de Absorción Molecular

La espectroscopía de absorción molecular es una técnica óptica de espectroscopía que se basa en el intercambio de energía entre la radiación electromagnética y la materia. Estos cambios se deben a transiciones entre distintos niveles energéticos, desde niveles fundamentales a niveles excitados.

Preparación de la Muestra

La preparación de la muestra puede realizarse de dos formas:

• Directa: Cuando el analito es una molécula que absorbe a una λ del espectro UV-Vis, se dispone una alícuota directamente de la muestra en la cubeta.
• Mediante reacción química: Cuando el analito es una molécula que no absorbe a una λ del espectro UV-Vis, se hace reaccionar una alícuota de la muestra con reactivos específicos para obtener un producto que sí absorba a una λ del espectro UV-Vis, que luego se coloca en la cubeta.

Fundamento

Las moléculas son capaces de absorber la radiación UV-Vis en una cubeta. Se hace pasar a través de la cubeta la radiación de λ correspondiente a una banda del espectro de absorción de la molécula absorbente (identificación). Las moléculas absorbentes presentes en la cubeta pasan del estado electrónico fundamental a un estado excitado (debido al salto de electrones de enlace a un nivel electrónico superior). A mayor absorbancia, mayor concentración de la molécula absorbente y mayor cantidad de analito (cuantificación).

Componentes

• Fuente de energía
• Rendijas de entrada y salida
• Sistema selector de λ
• Cubeta
• Detector (monocromador)
• Dispositivo de lectura

Aplicaciones

Se utiliza para el análisis de moléculas con dobles y/o triples enlaces, conjugados que proceden de analitos de interés bioquímico (glucosa, colesterol, triglicéridos).

Espectroscopía de Emisión Atómica

La espectroscopía de emisión atómica (EEA) es una técnica basada en la espectroscopía de emisión. Este fenómeno se produce cuando los átomos son excitados y se relajan a niveles menos energéticos, emitiendo energía en forma de fotones. Cada desplazamiento se corresponde con una determinada cantidad de energía o máximo de emisión que forma parte del espectro de emisión. Para cada elemento existe un número de desplazamientos posibles, dependiendo de su configuración electrónica.

Preparación de la Muestra

Los analitos se encuentran en la muestra de forma ionizada y deben transformarse en átomos excitados.

• Muestras gaseosas o líquidas: Se utiliza el sistema de llama (igual que en absorción atómica). El último paso es la excitación, donde los átomos presentes en la nube atómica pasan del estado electrónico fundamental a un estado excitado (salto de electrones externos del átomo a un nivel electrónico superior). Se debe evitar que se ionicen, ya que no emitirán.
• Muestras líquidas o sólidas: Se utiliza la emisión de plasma. Es necesario una antorcha de gas inerte donde los electrones alcanzan altas temperaturas.

Fundamento

Los átomos excitados (no ionizados) en una nube atómica son capaces de emitir radiación UV-Vis. Los átomos excitados se relajan y pasan del estado excitado al estado fundamental, emitiendo la misma λ, perteneciente a su espectro de emisión (identificación). A mayor emisión, mayor concentración de átomos en la nube atómica y, por tanto, mayor concentración de analito en la muestra (cuantificación).

Componentes

• Atomizador-excitador (llama)
• Sistema de selección de λ (monocromador)
• Fotodetectores

Aplicaciones

Se utiliza para la detección de metales ligeros como los alcalinos (Li, Na, K).

Fluorescencia Atómica

La fluorescencia atómica es una técnica basada en la espectroscopía de emisión tras absorción de radiación. Se produce cuando los átomos son excitados mediante una radiación electromagnética UV-Vis de una λ correspondiente a su espectro de absorción y se relajan a niveles menos energéticos, emitiendo energía en forma de fotones de la misma λ (se corresponde a su espectro de emisión).

Preparación de la Muestra

Los analitos se encuentran en la muestra de forma ionizada y deben transformarse en átomos. Se utiliza el sistema de llama (igual que en absorción atómica). La excitación se realiza con la fuente, que se encuentra de manera perpendicular al monocromador. Esto es importante porque la luz que no se absorbe no se tiene en cuenta, ya que se libera y no se suma con la luz emitida, que es la que se mide.

Fundamento

Los átomos se encuentran en estado fundamental (ni excitados ni ionizados) en una nube atómica, donde son capaces de absorber radiación UV-Vis y emitir a continuación la radiación de la misma λ. Se hace pasar a través de la nube atómica la radiación de λ correspondiente a una línea del espectro de absorción del átomo absorbente. Los átomos presentes en la nube atómica pasan del estado electrónico fundamental a un estado excitado (salto de electrones externos del átomo a un nivel electrónico superior). Los átomos excitados se relajan y pasan del estado excitado al fundamental, emitiendo la misma λ, perteneciente a su espectro de emisión (identificación). A mayor emisión, mayor concentración de los átomos en la nube atómica y, por lo tanto, mayor concentración del analito en la muestra original (cuantificación).

Componentes

• Fuente policromática
• Sistema de selección de λ (monocromador)
• Cubeta con muestra
• Monocromador
• Detector

Tanto la fuente como el primer monocromador se disponen perpendiculares a la cubeta.

Aplicaciones

Se utiliza para la medición de Zn, Hg, Se…

Fluorescencia Molecular

La fluorescencia molecular es una técnica basada en la espectroscopía de emisión tras absorción de radiación. Se produce cuando las moléculas son excitadas mediante una radiación electromagnética UV-Vis, a una λ correspondiente a su espectro de absorción y se relajan a niveles menos energéticos, emitiendo energía en forma de fotones de mayor λ (energía menor). El espectro de emisión será en banda, espectro continuo.

Preparación de la Muestra

Los analitos más comunes no suelen ser fluorescentes ni fosforescentes, por lo que se pueden realizar dos preparaciones mediante reacción química:

• Derivatización: Se hace reaccionar una alícuota de la muestra con reactivos específicos para obtener un producto que sí emita radiación de fluorescencia. A continuación, se dispone en la cubeta.
• Fluoroinmunoanálisis: Se hace reaccionar el analito (proteína) con un anticuerpo marcado con un ligando fluorescente (fluoresceína). A continuación, se mide mediante algún tipo de inmunoensayo.

Las moléculas fluorescentes tienen estructuras planas, con rigidez. Los posibles saltos son de π a π* excitado y de n a π* excitado. También deben ser moléculas con dobles y/o triples enlaces, conjugados.

Fundamento

Las moléculas son capaces de absorber radiación UV-Vis, excitarse a un estado electrónico superior y, a continuación, relajarse y emitir radiación de λ igual o inferior a la absorbida en una cubeta. Se hace pasar a través de la cubeta una radiación de λ correspondiente a una banda del espectro de absorción de la molécula absorbente (identificación). Las moléculas absorbentes presentes en la cubeta pasan del estado electrónico fundamental a un estado excitado. Las moléculas excitadas se relajan y pasan del estado excitado al fundamental, emitiendo una λ igual o inferior a la absorbida y perteneciente a su espectro de emisión. A mayor emisión, mayor concentración de la molécula y, por tanto, mayor cantidad de analito (cuantificación).

Componentes

• Fuente de energía
• Selector λ (monocromador)
• Cubeta con muestra
• Monocromador
• Detector

Aplicaciones

Se utiliza para el análisis de moléculas con dobles y/o triples enlaces, conjugados y de estructura rígida que proceden de analitos de interés bioquímico. Proteínas determinadas por fluoroinmunoanálisis.

Fundamentos Adicionales

Fundamento de Absorción Atómica

Los átomos se encuentran en su estado fundamental (ni excitados ni ionizados) en una nube atómica, donde son capaces de absorber radiación UV-Vis. Se hace pasar a través de la nube atómica una radiación de λ determinada, correspondiente a una línea del espectro de absorción del átomo absorbente (identificación). Los átomos absorbentes pasan del estado electrónico fundamental a un estado excitado (salto de electrones externos del átomo a un nivel electrónico superior). A mayor absorción, mayor concentración de los átomos en la nube atómica y, por tanto, mayor concentración del analito en la muestra original (cuantificación).

Fundamento de Fluorimetría Molecular

Las moléculas son capaces de absorber radiación UV-Vis, excitarse a un estado electrónico superior y, a continuación, relajarse y emitir radiación de λ igual o inferior a la absorbida en una cubeta. Se hace pasar a través de la cubeta una radiación de λ correspondiente a una banda del espectro de absorción de la molécula absorbente (identificación). Las moléculas absorbentes presentes en la cubeta pasan del estado electrónico fundamental a un estado excitado. Las moléculas excitadas se relajan y pasan del estado excitado al fundamental, emitiendo una λ igual o inferior a la absorbida y perteneciente a su espectro de emisión. A mayor emisión, mayor concentración de la molécula y, por tanto, mayor cantidad de analito (cuantificación).

Fundamento de Nefelometría

Se hace pasar a través de la cubeta una radiación de λ de acuerdo al tamaño de la partícula y se utilizará una reacción específica que transforme el analito en partículas (identificación). La partícula absorbe una parte, otra parte la refleja, otra pasa a través de la cubeta y la transmite. Se mide la luz dispersada en ángulo de 90º o 15º. A mayor dispersión, mayor concentración de partículas y, por lo tanto, mayor cantidad de moléculas en la muestra (cuantificación).

Preparación de Muestras

Preparación de Muestra para Espectroscopía de Emisión Atómica con Llama

Los analitos se encuentran en la muestra de forma ionizada y deben transformarse en átomos excitados. Se utilizan muestras gaseosas o líquidas. Se emplea el sistema de llama (igual que en absorción atómica). El último paso es la excitación, donde los átomos presentes en la nube atómica pasan del estado electrónico fundamental a un estado excitado (salto de electrones externos del átomo a un nivel electrónico superior). Se debe evitar que se ionicen, ya que no emitirán.

Preparación de Muestra para Fluorimetría Molecular

Los analitos más comunes no suelen ser fluorescentes ni fosforescentes, por lo que se pueden realizar dos preparaciones mediante reacción química:

• Derivatización: Se hace reaccionar una alícuota de la muestra con reactivos específicos para obtener un producto que sí emita radiación de fluorescencia. A continuación, se dispone en la cubeta.
• Fluoroinmunoanálisis: Se hace reaccionar el analito (proteína) con un anticuerpo marcado con un ligando fluorescente (fluoresceína). A continuación, se mide mediante algún tipo de inmunoensayo.

Las moléculas fluorescentes tienen estructuras planas, con rigidez. Los posibles saltos son de π a π* excitado y de n a π* excitado. También deben ser moléculas con dobles y/o triples enlaces, conjugados.

Preparación de Muestra para Reflectometría

Los reactivos de química seca constituyen la manera de introducir la muestra en los fotómetros de reflexión. La muestra se distribuye en la capa difusora y comienza a atravesar la capa reactiva. El analito reacciona con los reactivos específicos de la capa reactiva, generando un producto que absorbe la radiación UV-Vis. El producto continúa hasta la capa indicadora del slide (formado por capa difusora, capa reacción, capa indicadora y soporte).

Secuencia de Componentes

Secuencia de Componentes para Fluorimetría Molecular

Fuente de luz, sistemas ópticos (lentes, espejos y filtros), reactivos de fase sólida (slide), detector de luz reflejada.

Secuencia de Componentes para Nefelometría

Fuente de energía radiante, selector de λ (monocromador), cubeta, selector λ detección y sistema de detección (0º turbidimetría, 90-15º en nefelometría).

Secuencia de Componentes para Bioluminiscencia

Cubeta y detector (luminómetro).

Preparación de Muestras para Técnicas Específicas

Preparación de Muestra para Inmunoturbidimetría

Los requerimientos en lo que a la suspensión se refiere son comunes para ambas técnicas. Lo principal es que la suspensión sea estable y homogénea durante el intervalo de tiempo requerido para la medida. La formación de las partículas se puede realizar mediante reacción química de precipitación, donde se precipita el analito con un agente precipitante y se obtienen partículas en suspensión que a continuación se disponen en la cubeta. También se pueden conseguir mediante inmunonefelometría o inmunoturbidimetría, donde se hace reaccionar el analito con su Ac, obteniendo una partícula en forma de complejo Ag-Ac, que a continuación se coloca en la cubeta.

Preparación de Muestra para Luminoinmunoanálisis

Directamente se puede hacer reaccionar la molécula a medir o el analito de forma que produzca ATP o NADH. El ATP o NADH, cuya concentración es directamente proporcional al analito, se emplea en una segunda reacción acoplada de reacción de oxidación-reducción (exotérmica) con un reactivo bioluminiscente (luciferina en presencia de la enzima luciferasa). El ATP es una coenzima de la luciferasa, por lo que influirá en la reacción. La reacción desprende energía y el producto queda excitado. Los electrones bajan a su nivel fundamental, emitiendo luz, cuya intensidad será directamente proporcional a la cantidad de producto formado y esto, a su vez, proporcional a la concentración de analito. También se puede realizar por inmunobioluminiscencia, donde se utilizan reacciones Ag-Ac con anticuerpos marcados con reactivos bioluminiscentes (luminol, peroxidasa).

Preparación y Fundamento de Quimioluminiscencia

Fundamento: El producto de la reacción de oxidación de la reacción quimioluminiscente está excitado. Los electrones de enlace se encuentran en un nivel electrónico superior y se sitúan en la cubeta de reacción. Los productos excitados se relajan y pasan del estado excitado al estado fundamental, emitiendo una λ. Al seleccionar una reacción inicial que sea específica del analito a determinar, con una enzima específica, por ejemplo (identificación). A mayor emisión, mayor concentración de producto y mayor concentración de analito en la muestra original (cuantificación).

Preparación de la muestra: Se utiliza una reacción en la que intervenga el analito y se produzca O2 o H2O2. Este O2 o H2O2 de la primera reacción, cuya concentración es directamente proporcional al analito, se emplea en una segunda reacción acoplada, una reacción de oxidación-reducción (exotérmica) con un reactivo quimioluminiscente como el luminol. La reacción desprende energía y el producto queda excitado. También se puede realizar por medio de la inmunoquimioluminiscencia, donde se utilizan reacciones Ag-Ac marcados con reactivos quimioluminiscentes. Se trata de una segunda reacción de oxidación-reducción en la que el producto formado ya está excitado. El H2O2, cuya concentración es directamente proporcional al analito, se emplea en una segunda reacción acoplada en la que interviene el luminol.

Quimioluminiscencia

La quimioluminiscencia es una técnica basada en la emisión con excitación mediante reacción química. Se origina cuando se produce una especie excitada como consecuencia de una reacción química que emite radiación electromagnética en la zona UV. No se necesita excitación luminosa. Su fundamento es químico. Usualmente se emplean reacciones redox que involucran el O2 o H2O2 y un sustrato orgánico oxidable como el luminol. La energía se libera por estas radiaciones exotérmicas y se emite en forma de luz en lugar de calor.

Preparación de la Muestra

Se utiliza una reacción en la que intervenga el analito y se produzca O2 o H2O2. Este O2 o H2O2 de la primera reacción, cuya concentración es directamente proporcional al analito, se emplea en una segunda reacción acoplada, una reacción de oxidación-reducción (exotérmica) con un reactivo quimioluminiscente como el luminol. La reacción desprende energía y el producto queda excitado. También se puede realizar por medio de la inmunoquimioluminiscencia, donde se utilizan reacciones Ag-Ac marcados con reactivos quimioluminiscentes. Se trata de una segunda reacción de oxidación-reducción en la que el producto formado ya está excitado. El H2O2, cuya concentración es directamente proporcional al analito, se emplea en una segunda reacción acoplada en la que interviene el luminol.

Fundamento

El producto de la reacción de oxidación de la reacción quimioluminiscente está excitado. Los electrones de enlace se encuentran en un nivel electrónico superior y se sitúan en la cubeta de reacción. Los productos excitados se relajan y pasan del estado excitado al estado fundamental, emitiendo una λ. Al seleccionar una reacción inicial que sea específica del analito a determinar, con una enzima específica, por ejemplo (identificación). A mayor emisión, mayor concentración de producto y mayor concentración de analito en la muestra original (cuantificación).

Componentes

Cubeta y detector (luminómetro).

Aplicaciones

Bioquímica básica y proteómica.

Bioluminiscencia

La bioluminiscencia es una técnica basada en la emisión con excitación mediante reacción química. Es una forma particular que se observa en organismos vivos, en las que una enzima aumenta la eficacia de la reacción quimioluminiscente. Para ello se utilizan sustratos como la luciferina. La enzima implicada es la luciferasa.

Preparación de la Muestra

Directamente se puede hacer reaccionar la molécula a medir o el analito de forma que produzca ATP o NADH. El ATP o NADH, cuya concentración es directamente proporcional al analito, se emplea en una segunda reacción acoplada de reacción de oxidación-reducción (exotérmica) con un reactivo bioluminiscente (luciferina en presencia de la enzima luciferasa). El ATP es una coenzima de la luciferasa, por lo que influirá en la reacción. La reacción desprende energía y el producto queda excitado. Los electrones bajan a su nivel fundamental, emitiendo luz, cuya intensidad será directamente proporcional a la cantidad de producto formado y esto, a su vez, proporcional a la concentración de analito. También se puede realizar por inmunobioluminiscencia, donde se utilizan reacciones Ag-Ac con anticuerpos marcados con reactivos bioluminiscentes (luminol, peroxidasa).

Fundamento

El producto de la reacción de oxidación de la reacción bioluminiscente está excitado. Los electrones de enlace se encuentran en un nivel electrónico superior y se sitúan en la cubeta de reacción. Los productos excitados se relajan y pasan del estado excitado al estado fundamental, emitiendo una λ. Al seleccionar una reacción inicial que sea específica del analito a determinar, con una enzima específica, por ejemplo (identificación). A mayor emisión, mayor concentración de producto y mayor concentración de analito en la muestra original (cuantificación).

Componentes

Cubeta y detector (luminómetro).

Aplicaciones

Bioquímica básica y proteómica.

Turbidimetría

La turbidimetría es la medida de la disminución de la intensidad de un haz de luz incidente causada por dispersión, reflexión y absorción de la luz cuando pasa a través de una suspensión de partículas. Suele emplearse para concentraciones altas de la sustancia a medir.

Preparación de la Muestra

Los requerimientos en lo que a la suspensión se refiere son comunes para ambas técnicas. Lo principal es que la suspensión sea estable y homogénea durante el intervalo de tiempo requerido para la medida. La formación de las partículas se puede realizar mediante reacción química de precipitación, donde se precipita el analito con un agente precipitante y se obtienen partículas en suspensión que a continuación se disponen en la cubeta. También se pueden conseguir mediante inmunonefelometría o inmunoturbidimetría, donde se hace reaccionar el analito con su Ac, obteniendo una partícula en forma de complejo Ag-Ac, que a continuación se coloca en la cubeta.

Fundamento

Se hace pasar a través de la cubeta una radiación de λ de acuerdo al tamaño de la partícula y se utilizará una reacción específica que transforme el analito en partículas (identificación). La partícula absorbe una parte de la radiación, otra parte la refleja, otra parte se dispersa en todas las direcciones y otra parte pasa a través de la cubeta y se transmite. Se mide la luz transmitida en ángulo de 0º. A mayor transmitancia, menor dispersión, menor concentración de partículas y, por lo tanto, menos cantidad de moléculas en la muestra (cuantificación).

Componentes

Fuente de energía radiante, selector de λ (monocromador), cubeta, selector λ detección y sistema de detección (0º turbidimetría, 90-15º en nefelometría).

Aplicaciones

Proteómica (proteínas de interés clínico, inmunoturbidimetría)

Nefelometría

La nefelometría es la medida de la luz dispersada en ángulos distintos al de incidencia (normalmente 15 o 90º). La medida se realiza en aparatos diseñados con el sistema de detección situado a ángulos predeterminados. La nefelometría, a diferencia de la turbidimetría, precisa de aparatos diseñados exclusivamente para esta técnica. Suele emplearse para concentraciones bajas de la sustancia a medir, que dan lugar a poca turbidez.

Preparación de la Muestra

Los requerimientos en lo que a la suspensión se refiere son comunes para ambas técnicas. Lo principal es que la suspensión sea estable y homogénea durante el intervalo de tiempo requerido para la medida. La formación de las partículas se puede realizar mediante reacción química de precipitación, donde se precipita el analito con un agente precipitante y se obtienen partículas en suspensión que a continuación se disponen en la cubeta. También se pueden conseguir mediante inmunonefelometría o inmunoturbidimetría, donde se hace reaccionar el analito con su Ac, obteniendo una partícula en forma de complejo Ag-Ac, que a continuación se coloca en la cubeta.

Fundamento

Se hace pasar a través de la cubeta una radiación de λ de acuerdo al tamaño de la partícula y se utilizará una reacción específica que transforme el analito en partículas (identificación). La partícula absorbe una parte, otra parte la refleja, otra pasa a través de la cubeta y la transmite. Se mide la luz dispersada en ángulo de 90º o 15º. A mayor dispersión, mayor concentración de partículas y, por lo tanto, mayor cantidad de moléculas en la muestra (cuantificación).

Componentes

Fuente de energía radiante, selector de λ (monocromador), cubeta, selector λ detección y sistema de detección (0º turbidimetría, 90-15º en nefelometría).

Aplicaciones

Proteómica (proteínas de interés clínico, inmunonefelometría).

Reflectometría

La reflectometría es una técnica basada en la reflexión difusa. Cuando un haz de luz incide sobre una superficie, la luz es reflejada por esta superficie, produciéndose a la vez dos tipos de reflexión. Por un lado, tenemos la reflexión especular, donde la luz es reflejada como lo haría en un espejo. Y, por otro lado, una reflexión difusa (reflectancia) que consiste en la reflexión producida al penetrar la luz en las capas internas de la superficie iluminada. Dentro de la fase sólida, la luz sufre una serie de fenómenos de absorción y dispersión.

Preparación de la Muestra

Los reactivos de química seca constituyen la manera de introducir la muestra en los fotómetros de reflexión. La muestra se distribuye en la capa difusora y comienza a atravesar la capa reactiva. El analito reacciona con los reactivos específicos de la capa reactiva, generando un producto que absorbe la radiación UV-Vis. El producto continúa hasta la capa indicadora del slide (formado por capa difusora, capa reacción, capa indicadora y soporte).

Fundamento

El producto que absorbe la radiación UV-Vis se hace incidir sobre el slide hasta la capa indicadora mediante una radiación λ correspondiente a una banda del espectro de absorción producto de la reacción química seca (identificación). Las moléculas absorbentes en la cubeta pasan del estado electrónico fundamental a un estado excitado. A mayor absorción, mayor concentración de la molécula absorbente y, por tanto, mayor cantidad de analito (cuantificación).

Componentes

Fuente de luz, sistemas ópticos (lentes, espejos y filtros), reactivos de fase sólida (slide), detector de luz reflejada.

Aplicaciones

Bioquímica básica en urgencias. Proteómica.