Función del tampón de electroforesis

electroforesis En gel de agarosa: no solo evita la difusión, ya que modificando los Componentes del gel pueden conseguirse diferente tamaño de poro y la separación Se produce por carga y tamaño. Estos geles permiten separar moléculas de adn y Proteínas. La agarosa es un polisacárido cuyas disoluciones (1,3% Concentración) permanecen líquidas por encima de 50ºc y forman un gel Semisólido cuando se enfría. el gel es Difícil de obtener. Para hacerlo: hidratar la agorosa con tampón 10 min, Llevar la disolución a ebullición y enfriar a 55ºc, echar la disolución en el Molde, al enfriar la disolución se gelifica, se hacen los pocillos de isempra Con un peine, este se coloca despúes de colocar la disolución o antes de poner El gel. reacctivos:- las soluciones Tampón son tris-acetato 0,04m a ph 8, o tbe 5x,- la sustancia que actúa como Reveladora es bromuro de etidio que se encuentra entre las bases del adn y Emite fluorescencia cuando se le aplica rayos uv. Se puede añadir al gen cuando Se separa. -marcadores de peso molecular: tienen adn de un tamaño determinado y Se usan como patrones para el control de la electroforesis. Pasos: colocar el Tampón en la cubeta y sumerguir el gel así se expande el calor y se consigue un Campo muy buen campo eléctrico, se quita el peine dejando los pocillos marcados Y descubiertos, se llenan los pocillos con 5 ul de la muestra usando una Micropipeta poniendo marcadores en los pocillos de los extremos, tapar y Conectar a la fuente de alimentación ajustando tiempo e intensidad de la Corriente (5v por cm de separación entre electrodos), la finalización la Indican los marcadores. revelado: retirar La tira de la cubeta y añadir bromuro de etidio si no lo hemos puesto Anteriormente en el gel, se coloca el gel en el transiluminador de luz uv y Sacamos foto con la cámara incorporada al aparato ya que las bandas solo son Visibles mientras el gel se ilumina, se procesan las imágenes y se calcula así Su concentración mientras que el tamaño del adn se conoce por la comparación Con el peso molecular. page: se forman Por polimerización de la acrilamida con bisacrilamida, la bisacrilamida afecta Al grado de entrecruzamiento de las cadenas mientras que la acrilamida afecta Al soporte, la acrilamida varía del 3 al 30%, %bajo poro grande para separar Proteínas y fragmentos grandes de adn, %alto poros pequeños para separar Fragmentos pequeños de a adn. Se elabora la disolución con las concentraciones Adecuadas de los componentes antes de que el gel se forme hacemos los pocillos Con el peine. Tipos: page en Condiciones no desnaturalizantes: las condiciones permiten que al separar Las proteínas no se dasturalicen, lo que permite que al acabarse la Electroforesis hacer estudios de cómo funcionan las proteínas. page en condiciones desnaturalizantes: El tampón tiene sustancias que provocan la desnaturalización de las proteínas. Un tipo es el page-sds, que usa sds, un detergente que se une en las zonas Polares de la molécula (1 molécula de sds por cada dos aminoácidos lo que Proporciona una carga negativa proporcional al número de aminoácidos y a la mm De la proteína.