Fundamentos y Aplicación de la Reacción de Biuret en Proteínas

Reacción de Biuret.
El nombre de la reacción procede del compuesto coloreado formado por la condensación de dos moléculas de úrea con eliminación de Amóníaco. Esta reacción está dada por aquellas sustancias cuyas moléculas contienen dos grupos carbamino (-CO.NH) unidos directamente o a través de un solo átomo de carbono o nitrógeno. El reactivo de Biuret contiene Cu2SO4 en solución acuosa alcalina (gracias a la presencia de NaOH o KOH). La reacción se basa en la formación de un complejo de coordinación entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos. Esta última reacción provoca un cambio de coloración: violeta púrpura o violeta rosado. Debe señalarse que el color depende de la naturaleza de las proteínas; proteínas y péptidos dan un color rosado; la gelatina da un color azul. El sulfato alcalino cúprico reacciona con compuestos que contienen dos o más enlaces peptídicos dando un complejo de coloración más o menos violeta. La intensidad del color obtenido es una medida del número de enlaces peptídicos presentes en la proteína.1. Hidrólisis de las proteínas,
La hidrolisis de las proteínas termina por fragmentarlas en a -aminoácidos. Existen 3 tipos de hidrolisis :
* Hidrolisis ácida : Se basa en la ebullición prolongada de la proteína con soluciones ácida fuertes (HCl y H2SO4). Este método destruye completamente el triptófano y parte de la serina y la treonina.
* Hidrolisis básica : Respeta los aminoácidos que se destruyen por la hidrolisis anterior, pero con gran facilidad, forma racematos. Normalmente se utiliza (NaOH e BaOH).
* Hidrolisis enzimática : Se utilizan enzimas proteolíticas cuya actividad es lenta y a menudo incompleta, sin embargo no se produce racemización y no se destruyen los aminoácidos; por lo tanto es muy específica. El polipéptido a analizar es primeramente hidrolizado con un ácido fuerte a 110 °C por aproximadamente 24 h. Este tratamiento rompe los enlaces peptídicos y libera a los aminoácidos. A partir de este tratamiento, los aminoácidos con cadenas laterales básicas, se liberan como sus ácidos conjugados (aspartato y glutamato) y el triptofano se destruye casi completamente.