Fundamentos del Cultivo Microbiano en Condiciones Anaeróbicas

Cultivo en Condiciones Anaeróbicas

Se considera **microorganismo anaerobio estricto** a todo aquel incapaz de desarrollarse en contacto con el oxígeno a concentraciones superiores al **0,5%**. Las bacterias anaeróbicas no crecen en medios de cultivo normales debido a que presentan unas exigencias nutritivas mayores, ya que el **metabolismo anaerobio** es menos eficaz que el aeróbico.

Requerimientos Nutricionales y Ambientales

Generalmente, estos microorganismos precisan medios con una elevada proporción de **peptonas** e **hidratos de carbono**. Asimismo, es fundamental que el medio presente un **bajo potencial redox**.

• Los medios de cultivo deben incorporar un **compuesto reductor** (como tioglicolato, ácido ascórbico o cisteína) para disminuir el contenido de oxígeno.

Importancia Clínica de los Anaerobios

Hasta hace pocos años, los microorganismos anaerobios conocidos procedían principalmente del medio ambiente y producían infecciones invasivas y proteolíticas. Ejemplos notables incluyen:

• Clostridium tetani: Capaz de producir el tétanos.
• Clostridium septicum: Responsable de la gangrena gaseosa.
• Clostridium perfringes y Clostridium botulinum: Capaces de producir intoxicaciones alimentarias.

Interacción con Aerobios

Los microorganismos aerobios humanos son saprofitos en muchas zonas de nuestro organismo, donde se establece un equilibrio. Sin embargo, en **lesiones importantes y profundas**, se produce una invasión de bacterias aerobias que consumen el O₂ y establecen las condiciones propicias para el crecimiento anaeróbico.

Las bacterias anaeróbicas crecen bien en medios que contienen algún **antibiótico**, ya que presentan resistencia, un factor que puede ayudar a su identificación. El uso creciente de antibióticos en dosis cada vez más elevadas ha aumentado su incidencia y el interés por su estudio.

Métodos de Cultivo en Anaerobiosis

Para realizar un cultivo en condiciones de anaerobiosis se pueden emplear los siguientes métodos:

1. Siembra en Profundidad (Doble Capa)

No es muy eficaz porque el O₂ difunde rápidamente a través del medio.

2. Siembra en Tubo con Medio Sólido

Se transfiere el inóculo con pipeta o asa de siembra a un tubo con el medio de cultivo fundido (a 45-50ºC). Es crucial dejar solidificar el agar antes de poner los tubos a incubar.

3. Siembra en Tubo con Medio Líquido

Se transfiere el inóculo a un tubo con caldo y se añade una capa de **vaselina estéril** para cubrir totalmente la superficie del caldo e impedir la difusión de O₂ al medio. Antes de inocular, es conveniente hervir el medio durante 10 minutos para liberar el O₂ disuelto.

4. Utilización de Jarras de Anaerobios

Estos métodos consiguen condiciones de anaerobiosis más estrictas que los anteriores. Son jarras con cierre hermético que disponen de:

• Un **generador de hidrógeno** (reacción H₂ + O₂ → H₂O).
• Un **indicador de anaerobiosis redox** (por ejemplo, papel filtro impregnado con azul de metileno, que se vuelve incoloro cuando se reduce).

5. Método de la Vela

Consiste en colocar las placas y los tubos sembrados junto con una vela encendida (mariposa) en el interior de un frasco con tapa de rosca. Al cerrar el frasco, la vela se apaga, logrando así una atmósfera anaerobia.

Aislamiento de Clostridium

Las bacterias del género Clostridium son bacilos **Gram positivos**, **esporulados** y **anaeróbicos estrictos** con metabolismo fermentativo. Como la mayoría de los anaeróbicos estrictos, los clostridios no poseen coenzimas hemiticas y son **catalasa negativos**.

Una de las características más importantes de los clostridios es su capacidad para **fermentar azúcar**.

Componentes de un sistema de cultivo (ejemplo de jarra): Tapa, catalizador, soporte del catalizador, placas de cultivo e indicador.