Fundamentos Esenciales en Biología Molecular y Genética de Laboratorio

Seguridad y Prácticas en el Laboratorio

• En la fase analítica se realiza la medición y el análisis de la muestra.
• La zona pre-PCR incluye termocicladores, reactivos y equipos que se utilizan para la amplificación y el análisis de productos de PCR.
• Es importante recordar que no se deben usar cremas en áreas de laboratorio donde puedan interferir con los procesos o contaminar las muestras.
• Los accidentes más habituales en un laboratorio involucran objetos punzantes.
• La diaminobencidina (DAB) puede provocar irritaciones.

Conceptos Clave en Biología Celular y Genética

El Ciclo Celular y la Genética Humana

• El ciclo celular se divide en las fases G1, G2 y M (mitosis).
• La biopsia corial se lleva a cabo entre el tercer y el cuarto mes de gestación (específicamente, entre las semanas 11 y 13).
• La obtención de sangre periférica para cultivos celulares es un procedimiento sencillo y requiere una cantidad reducida de muestra.
• Las contaminaciones en cultivos son más frecuentes y se deben principalmente al propio personal y sus bacterias, además de la atmósfera del laboratorio.
• El cariotipo humano consta de 46 cromosomas: 23 pares, de los cuales 22 pares son autosomas y 1 par son cromosomas sexuales.
• En el bandeo cromosómico, solo la banda G se tiñe con Giemsa.
• T: Translocación recíproca. TEL: Esta abreviatura puede referirse a regiones teloméricas o a un gen específico (por ejemplo, el gen ETV6/TEL, implicado en translocaciones).

Anomalías Cromosómicas y Expresión Génica

• Un complemento cromosómico euploide es aquel que tiene una cantidad de cromosomas que es un múltiplo exacto del número haploide.
• Una aneuploidía puede manifestarse como una trisomía (un cromosoma extra) o una monosomía (la ausencia de un cromosoma).
• Para la generación de las proteínas, existen dos etapas fundamentales: la transcripción y la traducción.
• La desnaturalización de los ácidos nucleicos se produce cuando se separan las dos hebras de la doble hélice del ADN.
• Las endonucleasas son enzimas capaces de reconocer secuencias específicas de 4 a 8 pares de bases (pb) en el ADN.

Técnicas Fundamentales en Biología Molecular

Extracción y Amplificación de ADN

• Existen cuatro métodos principales de extracción de ácidos nucleicos basados en kits comerciales.
• Entre las variantes de la PCR, encontramos la PCR anidada. (Nota: La mención de "digestión" en este contexto podría referirse a técnicas como RFLP, no directamente a la PCR anidada).
• El termociclador se utiliza para la amplificación de ADN.
• Para comprobar el éxito de la amplificación por PCR, los productos resultantes se visualizan y miden mediante electroforesis.
• La PCR, el análisis de agentes infecciosos o la RFLP (Polimorfismo de Longitud de Fragmentos de Restricción) son técnicas distintas con aplicaciones variadas.

Sondas, Hibridación y Clonación

• Una sonda molecular de ADN es una molécula homóloga a la secuencia diana, diseñada para hibridar con ella.
• Las sondas de ADN que se obtienen mediante ADN recombinante se consiguen por clonación y amplificación en cultivo.
• Las sondas directas no pueden marcarse con los métodos mencionados anteriormente (esta afirmación es ambigua y depende del contexto específico de "sonda directa").
• Los marcadores radiactivos no son los únicos más empleados; existen también marcadores no radiactivos.
• La temperatura de fusión (Tm) es aquella en la que, durante la desnaturalización, los puentes de hidrógeno están fracturados o las cadenas se han separado.
• La hibridación no solo se produce en fase líquida; también puede ocurrir en fase sólida (por ejemplo, hibridación in situ).
• El proceso de clonación molecular generalmente incluye las siguientes etapas:
  1. Restricción (corte del ADN con enzimas de restricción)
  2. Ligación (unión de fragmentos de ADN)
  3. Transformación (introducción del ADN recombinante en una célula huésped)
  4. Selección (identificación de las células que han incorporado el ADN recombinante)

Secuenciación de ADN de Nueva Generación

• La secuenciación masiva (o de nueva generación) es un conjunto de técnicas de secuenciación de ADN. Por ejemplo, la pirosecuenciación se basa en la detección de la liberación de pirofosfatos.
• La secuenciación masiva no solo es capaz de estudiar genomas completos, sino que también analiza otras regiones del ADN o transcriptomas.