Fundamentos y Pruebas Bioquímicas Clave para la Identificación Bacteriana en Laboratorio

Metodologías Fundamentales en Microbiología Clínica: Cultivo y Caracterización Bacteriana

I. Procesamiento de Muestras y Aislamiento

• Siembra de la muestra y obtención de microaislados (cultivo puro): Primer paso esencial para el estudio bacteriano.
• Observación de morfología microscópica: Incluye el estudio de la forma y agrupación de las bacterias.
• Tinciones: Técnicas para visualizar estructuras y características morfológicas.

II. Identificación Fisiotaxonómica y Pruebas Bioquímicas

La identificación fisiotaxonómica se basa en el estudio de las reacciones metabólicas y el comportamiento de las bacterias vivas a través de las alteraciones que producen en medios de cultivo indicadores.

• Principios: Se fundamenta en la detección de:
  • Utilización de fuentes de carbono.
  • Producción de metabolitos finales.
  • Presencia o ausencia de enzimas específicas.
  • Sensibilidad a productos químicos o antibióticos.
• Sistemas Comerciales: Modificaciones de pruebas bioquímicas convencionales que utilizan sustratos deshidratados o tiras de papel filtro con reactivos, empleando códigos numéricos para la identificación.
• Alcance: Una prueba bioquímica simple (ej. actividad enzimática, vía metabólica, crecimiento a una temperatura específica) demuestra características bioquímicas, pero no siempre un estudio profundo del metabolismo bacteriano.

III. Estudio de Sensibilidad a Agentes Antimicrobianos

Evalúa la respuesta de los microorganismos a diferentes agentes antimicrobianos, crucial para la selección del tratamiento adecuado.

IV. Medios de Cultivo Específicos y sus Aplicaciones

1. Agar Tendido

• Tipo: Medio sólido nutritivo.
• Aplicación: Permite la observación de la morfología macroscópica de la colonia, incluyendo posible pigmentación (ej. verde).

2. Agar Urea

• Tipo: Medio sólido.
• Principio: Detección de la producción de la enzima ureasa.
• Composición: Contiene nutrientes básicos como triptona, urea e indicador de pH (rojo de fenol).
• Resultados:
  • Positivo: Color rosa/fucsia (debido al aumento del pH por la liberación de amonio).
  • Negativo: No hay cambio de color (permanece amarillo o naranja).

3. Citrato (Simmons Citrate Agar)

• Principio: Evalúa la capacidad de la bacteria para utilizar citrato como única fuente de carbono, transportándolo a través de la membrana citoplasmática (relacionado con el ciclo de ácidos tricarboxílicos).
• Composición: Contiene sales minerales (fosfato de amonio, citrato de sodio) como fuente de carbono.
• Indicador de pH: Azul de bromotimol.
• Resultados:
  • Positivo: pH azul (alcalino).
  • Negativo: Permanece verde (neutro).

4. TSI (Triple Sugar Iron Agar)

• Principio: Permite visualizar la utilización de azúcares (glucosa, lactosa, sacarosa) por las bacterias, resultando en la producción de ácidos (fórmico, pirúvico, láctico) y gases (CO2, H2). También detecta la producción de sulfuro de hidrógeno (H2S).
• Composición: Extracto de carne, extracto de levadura, glucosa, lactosa, sacarosa, citrato de amonio y hierro (para H2S).
• Indicador: Rojo de fenol.
• Resultados: Variaciones de color y burbujas/fracturas en el agar indican fermentación de azúcares y producción de gas. Ennegrecimiento indica H2S.

5. LIA (Lysine Iron Agar)

• Principio: Las bacterias poseen diferentes enzimas que pueden actuar sobre aminoácidos, desaminándolos o descarboxilándolos.
• Composición: Peptona, extracto de levadura, aminoácidos (lisina, aminoácidos azufrados), glucosa, citrato de hierro y amonio.
• Indicador de pH: Púrpura de bromocresol.
• Resultados:
  • Descarboxilación de lisina: Tubo morado (alcalino).
  • Desaminación de lisina: Pico rojo/burdeos.
  • Producción de H2S: Ennegrecimiento.
  • Fermentación de glucosa: Fondo amarillo (ácido).

6. MIO (Motility Indole Ornithine Medium)

• Principio: Medio multifuncional para la detección de motilidad, producción de indol y actividad de la enzima ornitina descarboxilasa.
• Motilidad:
  • Positivo: Enturbamiento completo del medio.
  • Negativo: Crecimiento limitado al pinchazo.
• Ornitina Descarboxilasa:
  • Positivo: Color morado del tubo (alcalino).
  • Negativo: Color amarillo (ácido).
• Indol:
  • Detección: Requiere la adición del reactivo de Kovacs.
  • Positivo: Formación de un aro rojo en la superficie.