Hibridación in situ, sondas y PCR: técnicas y conceptos clave en biología molecular

Términos y técnicas clave en hibridación y PCR

Contratinción

Contratinción: técnica empleada en la hibridación in situ, que consiste en teñir la muestra después de los lavados de post‑hibridación y de su secado, con la finalidad de generar contraste respecto al fondo y así visualizar mejor los híbridos.

Biochips

Biochips: placa plástica, de vidrio o de silicio con celdas cubiertas de sondas.

Cariotipo espectral

Cariotipo espectral: técnica utilizada en el FISH metafásico donde se emplean sondas concretas para cada cromosoma de manera que, tras revelar, se obtiene un cariotipo. Se pueden detectar anomalías numéricas, delecciones y duplicaciones.

Colchicina

Colchicina: fármaco antimitótico que detiene o inhibe la división celular en metafase y permite la realización del cariotipo.

Dot blot

Dot blot: técnica que permite el estudio simultáneo de varias muestras, ya que cada una puede colocarse en un pocillo distinto de la placa donde se realizará la técnica.

Southern blot

Southern blot: técnica de hibridación que permite identificar fragmentos de ADN separados por electroforesis en gel y transferidos a una membrana de nitrocelulosa o nailon.

Northern blot

Northern blot: técnica de hibridación que permite detectar moléculas de ARN separadas por electroforesis en gel y transferidas a una membrana de nitrocelulosa o nailon.

Técnica de captura de híbridos

Técnica de captura de híbridos: se basa en la formación de híbridos ARN/ADN que serán reconocidos o capturados por anticuerpos específicos.

Tecnología del ADN ramificado

La tecnología del ADN ramificado consiste en un sistema de amplificación de señal, basado en la unión de la secuencia diana a un macrocomplejo de ADN de tipo arborescente mediante sucesivas hibridaciones.

Hibridación in situ fluorescente

La hibridación in situ fluorescente se basa en el empleo de sondas marcadas con fluorocromos, que son detectadas visualizando las preparaciones con un microscopio de fluorescencia con los filtros adecuados.

Sondas centroméricas

Sondas centroméricas: se utilizan para estudiar alteraciones numéricas (monosomías, poliploidías…). Estas sondas hibridan con secuencias próximas al centrómero, muy estables. Al observar al microscopio, solo hay que contar las señales (normal: 2).

Sondas específicas de locus

Sondas específicas de locus: hibridan con secuencias alélicas de modo que permiten verificar la presencia o ausencia de alelos concretos.

Sondas de separación

Sondas de separación: se usan para la detección de translocaciones en las que solamente se conoce uno de los cromosomas implicados. A ambos lados del punto de corte se hibridan sondas con colores distintos. De existir translocación, se observarán los colores separados.

Sondas de fusión

Sondas de fusión: permiten detectar traslocaciones cuando se conocen los cromosomas implicados. A ambos lados de la zona de corte hibridan sondas de un color característico para cada cromosoma. Durante la observación, si los colores aparecen juntos, existirá traslocación.

PCR

PCR es una técnica que permite obtener una gran cantidad de copias (amplificar) de un fragmento de ácido nucleico. Los productos o copias se denominan amplicones, los cuales se generan a gran velocidad, ya que en cada ciclo de la PCR servirán como molde de nuevos amplicones. Esta técnica se fundamenta en la acción de las enzimas ADN polimerasas.