Inmunodiagnóstico en laboratorio clínico: técnicas, marcadores y control de calidad

Sistema inmunitario

Sistema inmunitario: Nuestro cuerpo posee una serie de barreras y mecanismos de defensa (sistema inmunológico) que nos protegen del ambiente externo y de cualquier anormalidad que pueda darse en el interior del organismo.

Definiciones básicas

Antígeno (Ag): Sustancia que al introducirse en el organismo induce una respuesta inmunitaria, que pone en marcha la formación de anticuerpos y puede dar lugar a una respuesta celular o humoral.

Anticuerpo (Ac): Proteína producida por el sistema inmunitario cuya función es identificar y neutralizar las sustancias extrañas que entran en el organismo.

Inmunoanálisis

Inmunoanálisis: Prueba de laboratorio basada en reacciones inmunológicas mediante las cuales se detecta la presencia de una sustancia o la cantidad presente en una muestra de sangre u otros líquidos corporales. Este tipo de ensayos tienen elevada sensibilidad y especificidad gracias al uso de reactivos (anticuerpos y antígenos) purificados.

Finalidad y usos

Finalidad: Medir (cuantitativo) o, en el caso de un ensayo cualitativo, detectar la presencia de la sustancia que se pretende analizar.

Usos comunes:

• Medición de niveles hormonales y proteínas (por ejemplo, vitamina B12, endorfina).
• Determinación de metabolitos en suero.
• Detección de virus y agentes infecciosos.
• Detección de cáncer o células tumorales mediante marcadores.
• Detección de exposición a agentes infecciosos.
• Detección de metabolitos relacionados con problemas fisiológicos.
• Medición de niveles de medicamentos, drogas y toxinas en sangre.

Resultados

• Cualitativo: Expresa resultado como negativo o positivo.
• Cuantitativo: Expresa la concentración en unidades de medida acompañadas de valores de referencia o límites normales.

Tipos de respuesta en inmunoensayos

En función de la relación entre anticuerpo y elemento analizado se suelen describir dos comportamientos (concepto general):

• Tipo I: Predomina el exceso de anticuerpo sobre el elemento analizado; la señal marca el anticuerpo reactivo.
• Tipo II: La cantidad de anticuerpo es menor que la del elemento analizado; la señal marca la sustancia analizada.

Marcadores y formatos de inmunoensayos

Marcadores utilizados en inmunoensayos:

• RIA (radioinmunoanálisis): marcador isotópico (radioisótopo).
• EIA/ELISA: marcador enzimático.
• Fluoroimmunoanálisis: marcador con molécula fluorescente.
• Quimioluminiscencia: reacción catalizada por una enzima que produce emisión de luz.

Formatos de ensayo

• Homogéneos: El compuesto marcado se comporta de manera diferente según esté libre o ligado sin necesidad de separar fases.
• Heterogéneos: Requieren separación de fracciones (por ejemplo lavado o separación sólido-líquido) y las especies ligada/libre se comportan de forma diferenciada.

Radioinmunoanálisis (RIA)

RIA: Técnica desarrollada en 1959 por Rosalyn Yalow y Solomon Berson para la determinación de insulina. Es una técnica in vitro importante que combina la especificidad de las reacciones inmunes (entre antígeno y anticuerpo) con la sensibilidad de los métodos radioisotópicos. En RIA se realiza una curva patrón para cuantificación.

Quimioluminiscencia

Quimioluminiscencia: Permite el análisis de sustancias presentes en baja concentración con un nivel de peligrosidad mucho menor que el RIA. La emisión de luz se produce como consecuencia de una reacción química catalizada por una enzima; no implica radiación ionizante.

Condiciones de incubación

La elección de temperatura y tiempo de incubación depende de los objetivos del ensayo:

• Temperatura ambiente: Se usa cuando no se requiere una sensibilidad extremadamente alta.
• Temperatura baja y tiempo prolongado: Requiere mayor precisión y reproducibilidad para alcanzar alta sensibilidad.

Detectores

Detector de centelleo sólido / contador gamma

Indicados para el contaje de emisiones gamma; requieren radiación penetrante capaz de alcanzar el cristal del detector.

Detector de centelleo líquido / contador beta

En el caso de partículas beta, la penetración es limitada. Las sustancias líquidas de centelleo, mezcladas con la muestra, permiten detectar la radiación beta mediante el fenómeno de centelleo.

Valoración y medida radioactiva

Factores a considerar:

• Canal de contaje.
• Actividad de fondo.
• Tiempo muerto del contador.
• Estadística de contaje.
• Eficiencia del contador.
• Desactivación o decaimiento radiactivo.

Control de calidad y errores en el laboratorio

Tipos de errores:

• Error grave: Falta de atención o incumplimiento del procedimiento al realizar el ensayo (p. ej., confusión de muestras).
• Error sistemático: El resultado se desvía del valor nominal siempre en la misma dirección (sesgo).
• Error aleatorio: Mala repetibilidad del proceso analítico; provoca variabilidad impredecible entre medidas.

Parámetros de desempeño analítico

• Precisión: Grado en que una serie de medidas de una misma muestra difieren entre sí; refleja repetibilidad.
• Especificidad: Capacidad de discriminar entre estructuras similares y evitar reactividad cruzada.
• Sensibilidad analítica: Menor cantidad de analito detectable de forma fiable (límite de detección analítica).
• Sensibilidad funcional: La menor concentración que un ensayo puede cuantificar con precisión y exactitud práctica (límite funcional).

Observación final

La correcta selección de la técnica, el control estricto de las condiciones experimentales y la implementación de procedimientos de control de calidad son esenciales para obtener resultados fiables en inmunodiagnóstico en el laboratorio clínico.