Interpretación de Pruebas Bioquímicas y Serológicas en Microbiología Clínica

Reacciones en Medios de Cultivo y Producción de Sulfuro de Hidrógeno

Si las bacterias producen sulfuro de hidrógeno (H₂S), este entrará en reacción con el hierro presente en el medio. En presencia de gas, se precipitará, formando un precipitado de color gris o negro.

Uso de Carbohidratos

• Utilizar sacarosa y lactosa.

DATO IMPORTANTE: Cuando el pico del medio se vuelve rojo y el fondo amarillo, significa que solo utiliza glucosa.

Metabolismo de Proteínas (Peptonas)

Existen bacterias que no utilizan ningún tipo de azúcar, sino que metabolizan proteínas, específicamente las peptonas. Por lo tanto, el medio de cultivo se volverá rojo.

• La lectura en proteína con color rojo corresponde a la notación K/K.
• Cuando un TSI presenta un K/K, se debe descartar que se trate de una Enterobacteria.

C) Método para la Utilización de Carbohidratos: Método Rojo de Metilo y Voges-Proskauer

Estos métodos se emplean para identificar bioquímicamente a las Enterobacteriaceae, principalmente al grupo polimórfico.

Prueba del Rojo de Metilo (RM)

En esta prueba, la utilización de azúcares resulta en la formación de ácido láctico. Estos ácidos son tan fuertes que confieren consistencia al medio.

• La presencia de estos ácidos fuertes se detecta mediante el Rojo de Metilo.
• Esta prueba no se realiza de forma aislada; se complementa con la prueba de Voges-Proskauer (VP), que indica la degradación del azúcar para formar el compuesto conocido como acetil metil carbinol (conocido como acetona).

Procedimiento y Resultados

Se lleva a incubar a 37°C por 18 – 24 horas.

Resultados del Rojo de Metilo (RM)

• Al tubo VP se le agrega reactivo de Rojo de Metilo. Si ha habido ácidos fuertes, todo el medio se convierte en rojo (es positivo).
• Si no se convierte en rojo, la prueba es negativa.
• Se reporta como: MR (+) o MR (-).

Resultados de Voges-Proskauer (VP)

El Voges-Proskauer está representado con un reactivo de alfa naftol.

• Se añaden gotas de reactivo y luego KOH (puede ser del 20% al 40%, en proporción de 12 gotas de reactivo por 4 gotas de KOH).
• Prueba Positiva: Se formará un anillo color rojo en la superficie.
• Prueba Negativa: No hay formación del color rojo.

PRÁCTICA 9 ANTÍGENO-ANTICUERPO

Antecedentes Históricos y Conceptos Inmunológicos

El primer trabajo realizado por Robert Koch fue con el ganado vacuno, estudiando el ántrax o carbunco. Extrajo sangre de estos animales y la cultivó en medios, identificando la bacteria Bacillus anthracis.

• Inmunológicamente, la bacteria es considerada un antígeno.

Características de un Antígeno

Una molécula debe cumplir con las siguientes características para ser considerada un antígeno:

1. Debe ser reconocida como extraña.
2. Tener complejidad química.
3. Ser exógena; idealmente debe ser una proteína.
4. Tener alto peso molecular.
5. Poseer lugares donde reaccionar con el anticuerpo.

El epítope es la parte específica que debe tener para ser reconocido como antígeno.

Patógenos y Defensa Inmunológica

• La Salmonella Typhi produce fiebre tifoidea.
• La Salmonella en general produce salmonelosis.
• El anticuerpo se produce contra el antígeno y se encuentra en la sangre.

Diagnóstico Serológico

La presencia de una enfermedad o microorganismo se puede demostrar buscando el anticuerpo específico (también llamada defensa adquirida).

Se puede realizar un diagnóstico sin buscar directamente a Salmonella typhi, sino buscando anticuerpos contra esa bacteria; esto se denomina estudio serológico (suero).

En el ESTUDIO SEROLÓGICO, el procedimiento consiste en enfrentar al antígeno contra el anticuerpo.

Formas de Reacción Serológica

Existen diferentes formas de reacción serológica:

• AGLUTINACIÓN: El antígeno está en la superficie de la molécula (antígeno particulado).
• PRECIPITACIÓN: El antígeno y el anticuerpo están de forma soluble y forman un precipitado.
• NEUTRALIZACIÓN: Los anticuerpos capturan y neutralizan a los antígenos, evitando que estos infecten.

Reacción de Aglutinación en la Práctica (Reacción de Widal)

Cuando se habla de aglutinación en la práctica, se observa la reacción mediante:

• La reacción de Widal: Se utilizan antígenos febriles.
• Widal obtuvo y estandarizó los segmentos de antígeno O y H.

Características de Salmonella

• Salmonella es Gram negativa (pertenece a las enterobacterias).
• Puede ser de dos tipos: Salmonella typhi A y B.
• La fiebre tifoidea es una enfermedad febril con un periodo de incubación de 3 semanas.

Determinación de Salmonella mediante Placas Escavadas

Análisis Cualitativo

Se evalúan los antígenos O, H, A, B.

• Se observa la aglutinación, notándose presencia de arenilla en los bordes.
• Cuando hay reacción positiva para paratífico O y paratífico H, se considera un análisis cualitativo (presencia o ausencia de aglutinación). Faltaría realizar el análisis cuantitativo para determinar la cantidad de anticuerpos.

Análisis Cuantitativo

• A cada pocillo se le añade la misma cantidad de antígeno O, mientras que la cantidad de suero disminuye progresivamente y se mezcla.
• Como consecuencia de la mezcla, si se obtiene aglutinación, se procede a la interpretación. Los 6 pocillos estarán enumerados con las diluciones: 1/20, 1/40, 1/80, 1/160, 1/320, 1/640.