Prácticas de Laboratorio: Ensayos de Solubilidad, Identificación de Lípidos y Proteínas

Prueba de Solubilidad en Solventes Polares y no Polares

Los lípidos son compuestos insolubles en solventes polares y solubles en solventes no polares. Para este ensayo, el solvente polar usado es agua y el solvente no polar usado es aceite mineral.

1. Preparar dos grupos de 3 tubos cada uno. Colocar un rótulo en cada tubo con un marcador indeleble.
2. Agregar 1 ml (20 gotas) de agua al primer grupo de tubos.
3. Agregar 1 ml de aceite mineral al segundo grupo de tubos.
4. Agregar 1 ml de cada muestra a ensayar (ver Tabla 1) a un tubo de cada grupo.
5. Mezclar bien los contenidos.
6. Esperar 2 minutos.
7. Examinar cada tubo detenidamente.

Prueba de Rojo Sudán

El Sudán III es un compuesto coloreado soluble en aceites y grasas. Cuando el rojo Sudán (solución colorante preparada disolviendo Sudán III en alcohol) es agregado a una mezcla de lípidos y agua, el colorante se ubica en la capa lipídica coloreándola de rojo.

1. Agregar una gota de colorante rojo Sudán a cada tubo del ensayo anterior (agua+muestra).
2. Mezclar los contenidos agitando fuertemente.
3. Esperar 2 minutos.
4. Examinar detenidamente cada tubo.

Determinación Cualitativa de Proteínas por la Reacción de Biuret

El reactivo de Biuret es de color azul claro y se torna violeta cuando se mezcla con una solución que contiene proteínas.

1. Preparar un grupo de 4 tubos y rotular.
2. Agregar a cada tubo 1 ml de muestra.
3. Agregar a cada tubo 1 ml de medio alcalino (NaOH 5N).
4. Agregar a cada tubo 5 gotas del reactivo de Biuret (CuSO₄ 1% P/V).
5. Mezclar por inversión.
6. Incubar 20 minutos a Temperatura Ambiente (TA).
7. Observar detenidamente.

Determinación de la Presencia de Proteínas por Desnaturalización por pH

1. Preparar un grupo de 4 tubos y rotular.
2. Colocar agua (1 ml) a cada uno de los tubos.
3. Colocar muestra (1 ml) a cada tubo.
4. Agregar 0,5 ml (10 gotas) de Ácido Tricloroacético (TCA) al 10% a cada tubo.
5. Mezclar y observar.

Determinación de la Presencia de Proteínas por Desnaturalización por Aumento de Temperatura

1. Preparar un grupo de 4 tubos y rotular.
2. Colocar agua (1 ml) a cada uno de los tubos.
3. Colocar muestra (1 ml) a cada tubo.
4. Mezclar.
5. Incubar 5 minutos en baño de agua a 60 °C.
6. Observar.