Procedimiento para la Prueba de Coombs: Directa e Indirecta

Prueba de Coombs Directa

Fuente 1

1. Agregar a cada tubo de las diluciones 10 gotas de solución salina más 10 gotas de suero de Coombs.
2. Colocar al primer tubo de la dilución 1 gota de glóbulos rojos (3-5%), mezclar completamente y agregar al tubo #1.
3. Centrifugar todos los tubos a 1000 rpm durante 20 segundos.

LECTURA:

• Aglutina: Prueba de Coombs directa es positiva.
• No aglutina: Prueba de Coombs directa es negativa.

Fuente 2

1. Lave tres veces los hematíes del paciente con solución salina fisiológica.
2. Haga una suspensión de hematíes lavados al 2-5 %.
3. Añada en un tubo debidamente rotulado dos gotas de la suspensión.
4. Añada dos gotas de Suero de Coombs poliespecífico.
5. Centrifugue un minuto a 1000 rpm.
6. Lea desprendiendo suavemente el botón sobre la lámpara aglutinoscopio.

Fuente 3

1. Centrifugar las muestras de sangre en el tubo de EDTA a 3500 rpm por 5 minutos.
2. Decantar todo el sobrenadante (plasma).
3. Lavar cuatro veces los hematíes del paciente con solución salina fisiológica al 0.9% (la cantidad de solución salina es tres veces el volumen de los hematíes).
4. Hacer una suspensión de hematíes lavados al 3%.
5. Colocar en un tubo debidamente rotulado 1 gota de la suspensión de hematíes.
6. Añadir dos gotas de Suero de Coombs poliespecífico.
7. Centrifugue 1 minuto a 3000 rpm.
8. Leer desprendiendo suavemente el botón.

Prueba de Coombs Indirecta y Cruzada

Fuente 1

1. Centrifugue la muestra de sangre 10 minutos a 3000 rpm para obtener el suero y decántelo en un tubo debidamente identificado.
2. Prepare una suspensión al 2-5 % con la mezcla de hematíes O y en el caso del Coombs cruzado utilice una muestra de la sangre a transfundir para preparar la suspensión.
3. En un tubo debidamente rotulado añada dos gotas del suero y dos gotas de la suspensión y mezcle bien.
4. Prepare un tubo control rotulado C+ (control positivo) y añada en él dos gotas de la suspensión de hematíes O y dos de suero hemoclasificador anti-D y mezcle bien.
5. Incube ambos tubos en un Baño de María a 37ºC por 30 minutos.
6. Lave tres veces con solución salina escurriendo totalmente el sobrenadante del último lavado.
7. Añada dos gotas de suero de Coombs poliespecífico a cada tubo.
8. Centrifugue 1 minuto a 1000 rpm.
9. Lea desprendiendo suavemente el botón en la lámpara aglutinoscopio.

Fuente 2

Coombs Indirecto

1. Centrifugue la muestra de sangre a 3500 rpm por 5 minutos, para obtener el suero y decántelo en un tubo debidamente rotulado.
2. Preparar una suspensión al 3 % con la mezcla de hematíes O.
3. En un tubo debidamente rotulado añadir dos gotas del suero problema y dos gotas de la suspensión de hematíes y mezclar bien.
4. Incubar ambos tubos en un Baño de María a 37ºC por 30 minutos.
5. Lavar tres veces con solución salina escurriendo totalmente el sobrenadante del último lavado.
6. Añadir dos gotas de suero de Coombs poliespecífico al tubo.
7. Centrifugar 1 minuto a 1000 rpm.
8. Leer desprendiendo suavemente el botón.

Coombs Cruzada-Indirecta

1. Centrifugue la muestra de sangre a 3500 rpm por 5 minutos, para obtener el suero y decántelo en un tubo debidamente rotulado.
2. Preparar una suspensión al 3 % de la muestra de hematíes a transfundir previamente lavada.
3. En un tubo debidamente rotulado añada dos gotas del suero y dos gotas de la suspensión y mezcle bien.
4. Prepare un tubo control rotulado C+ (control positivo) y añada en él dos gotas de la suspensión de hematíes O y dos de suero hemoclasificador anti-D y mezcle bien.
5. Incube ambos tubos en un Baño de María a 37ºC por 30 minutos.
6. Lave tres veces con solución salina escurriendo totalmente el sobrenadante del último lavado.
7. Añada dos gotas de suero de Coombs poliespecífico a cada tubo.
8. Centrifugue 1 minuto a 1000 rpm.
9. Lea desprendiendo suavemente el botón.

Interpretación de los Resultados

Si en la prueba de Coombs directo observa aglutinación, esto indica presencia de anticuerpos y/o complemento unidos a los hematíes in vivo. Repita nuevamente el procedimiento, pero utilizando los reactivos monoespecíficos anti-IgG y anti-C3d.

Reacción positiva: La aglutinación de los hematíes problema es indicativa de la presencia de anticuerpos, teniendo en cuenta las limitaciones del procedimiento.

Reacción negativa: La ausencia de aglutinación de los hematíes problema es indicativa de un resultado negativo, teniendo en cuenta las limitaciones del procedimiento, y confirma la ausencia anticuerpos en los hematíes ensayados.