Procedimiento Técnico para la Cromatografía en Capa Fina

Procedimiento Experimental de Cromatografía en Capa Fina

1. Preparación de la Placa

A. En la superficie del adsorbente (fase estacionaria), se señala con un lápiz (nunca se debe emplear tinta) tantos puntos como muestras se vayan a aplicar, dejando espacio suficiente entre ellos. Todos los puntos deben estar a la misma altura desde la base de la placa (1 cm), por lo que puede resultar conveniente trazar una línea recta antes de señalar los puntos. Las marcas se deben hacer con cuidado, sin arañar ni levantar el adsorbente.

2. Aplicación de la Muestra

B. Utilizando un capilar de vidrio, se deposita una gotita de la disolución en el punto señalado. Para ello, se apoya ligeramente el capilar con la disolución sobre el adsorbente, procurando que el diámetro de la mancha depositada sea pequeño.

3. Preparación de la Cubeta y Elución

C. Preparamos la cubeta y se añade el eluyente. El nivel del eluyente en la cubeta debe quedar por debajo de la línea en la que se han depositado las muestras, de manera que no llegue nunca a tocar las manchas. Si estas quedasen cubiertas por el disolvente, los componentes de la mezcla se disolverían, en lugar de eluirse.

4. Desarrollo del Cromatograma

D. Se introduce la placa en posición vertical en la cubeta, apoyándola en la pared, de modo que quede ligeramente inclinada. Se tapa la cubeta y se deja en reposo mientras se eluye la placa. Cuando el frente del disolvente esté cerca del borde superior de la placa, se saca la placa de la cubeta y se señala inmediatamente con un lápiz la altura del frente del eluyente. Esta marca será necesaria posteriormente para calcular el parámetro denominado Rf. A continuación, se deja evaporar el disolvente durante varios minutos.

5. Visualización de Resultados

E. Visualización del cromatograma: Si los compuestos son coloreados (absorben luz visible), se marca el contorno de las manchas observadas con un lápiz. En caso contrario, es necesario utilizar radiación ultravioleta o recurrir a un revelador específico.

• La mayor parte de las placas de cromatografía llevan un indicador fluorescente que permite la observación de los compuestos que absorben luz ultravioleta.
• En el caso de compuestos que no absorban luz ultravioleta, la visualización del cromatograma requiere la utilización de un agente revelador. El revelador reacciona con los componentes adsorbidos, dando lugar a productos coloreados.