Procedimientos Esenciales en Microbiología: Siembra y Recuento Bacteriano

Preguntas de Práctica de Microbiología

1. Instrumental de Laboratorio y Técnicas de Siembra

• Asa de Drigalski: Se utiliza para extender uniformemente una suspensión bacteriana sobre la superficie de un medio de cultivo sólido (como una placa de Petri). Se emplea normalmente en técnicas de siembra masiva por extensión en superficie (por ejemplo, en recuentos por diluciones seriadas). Permite distribuir las bacterias de manera homogénea sin dañar el agar.
• Asa calibrada: Sirve para inocular una cantidad exacta de muestra líquida (por ejemplo, orina) en un medio de cultivo. Permite calcular la concentración bacteriana en UFC/mL con precisión, ya que tiene un volumen definido.
• Tubo con hisopo: Se utiliza para recoger, transportar y conservar muestras microbiológicas desde el lugar de toma (faringe, piel, heridas, etc.) hasta el laboratorio. Se usa principalmente en la toma de muestras clínicas para cultivo. Mantiene la viabilidad del microorganismo hasta su siembra en el laboratorio, evitando la contaminación o desecación.
• Asas metálicas: Se usan para recoger e inocular microorganismos en medios de cultivo. Se emplean en siembras por agotamiento (estrías) o en transferencias entre medios. Al ser metálicas, pueden esterilizarse fácilmente al rojo vivo en la llama del mechero entre cada uso, evitando la contaminación cruzada.

2. Resolución de Problemas: Cálculo de UFC/mL

Para determinar la concentración bacteriana, se aplica el siguiente procedimiento:

24 colonias x 10⁵ (factor de dilución) = 2,4 x 10⁶

Si en 50 µL hay 2,4 x 10⁶ UFC, ¿cuántas habrá en 1000 µL (1 mL)?

• 2,4 x 10⁶ -------- 50 µL
• ? --------- 1000 µL

Cálculo: ? = (2,4 x 10⁶ x 1000) / 50 = 48 x 10⁶

Resultado final: 4,8 x 10⁷ UFC/mL

3. Diferenciación en Medios de Cultivo: CLED y MacConkey

La placa izquierda es un medio CLED (Cystine-Lactose-Electrolyte-Deficient), que se usa para el recuento y diferenciación de bacterias en orina. Las colonias amarillas en CLED indican la fermentación de lactosa, lo cual es común en Escherichia coli y otras bacterias coliformes.

La placa de la derecha es un agar MacConkey, el cual es un medio selectivo y diferencial usado para identificar bacterias Gram negativas (G-). Las colonias rosas indican fermentación de lactosa, mientras que las amarillas (es decir, incoloras) no fermentan lactosa.

Por lo tanto, las colonias amarillas (fermentadoras de lactosa) en la placa de CLED corresponden con las colonias rosas (que también fermentan lactosa) en el agar MacConkey. Se presentan de distinto color ya que cada placa utiliza un indicador de pH distinto.

Cálculo de Recuento en Orina

450 UFC ------- 10 µL

? -------- 1000 µL = 4,5 x 10⁴ UFC/mL

Interpretación clínica: El resultado es dudoso, ya que se encuentra en el rango entre 10⁴ y 10⁵ UFC/mL, por lo cual sería necesario repetir la prueba.