Protocolos Esenciales en Inmunohematología: Coombs, Pruebas Cruzadas y Fenotipado Sanguíneo

Pruebas de Antiglobulina Humana (Coombs)

Prueba de Coombs Directa

1. Preparar una suspensión de Glóbulos Rojos (GR) al 5%.
2. Lavar los GR del paciente 4 veces con solución salina.
3. En un tubo de ensayo, añadir 1 gota de la suspensión de GR lavados.
4. Agregar 2 gotas de reactivo de Coombs (Antiglobulina Humana).
5. Centrifugar durante 1 minuto según especificaciones.
6. Leer e interpretar la aglutinación.

Prueba de Coombs Indirecta (Detección de Anticuerpos Irregulares en Suero)

1. Preparar un pool de GR conocidos (ejemplo: utilizando 100 µL de cada una de 5 muestras distintas).
2. Hacer una dilución del pool de GR al 5% (ejemplo: 50 µL de GR concentrados con 950 µL de solución salina).
3. En un tubo, agregar 2 gotas del suero del paciente con 1 gota de la suspensión de GR del pool (al 5%).
4. Incubar a 37°C durante 15 minutos.
5. Centrifugar por 1 minuto.
6. Realizar la primera lectura (fase salina/albúmina si se añade) y anotar el resultado.
7. Lavar 3 veces con solución salina.
8. Agregar 2 gotas de reactivo de Coombs.
9. Centrifugar por 1 minuto.
10. Leer e interpretar la aglutinación (fase de antiglobulina).

Prueba Cruzada Mayor

Objetivo: Evaluar compatibilidad entre el suero del paciente y los GR del donante.

1. Preparar una suspensión al 5% de los GR del donante.
2. Obtener suero del paciente centrifugando la muestra (tubo tapón rojo o amarillo).
3. Fase Salina:
   • En un tubo, mezclar 4 gotas de suero del paciente con 1 gota de la suspensión de GR del donante (al 5%).
   • Centrifugar y leer.
4. Fase Proteica (o de incubación a 37°C):
   • Añadir 1 gota de albúmina bovina (opcional, según protocolo).
   • Incubar por 15 minutos a 37°C.
   • Centrifugar por 1 minuto y leer.
5. Fase de Coombs (Antiglobulina):
   • Lavar 4 veces con solución salina.
   • Decantar completamente la última lavada.
   • Agregar 1 o 2 gotas (según fabricante) de reactivo de Coombs.
   • Centrifugar y leer.

Fenotipado de Sistemas Sanguíneos

Sistema Rh

Anti-C, Anti-c, Anti-E, Anti-e (Método general indicado, puede variar por reactivo)

1. Mezclar 1 gota de reactivo específico (Anti-C, Anti-c, Anti-E o Anti-e) con 1 gota de suspensión de GR del paciente/donante.
2. Incubar a 37°C por 5 minutos.
3. Centrifugar y leer.
4. Interpretación (ejemplo): Si el resultado es positivo (+), registrar. Si es negativo (-), incubar a 37°C por 10 minutos adicionales, centrifugar y leer nuevamente. (Seguir instrucciones específicas del fabricante).

Anti-C (Método alternativo/específico)

1. Mezclar 1 gota de reactivo Anti-C + 1 gota de muestra (suspensión de GR).
2. Centrifugar y leer.
3. Interpretación (ejemplo): Si resultado (+), registrar. Si resultado (-), incubar a T° ambiente por 15 minutos, centrifugar y leer. (Seguir instrucciones específicas del fabricante).

Anti-E (Método alternativo/específico)

1. Mezclar 1 gota de reactivo Anti-E + 1 gota de muestra (suspensión de GR).
2. Centrifugar y leer.
3. Interpretación (ejemplo): Si resultado (+), registrar. Si resultado (-), incubar a T° ambiente por 15 minutos, centrifugar y leer. (Seguir instrucciones específicas del fabricante).

Anti-e (Método alternativo/específico)

1. Mezclar 1 gota de reactivo Anti-e + 1 gota de muestra (suspensión de GR).
2. Centrifugar y leer.
3. Interpretación (ejemplo): Si resultado (+), registrar. Si resultado (-), incubar a T° ambiente por 15 minutos, centrifugar y leer. (Seguir instrucciones específicas del fabricante).

Sistema Duffy

Anti-Fy^b

1. Mezclar 1 gota de reactivo Anti-Fy^b + 1 gota de muestra (suspensión de GR).
2. Incubar a T° ambiente por 5 minutos.
3. Centrifugar y leer.

Sistema Kidd

Anti-Jk^a

1. Mezclar 1 gota de reactivo Anti-Jk^a + 1 gota de muestra (suspensión de GR).
2. Incubar a T° ambiente por 5 minutos.
3. Centrifugar y leer.

Anti-Jk^b

1. Mezclar 1 gota de reactivo Anti-Jk^b + 1 gota de muestra (suspensión de GR).
2. Incubar a T° ambiente por 5 minutos.
3. Centrifugar y leer.

Sistema Kell

Anti-K (Método IAT)

1. Mezclar 1 gota de reactivo Anti-K + 1 gota de muestra (suspensión de GR).
2. Incubar a 37°C por 5 minutos (o según fabricante).
3. Lavar 3 veces con solución salina.
4. Agregar 2 gotas de reactivo de Coombs.
5. Centrifugar y leer.

Anti-k (Cellano) (Método Rápido/Ambiente)

1. Mezclar 1 gota de reactivo Anti-k + 1 gota de muestra (suspensión de GR).
2. Incubar a T° ambiente por 5 minutos.
3. Centrifugar y leer.

Sistema MNS

Anti-N

1. Mezclar 1 gota de reactivo Anti-N + 1 gota de muestra (suspensión de GR).
2. Incubar a T° ambiente por 15 minutos.
3. Centrifugar y leer.

Sistema H

Anti-H (Lectina Ulex europaeus)

1. Mezclar 2 gotas de reactivo Anti-H + 1 gota de muestra (suspensión de GR).
2. Incubar a T° ambiente por 5 minutos.
3. Centrifugar y leer.