Protocolos Esenciales de Microbiología: Preparación de Medios de Cultivo, Recuento de Orina y Bioseguridad

Medios de Cultivo y Técnicas de Preparación

Los medios de cultivo son esenciales en microbiología. Se clasifican según su consistencia:

Medios Sólidos

Se pueden disponer tanto en placas de Petri como en tubos. Estos medios contienen un agente gelificante; este agente tiene consistencia líquida en caliente y solidifica cuando se enfría.

Preparación de Medios Sólidos en Placas de Petri

1. Disolución del producto en polvo: Seguir las instrucciones de la etiqueta. La mayoría de los medios se disuelven en agua destilada por agitación o calentamiento. Algunos requieren que la mezcla hierva.
2. Esterilización: Lo más habitual es el autoclavado, aunque si contienen ingredientes termolábiles que no se pueden someter a este proceso, se utiliza la tindalización.
3. Complementación: Algunos ingredientes termosensibles (como ciertos antibióticos, sangre, etc.) se incorporan después de la esterilización. Estos suplementos pueden obtenerse estériles o liofilizados.
4. Distribución en placas: Se lleva el matraz a una zona estéril, se deja enfriar hasta los 50 ºC y se distribuye en placas de Petri estériles.

Preparación de Medios Sólidos en Tubo

La dosificación se realiza inmediatamente tras la disolución, y lo que se esteriliza son los tubos con el medio. Si los tubos tienen cierre hermético con tapón de rosca, este no debe estar enroscado totalmente. La dosificación del medio por enfriamiento se puede realizar de dos maneras:

• Con los tubos en posición inclinada, consiguiendo que el agar quede inclinado y solidifique en forma de pico de flauta.
• Con los tubos en posición vertical.

Medios Líquidos

La preparación de los medios líquidos es similar a la de los medios sólidos en tubo, utilizando el enfriamiento en posición vertical.

Medios Semisólidos

Contienen un agente gelificante, pero en una concentración mucho menor que los medios sólidos. Estos medios se utilizan para:

• Estudiar el crecimiento bacteriano a lo largo del tubo.
• Estudiar la movilidad bacteriana.

Recuento de Viables en Muestras de Orina

La muestra de orina es típica para el recuento de viables, ya que aporta información crucial para diagnosticar una infección y graduar su severidad. Sin embargo, las muestras de orina son un caso especial de recuento por dos razones:

1. El recuento de viables se encuadra en un rango amplísimo de valores.
2. No requiere conocer el número exacto de bacterias/ml.

El método más utilizado combina la siembra masiva con el agotamiento de asa, realizado sobre placas de agar CLED con asas de siembra calibradas.

Pasos del Procedimiento de Siembra

1. Cargar el asa de siembra calibrada por inmersión en la orina.
2. Descargar el asa sobre el medio de cultivo, dibujando un radio de la circunferencia de la placa.
3. Distribuir el inóculo descargado sobre la mitad superior de la placa mediante un movimiento en zigzag (de lado a lado, de arriba al centro), dibujando líneas muy próximas.
4. Sin despegar el asa del medio, continuar el movimiento en la mitad inferior de la placa, dibujando líneas más separadas.

Niveles de Bioseguridad en el Laboratorio

Nivel de Bioseguridad 1 (BSL-1)

Indica escaso riesgo individual y comunitario. Se aplican las medidas del laboratorio básico y no se requiere ningún equipo especial de contención.

Nivel de Bioseguridad 2 (BSL-2)

Es un laboratorio básico que dispone, además, de cabina de seguridad biológica o de otros dispositivos apropiados de protección personal. Indica un riesgo individual moderado y comunitario limitado. El laboratorio debe disponer de un manual de seguridad biológica.

Procedimientos de Trabajo BSL-2

1. Protección del personal: Debe usar guantes apropiados al aplicar todas las técnicas que conlleven riesgo de contacto accidental directo con material biológico infeccioso. Debe usar vestimenta específica que no se llevará fuera del laboratorio.
2. Local y accesos: Las puertas del laboratorio deben estar cerradas y señalizadas con el símbolo internacional de riesgo biológico. Deben señalizarse los congeladores y refrigeradores designados para guardar microorganismos. Debe haber un contenedor apropiado para residuos.
3. Procedimiento: Para la centrifugación de grandes concentraciones y volúmenes de agentes infecciosos, se utiliza una centrífuga herméticamente cerrada. Todas las técnicas que puedan producir aerosoles se realizan en cabinas de seguridad biológica.