Técnicas de Aglutinación en Inmunología Clínica y Diagnóstico de Laboratorio

Técnicas de Aglutinación Inversa y Variantes

Aglutinación Inversa: Se utiliza antígeno (Ag) libre y anticuerpo (Ac) fijado a una partícula conocida (coagulación). Las partículas de fijación suelen ser Staphylococcus aureus muertos y tratados, que poseen en sus paredes la proteína fijadora A, a la cual se unen los anticuerpos por la base de su porción pesada. También se emplea en la detección de Streptococcus pneumoniae.

Aglutinación de Látex con Liposomas

A. de Látex con Lipo: Consiste en un anticuerpo conocido pegado a partículas de látex y liposomas, lo que permite una visualización más sencilla de la reacción.

Soportes de Visualización

• Tarjeta Visu: Utiliza una partícula blanca sobre un círculo negro para facilitar el contraste.
• Microtec Aglutinación en Gel: Emplea una matriz de gel inmunológicamente inerte que funciona por exclusión por tamaño; el aglutinado queda retenido en la parte superior. Se utiliza una mezcla de anticuerpo específico, NaCl o suero antiglobulina humana junto con hematíes sensibilizados con antígeno, seguido de un proceso de centrifugación.

Valoración y Cuantificación

Ventaja: Presenta un alto grado de sensibilidad, aunque resulta difícil de cuantificar con precisión.

Valoración Subjetiva de la Cantidad de Agregados

Consiste en asignar una puntuación basada en "cruces" (hasta un máximo de cuatro), dependiendo del tamaño de los agregados observados.

Semicuantificación

Para semicuantificar, se preparan diluciones seriadas de la muestra problema (batería de diluciones de la sustancia en orden decreciente). El título se define como la inversa de la máxima dilución con la que se ha obtenido un resultado positivo (+). La fórmula aplicada es: Unidad mínima detectable * Título = Concentración.

Inhibición de la Aglutinación y Detección Viral

Inhibición de la Aglutinación

Se utiliza para detectar antígenos solubles en una muestra. Se mezcla la muestra (que contiene el Ag) con anticuerpos conocidos y luego se añaden corpúsculos sensibilizados:

• No aglutina: Resultado positivo (hay presencia de antígeno).
• Aglutina: Resultado negativo (no hay antígeno).

Un ejemplo común de esta técnica es la prueba de HCG.

Detección de Virus

Para detectar anticuerpos, se mezcla la muestra con caolín (para evitar falsos positivos). Se añade el virus, que se une a los anticuerpos presentes. Posteriormente, se añaden glóbulos rojos sin sensibilizar:

• No aglutina: Positivo para anticuerpos (+Ac).
• Aglutina: Negativo para anticuerpos (-Ac).

Métodos para Facilitar la Aglutinación con Anticuerpos Incompletos

1. Aumentar la viscosidad del medio: Añadiendo seroalbúmina bovina al 30%.
2. Eliminar residuos negativos de ácido siálico de la membrana: Mediante el uso de enzimas como la tripsina o la papaína.
3. Disminución de la fuerza iónica: Reducir la fuerza iónica del medio que circunda los hematíes utilizando soluciones como LISS.
4. Test de Coombs: Uso de antiinmunoglobulina humana (anticuerpo contra el fragmento Fc de la IgG humana). La antiglobulina reacciona con los anticuerpos unidos a los antígenos de los hematíes, provocando la aglutinación. Puede ser Directa o Indirecta.

Pruebas Erradicadas o en Desuso

Diagnóstico de las Fiebres Tifoideas

La Reacción de Widal ha sido desplazada debido a la frecuencia de reacciones cruzadas o a resultados positivos derivados de una inmunización previa contra la enfermedad.

Diagnóstico de Proteus

La Prueba de Weil-Felix se basa en que pacientes infectados por Rickettsias producen anticuerpos que pueden aglutinar de forma inespecífica con bacterias del género Proteus, lo que se conoce como reacciones cruzadas.