Técnicas Avanzadas de Inclusión Histológica: MMA, Gelatina y Celoidina para Muestras Calcificadas
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Inclusión de Muestras Óseas Calcificadas mediante Metil-Metacrilato (MMA)
La técnica más utilizada tradicionalmente es la de preparar muestras óseas descalcificadas e incluidas en parafina. Sin embargo, esta presenta un inconveniente significativo: modifica la estructura de la fase mineral del tejido óseo.
Para evitar esta alteración, se utiliza la inclusión de muestras óseas calcificadas, partiendo de su infiltración e inclusión con metil-metacrilato (MMA). Cuando se emplea esta técnica, se obtienen importantes ventajas:
- Mantenimiento intacto de la fase mineral del hueso.
- Tinción específica de partes concretas de la muestra.
- Localizaciones histoquímicas de diversas sustancias y enzimas.
Mientras que las técnicas tradicionales de inclusión en parafina requieren una descalcificación previa, la técnica de inclusión de muestras óseas calcificadas hace necesario el uso de MMA como medio de infiltración e inclusión. Esta sustancia se utiliza debido a su capacidad de infiltración en muestras de mayor tamaño y por la versatilidad que presenta en el momento de la tinción.
Inconvenientes del Metil-Metacrilato
También presenta inconvenientes, como la preparación del monómero, la larga duración del procesado de la muestra y el impreciso control de polimerización. A pesar de estas trabas, el MMA no ha llegado a ser reemplazado por los plásticos de última generación.
Pasos Generales para el Procesamiento de Muestras Óseas Calcificadas
Para procesar las muestras óseas calcificadas, es necesario seguir una serie de pasos generales:
- Obtención de la muestra y fijación.
- Deshidratación e Infiltración.
- Polimerización: Proceso de formación de una molécula pesada.
- Corte y montaje.
- Tinción.
Otros Medios de Inclusión Histológica
Inclusión en Gelatina
La inclusión en gelatina es utilizada para cortes de órganos completos. Es muy soluble en agua, por lo que no es necesario deshidratarla ni aclararla. Es importante eliminar completamente el fijador del tejido lavando con agua, ya que, en caso contrario, el fijador desnaturalizaría las proteínas de la gelatina. Como sus puntos de fusión son bajos, las muestras infiltradas pueden tratarse a temperaturas superiores a 40 °C.
Inclusión en Celoidina
La celoidina es usada para muestras neurohistológicas, de tejido óseo y muestras heterogéneas (como el globo ocular). Es una sustancia amorfa blanco-amarillenta, insoluble en agua. Normalmente se obtienen bloques muy duros, por lo que no necesitan temperaturas elevadas.
Inconvenientes de la Celoidina
Entre sus inconvenientes, debemos saber que es un procesamiento lento y no pueden obtenerse cortes menores de 10 micras.
Inclusión en Medios Hidrosolubles
Esta técnica es utilizada para elementos intratisulares que puedan desnaturalizarse por calor o por agentes deshidratantes.