Técnicas de Coloración Histológica y Métodos de Impregnación Argéntica

Clasificación de las Técnicas de Coloración

En la coloración progresiva, los colorantes se aplican siguiendo una secuencia definida con un estricto control de los tiempos de aplicación, de modo que se dejan actuar durante dicho tiempo y la estructura adquiere la coloración progresivamente. Por el contrario, en la coloración regresiva se sobrecolorea el tejido y después se elimina el exceso a través de un proceso de diferenciación (empleando comúnmente etanol y acetona).

Asimismo, podemos distinguir entre:

• Coloración sucesiva: se emplean una serie de colorantes sin mezclarlos, aplicándolos uno tras otro.
• Coloración simultánea: se emplean todos los colorantes al mismo tiempo en una sola solución.

Mecanismos de Tinción y Adhesión

Existen diversos procesos físicos y químicos por los cuales los colorantes se fijan a las estructuras biológicas:

• Difusión: se incorpora el colorante por disolución en las estructuras tisulares. Siguiendo las reglas de difusión, los colorantes pasan de la solución (que es la más concentrada) a las estructuras tisulares de su predilección (que tienen menor concentración).
• Impregnación: las estructuras más densas son las que más se tiñen al contener más huecos capaces de alojar al colorante.
• Electroabsorción: para que se produzca, es necesario que el colorante y el material a teñir tengan cargas eléctricas de polaridad opuesta.
• Adsorción por tensión: se debe a la aspereza de la superficie de un cuerpo, que hace que una sustancia quede adherida a él.

Protocolos de Coloración y Reactivos Específicos

A continuación, se detallan los componentes y reactivos utilizados en las técnicas de impregnación argéntica más comunes:

Método de Gomori

• Permanganato potásico: agente de oxidación.
• Metabisulfito potásico: agente de blanqueamiento.
• Alumbre férrico: actúa como mordiente.
• Nitrato de plata: sal de plata principal.
• Hidróxido potásico: base fuerte.
• Amoniaco: agente complejante.
• Formol al 10%: actúa como segundo reductor.

Método de Gordon-Sweet

• Nitrato de plata: sal metálica.
• Hidróxido sódico: base fuerte.
• Amoniaco: formación del complejo argéntico.
• Cloruro de oro: utilizado para el contrastado suplementario.
• Ácido oxálico: agente de blanqueamiento.
• Alumbre de hierro: actúa como mordiente.
• Tiosulfato sódico: retira la plata no útil (fijado).
• Permanganato potásico: agente de oxidación.
• Formol al 10%: segundo reductor.

Método de Masson-Fontana

• Amoniaco: primer reductor.
• Tejido: actúa como segundo reductor (capacidad argentafín).
• Cloruro de oro: contrastado suplementario.
• Tiosulfato sódico: elimina la plata no reaccionada.
• Rojo nuclear: colorante de contraste.

Método de Grimelius

• Nitrato de plata: reactivo principal.
• Hidroquinona: agente reductor potente.
• Nota técnica: si las muestras están fijadas con formol, se deberán volver a fijar durante toda la noche con líquido de Bouin para optimizar los resultados.