Mètodes d'Aïllament Microbiològic: Sembra i Dilució

Mètodes d'aïllament per sembra per esgotament

Aquests mètodes es basen a arrossegar amb la nansa de Kolle un nombre cada cop més petit de microorganismes sobre un medi sòlid en placa de Petri. L'objectiu és aconseguir colònies aïllades.

Sembra en estria simple o ziga-zaga

1. Esterilitzar la nansa de Kolle i deixar-la refredar al costat del fogonet.
2. Prendre una alíquota del cultiu (líquid o sòlid) amb la nansa de sembra.
3. Realitzar la sembra en estria simple o ziga-zaga sobre la superfície del medi.
4. Esterilitzar la nansa.
5. Incubar la placa en posició invertida.

Sembra en estria múltiple

1. Esterilitzar la nansa de Kolle i deixar-la refredar al costat del fogonet.
2. Prendre una alíquota del cultiu (líquid o sòlid) amb la nansa de sembra i sembrar la primera estria.
3. Esterilitzar la nansa entre cada estria (sense tornar a agafar mostra) i realitzar les estries successives creuant l'anterior.
4. Esterilitzar la nansa.
5. Incubar la placa en posició invertida.

Sembra mitjançant la tècnica dels 4 quadrants

1. Esterilitzar la nansa de Kolle i deixar-la refredar al costat del fogonet.
2. Prendre una alíquota del cultiu (líquid o sòlid) amb la nansa de sembra.
3. Rotular els 4 quadrants a la base de la placa.
4. Sembrar el primer quadrant. Esterilitzar la nansa i sembrar el segon quadrant creuant l'última part del primer. Repetir per al tercer i quart quadrant, esterilitzant la nansa entre cadascun.
5. Esterilitzar la nansa.
6. Incubar la placa en posició invertida.

Sembra mitjançant la tècnica dels tres girs

1. Esterilitzar la nansa de Kolle i deixar-la refredar al costat del fogonet.
2. Prendre una alíquota del cultiu (líquid o sòlid) amb la nansa de sembra i fer una estria inicial.
3. Girar la placa aproximadament 90 graus i fer una segona sèrie d'estries creuant l'anterior. Girar de nou i fer una tercera sèrie d'estries. Important: Sense flamejar la nansa a cada gir.
4. Esterilitzar la nansa.
5. Incubar la placa en posició invertida.

Mètodes d'aïllament per sembra per dilució

Es tracta de sembrar en placa un nombre de microorganismes prou petit perquè, en créixer, cadascun d'ells doni lloc a una colònia ben aïllada.

1. Preparar una sèrie de dilucions decimals del cultiu utilitzant el diluent adequat (p. ex., NaCl 0,9%; Ringer ¼).
2. Sembrar 0,1 mL de les dilucions que es considerin adequades (normalment les més diluïdes) en la superfície d'una placa amb agar solidificat.
3. Realitzar una extensió homogènia de l'inòcul amb la nansa de Drigalski estèril.
4. Incubar les plaques en posició invertida.
5. Observar les colònies aïllades per diferenciar-les i procedir a l'obtenció de cultius purs a partir d'una sola colònia.