Producció d'Insulina mitjançant Enginyeria Genètica

Biotecno: utilitzar l'elaboració de productes utilitzant éssers vius (llet, iogurt…). Enginyeria genètica: conjunt de tècniques que permeten la manipulació de l'ADN d'una espècie (permeten localitzar, aïllar, sintetitzar, manipular, recombinar i transferir a les cèl·lules seqüències específiques d'ADN). Etapes de la transferència de gens:

1. Identificació del gen que sintetitza una determinada molècula d'interès i obtenció del gen (ADN passatger), amb enzims de restricció (tallen l'ADN en regions amb seqüències específiques).
2. Preparació de l'ADN recombinant (utilitzant vectors de clonatge: plasmidis, virus lisogènics, cromosomes de llevats…).
3. Introducció d'ADN dins la cèl·lula hoste mitjançant:

*Mecanismes biològics:

1. Transformació bacteriana: el bacteri (Agrobacterium) provoca tumors a les plantes i conté un plasmidi Ti que s’introdueix a la cèl·lula vegetal, concretament al seu material genètic. Es fa un cultiu, on obtenim una plàntula i després la plantem, obtenint una planta transgènica, ja que conté ADN d’una altra espècie (ex. insecticida).
2. Transducció vírica: utilitzem com a vectors els virus, els quals introdueixen el seu material genètic i s’uneixen amb fragments d’ADN del bacteri infectat, empaquetant-se. Això fa que els nous virus continguin la informació genètica del virus inicial.

*Mecanismes no biològics:

1. Electroporació: introduir diverses molècules en cèl·lules procariotes o eucariotes amb pulsos elèctrics breus d'alt voltatge.
2. Microinjecció: introduir directament l’ADN.
3. Trets de microbales.
4. Producció de còpies d'un gen: hem de fer una selecció de cèl·lules que han agafat l'ADN i amplificar-les per fer moltes còpies de l'ADN:

• Clonatge
• Tècnica PCR

Com es fa la producció d'insulina?

1. Extreure del nucli d'una cèl·lula eucariota (per tant, ha de ser d'un ser humà) el DNA amb el gen que, segons el context, ha de ser el de la insulina humana.
2. Aïllar un plasmidi bacterià (extreure el plasmidi d'un bacteri).
3. Utilitzar enzims de restricció que tallen el DNA per seqüències concretes (tallar el gen humà i el plasmidi).
4. Recombinar DNA (el plasmidi amb el gen de la insulina humana per obtenir el plasmidi recombinant).
5. Transformar un bacteri (el bacteri incorpora el DNA (plasmidi recombinant) del medi).
6. Insulina fabricada pel bacteri (el gen de la insulina humana s'expressa, es transcriu a mRNA i es tradueix pel ribosoma per originar la cadena).