Tècniques de Laboratori: Centrifugació i Electroforesi

Diferències i Similituds entre Centrifugacions

Centrifugació per Gradient de Densitat Zonal i Isopícnica

Diferències:

• A la centrifugació zonal, s'ha d'aturar abans la centrifugació, mentre que a la isopícnica es necessiten períodes llargs de centrifugació.
• La densitat de la capa inferior és més densa que el producte a la zonal, mentre que a la isopícnica no és així.
• El tipus de gradient és preformat a la zonal i autoformat a la isopícnica.
• La centrifugació zonal està indicada per separar macromolècules i orgànuls similars, i la isopícnica per a molècules d'àcids nucleics.

Similituds:

• Empren un tipus de rotor basculant.
• S'obtenen bandes ben separades.

Aplicacions de la Centrifugació en Laboratoris Clínics

• Obtenció de leucòcits: El mètode de barrera és una centrifugació per gradient de densitat zonal en la qual s'empren medis comercials formats per mescles de Ficoll. És un mètode ràpid, típic per a l'obtenció de leucòcits lliures de la resta de cèl·lules sanguínies a partir de sang circulant.
• Fraccionament subcel·lular: A partir d'un homogeneïtzat tissular, s'obtenen per centrifugació diferencial els diferents components cel·lulars.
• Obtenció de sèrum o plasma: Aplicant a la sang una Força Centrífuga Relativa (FCR) de 1.500 g durant 10 minuts, s'aconsegueix una bona separació de sèrum o plasma. Per separar sèrum, s'usen tubs amb un gel de silicona en el fons. En centrifugar el tub, el gel facilita la conservació de les biomolècules presents en el sobrenedant, ja que impedeix que contactin amb els enzims presents en la fracció cel·lular.
• Concentració de cèl·lules: En líquids corporals com l'orina o el líquid cefalorraquidi (LCR), la centrifugació permet concentrar les cèl·lules per al seu estudi.
• Extracció de biomolècules: Es realitza una separació de fases per centrifugació, per a la posterior extracció de biomolècules amb dissolvents orgànics.

Funció de la Solució Tampó en l'Electroforesi

La solució tampó en l'electroforesi compleix les següents funcions:

• Mantenir un pH estable.
• Mantenir una força iònica estable.
• Aconseguir que la conducció de corrent sigui estable, sense variacions derivades de canvis de pH.

L'Efecte Joule en l'Electroforesi

Què és l'Efecte Joule?

L'efecte Joule és el fenomen pel qual una determinada forma d'energia es converteix en calor.

En quins tipus d'electroforesi s'ha de tenir en compte?

Aquest efecte s'ha de tenir en compte en les electroforesis en gel de poliacrilamida.

Com evitar l'Efecte Joule?

Es contrarresta amb sistemes de refrigeració.

Separació de Fragments d'ADN per Electroforesi

Quina tècnica s'aplica?

La tècnica que s'aplica habitualment per a la separació de fragments d'ADN és l'electroforesi en gel d'agarosa.

Com es prepara el suport?

El suport es prepara fent bullir el medi i deixant-lo refredar fins a uns 55 ºC, afegint l'agarosa i deixant refredar amb la pinta col·locada per realitzar els pouets on es durà a terme la sembra posterior.

Característiques de l'Electroforesi en Gel de Poliacrilamida

Què la caracteritza?

La caracteritza una mida del porus molt petita.

Per a quines separacions s'utilitza?

S'utilitza per a la separació principalment de proteïnes i de petits fragments d'ADN i d'ARN.