ab. aislamiento y cultivo d microorganismos

introduccion.-

to2 pertenecen al reino vegetal y son sumamente senciyos (mono o pluricelulares) s yaman ongos moos,o levaduras,siendo l grupo + importante l d ls ongos.l aislamiento y purificacion d levaduras s puede realizar partiendo d la flora epifitica q s encuentra en la superficie d frutas.

ls levaduras son microorganismos unicelulares,q s reproducen asexualmente x gemacion en la mayoria d ls casos ,aunque tb lo acen x fision sexualmente x formacion d esporas,estas al multiplicarse con facilidad en la naturaleza ,su aislamiento requiere d tiempo ya q ls diferentes especies d levaduras s encuentran entremezcladas ,d modo q integran comunidades mixtas.

objetivos.-

• objetivo general.- realizar l aislamiento d levaduras utiles xa realizar la fermentacion utilizando distintos meto2 d aislamiento y cultivo.

objetivos especificos.-

observar ls distintos microorganismos existentes en la flora epifica d la fruta seleccionada q crece en l medio d cultivo preparado.

emplear ls distintos meto2 xa realizar l sembrado d la muestra.

separar  ls levaduras utiles xa la fermentacion d la flora epifica q crece en l medio d cultivo.

escoger d ls levaduras separadas la q mayor poder fermentativo presenta.

 materiales y reactivos.

materiales

1 matraz erlenmeyer 250ml

 4 tubos d ensayo

 1 micropipeta 1-10ml

 4 cajas petri

 1 asa

 1 mexero d alcool

 algodon

 vaso precipitado 250ml

 espatula

5 tips

 2 porta objetos

 cocina,fosforo

 equipos d laboratorio

 autoclave

 microscopio

 congeladora

 balanza semianalitica 

reactivos

 extracto d uva fermentada

 agar malta

 suero ringer

 agua destilada

 glp

fundamento teorico.-

ls levaduras son ls agentes d la fermentacion y s encuentran naturalmente en la superficie d ls plantas,l suelo s su principal abitat encontran2e en invierno en la capa superficial d la tierra.en verano,x medio d ls insectos,polvo y animales,son transporta2 asta l fruto,x lo q su distribucion s produce al azar.existe 1 gran numero d especies q s diferencian x su aspecto,sus propiedades,sus formas d reproduccion y x la forma en la q transforman l azucar.

crecimiento microbiano.-

ls requisitos xa l crecimiento microbiano incluyen factores fisicos y quimicos.entre ls factores fisicos tenemos la temperatura,l p y la presion osmotica.ls factores quimicos necesarios xa l crecimiento bacterial son diversos elementos constitutivos d ls celulas.

 requisitos fisicos: temperatura,p,presion osmotica

requisitos quimicos: carbono,nitrogeno,azufre.y fosforo.

elementos trazas: oxigeno

cultivo (microbiologia)especificamente en microbiologia,1 cultivo s 1 metodo xa la multiplicacion d microorganismos,tales como bacterias ,ongos y parasitos,en l q s prepara 1 medio optimo xa favorecer l proceso deseado.1 cultivo s empleado como 1 metodo fundamental xa l estudio d ls bacterias y otros microorganismos q causan enfermedades en medicina umana y veterinaria.

medios d cultivo:1 d ls sistemas + importantes xa la identificacion d microorganismos s observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en l laboratorio.l material alimenticio en l q crecen ls microorganismos s l medio d cultivo y l crecimiento d ls microorganismos s l cultivo.

alg1s d ls + utiliza2 e importantes son:

  medios enriqueci2: añaden nutrientes a ls cultivos donde l microorganismo exige muxo.(ej.sangre xa q crezca emofilus)

• medios selectivos: añaden compuestos al agar q permiten l crecimiento selectivo d ls microorganismos.ej.cristal violeta: solo crecen gram-;maltosa: solo crecen ls q tengan la enzima maltasa;penicilina: solo crecen eucariotas;etc.)

 • medios diferenciales: ls microorganismos crecen d forma diferente,añadiendo al medio sustancias especiales (sangre).s usa tb viraje d colores.ej.en sangre diferenciamos ls organismos emoliticos d ls q no ls son;en emb (eosina azul d metileno vemos ls q aprovexan lactosa d ls q no;medio mcconky (rojo neutro);en sales d pb vemos ls productores d s2 q dan 1 precipitado negro d lo q no lo producen.1 ejemplo tipico s l caldo comun,q s glucosa + extracto d carne,y peptona ,s ajusta l p,s añade nao,tamponamos,filtramos,espesamos y x ultimo esterilizamos.

 esterilizacion:

l calor seco o umedo elimina todas ls bacterias combinando adecuadamente factores como la temperatura a la q s someten y l tiempo d exposicion.s puede esterilizar x calor seco en estufas a + d 160 °c durante media ora,o x calor umedo en autoclaves a 120 °c durante 20 minutos y a presion superior a la atmosférica.

 pasteurizacion:

pasteurizacion,proceso d calentamiento d 1 liquido,en particular d la lexe,asta 1a temperatura q oscila entre 55 y 70 °c xa destruir ls bacterias perjudiciales,sin producir cambios materiales en la composicion,en l sabor,o en l valor nutritivo del liquido.

 desinfectantes:

ls desinfectantes son 1a arma clave xa protegernos d ls microorganismos ya q estos s encuentran en casi todas partes x eso ls desinfectantes van destruyendo ls microorganismos o impidiendo su desarroyo y asimismo protegen l area donde actuan durante 1 lapso d tiempo.

 antisepticos:

agentes fisicos o quimicos q evitan la putrefaccion,infeccion o cambios similares,d ls alimentos y teji2 vivos,destruyendo ls microorganismos o impidiendo su desarroyo.desde la antigüedad ls alimentos s an conservado gracias al empleo d agentes antisepticos como l calor durante la coccion,la sal y l vinagre en la salazon y adobo,y l umo d la madera (q contiene creosota,1 compuesto similar al acido carbolico) en l aumado d ls carnes.en la actualidad,ls principales agentes antisepticos en la conservacion d ls alimentos son l calor y l frio utiliza2 en procesos como l enlatado,la pasteurizacion y la refrigeracion.la irradiacion s otro medio d conservacion d ls alimentos.

meto2 d aislamientols generos q s encuentra con relativa frecuencia en la naturaleza,x ejemplo sobre ls frutos en putrefaccion,semiyas,forrajes,cueros,maderas,etc.tb s lo encuentra normalmente en l suelo.xa aislarlo s tiene en cuenta su estado natural,procediendo luego d acuerdo con ls tecnicas siguientes:

x dilucion en agar: 1a serie d 4 a 6 tubos d cultivo,cada 1 d ls cuales contiene 10 ml d 1 medio d agar adecuado (medio d czapeck,medio d sabouraud,medio d malta),s calienta en baño d agua xa fundir l agar.enfriar l contenido d ls tubos a 45º c;s añade a cada 1 d eyos 1a pequeña cantidad del material q contiene l moo agitando cuida2amente,s yeva 1a pequeña porcion a 1 2º tubo y l resto s vierte asepticamente en 1a placa d petri;s agita l 2º tubo y s separa 1a pequeña porcion xa l 3º,vertiendo l resto en la placa d petri.s continua del mismo modo asta obtener 4 o 6 muestras,y como l cultivo s va diluyendo d 1a a otra,en alguna d eyas abra ya 1 cultivo puro.

x separacion d esporas d 1a colonia.1a vez seleccionada 1a colonia q s presume pura,s recogen d la misma unas cuantas esporas mediante 1a aguja esterilizada,yevandolas a 1 tubo q contiene 1 medio favorable xa l crecimiento.la operacion s efectùa con ayuda d 1a lupa o bien con l microscopio.

mediante l micromanipulador: l micromanipulador + conocido s l d peterfi,construido x la zeiss;s d tipo mecanico ya q ls agujas,pipetas,ansas y escalpelo s mueven x juegos d torniyos en todas direcciones.consta d 1a camarita en la cual s coloca 1a gota del material a aislar;s observa a traves del miscroscopio.mediante ls dispositivos laterales del micromanipulador s mueven en todo sentido 2 microagujas o 2 micropipetas q permiten recoger o aspirar 1 solo microrganismo d la suspension.

x germinacion d 1a sola espora: s ace 1a dilucion d esporas en agua esteril o salina asta q cada gota contenga solo 1a espora,lo q puede comprobarse con auxilio del microscopio.s ponen entonces varias gotas sobre la superficie d agar,marcando su posicion xa poder localizar l cultivo correcto en l caso d existencia d algun contaminante.

x modificacion del metodo d 1a sola espora d keitt: esta modificacion s debe a ezekial (1930).con ayuda d 1a aguja d extremo plano cargada con l material q contiene ls esporas,s acen varios trazos paralelos sobre la superficie d 1 medio agarizado convenientemente,s invierte entonces la placa incubandola durante 16-24 s.y observandola a traves del fondo con l microscopio (objetivo d 16 mm).1a vez descubiertas ls esporas,s marca con tinta su posicion.

x medio d 1a aguja d punta cilindrica (q obra como sacabocado) s corta l cilindro d agar q contiene l esporo.este cilindro s siembra en 1a caja d petri y s observa xa estar seguro d q existe 1 solo elemento,y luego d desarroyado s resiembra en 1 tubo con medio d cultivo apropiado.s incuba y aparecera la colonia d desarroyo monocitogenetico.

metodo d ansen: en este metodo (ansen 1926) s prepara 1a suspension d esporas en agar,q s aspira en tubos capilares d diametro no muxo mayor q l d ls esporas.ls tubos capilares s observan al microscopio y cuando s descubre 1a espora aislada s rompe l tubo d manera q l segmento contenga solo 1a espora.l cristal s trata con alcool y luego s coloca en 1 medio fresco.la espora s desarroya dando lugar a 1a colonia.este metodo resulta eficaz con esporas grandes y coloreadas,en cambio no lo s con esporas pequeñas.

 concepto d cultivo puro

s denomina cultivo puro (axenico) al q contiene solo 1 tipo d microorganismos.ls cultivos puros s inician a partir d colonias aisladas,d manera q to2 ls individuos del mismo tengan la misma composicion genetica.ls cultivos puros son esenciales xa poder estudiar ls caracteristicas d ls microorganismos y xa poder identificarlos con seguridad.

sin embargo,cada vez s va conoce + sobre l funcionamiento d ls comunidades bacterianas lo q debe acernos reflexionar sobre l exo d q 1 cultivo purosupone unas condiciones no naturales y q,x consiguiente,la fisiologia d ls microorganismosen ambientes naturales puede ser diferente d la q presentan en condicionesd cultivos puros.

 factores fisicos y quimicos q influyen en l crecimiento.

1.- temperatura: cada microorganismo tiene 1a temperatura d crecimiento adecuada.si estudiamos la variacion d la velocidad d crecimiento en funcion d la temperatura d cultivo,podemos observar 1a temperatura minima x debajo d la q no ay crecimiento;a temperaturas mayores s produce 1 incremento lineal d la velocidad d crecimiento con la temperatura d cultivo asta q s alcanza la temperatura optima a la q la velocidad s maxima.x encima d esta temperatura optima,la velocidad d crecimiento decae bruscamente y s produce la muerte celular.

l incremento d la velocidad d crecimiento con la temperatura s debe al incremento generalizado d la velocidad d ls reacciones enzimaticas con la temperatura.s denomina coefi100te d temperatura a la relacion entre l incremento d la velocidad d reaccion y l d temperatura.en terminos generales,la velocidad d ls reacciones bioquimicas suele aumentar entre 1.5 y 2.5 veces al aumentar 10ºc la temperatura a la q tienen lugar.

la falta d crecimiento a temperaturas muy bajas s debe a la reduccion d la velocidad d crecimiento x la reduccion d la velocidad d reaccion y al cambio d estado d ls lipi2 d la membrana celular q pasan d ser flui2 a cristalinos impidiendo l funcionamiento d la membrana celular.

la muerte a altas temperaturas s debe a la desnaturalizacion d ls proteinas y a ls alteraciones producidas en ls membranas lipidicas a esas temperaturas.s importante tener en cuenta q a temperaturas bajas,l metabolismo celular s enlentece y ls celulas paran d crecer;aunque no tienen xq morir.sin embargo,cuando la temperatura s superior a la optima,s produce la muerte celular rapidamente y ls celulas no pueden recuperar su capacidad d division si baja posteriormente la temperatura.esto permite esterilizar x calor y no x frio.

ls microorganismos psicrotrofos son mesofilos q pueden crecer a temperaturas bajas.x tanto,s les puede considerar como psicrofilos facultativos.esto s importante desde l punto d vista aplicado xq cuando s encuentran contaminando alimentos,son capaces d crecer en condiciones d refrigeracion (4 - 8ºc) y d producir infecciones en ls consumidores del alimento (30 - 35 ºc).

ls microorganismos capaces d producir infecciones son ls mesofilos y alg1s psicrotrofos ya q sus temperaturas optimas d crecimiento coinciden con ls corporales.sin embargo,tanto mesofilos como psicrofilos,psicrotrofos y termofilos pueden producir toxinas causantes d intoxicaciones alimentarias.

2.- actividad d agua: s denomina actividad d agua a la relacion entre la presion d vapor d agua del substrato d cultivo (p) y la presion d vapor d agua del agua pura (p0).l valor d la actividad d agua esta relacionado con l d la umedad relativa (r).

l valor d la actividad d agua nos da 1a idea d la cantidad d agua disponible metabolicamente.x ejemplo: comparemos l agua pura donde todas ls moleculas d agua estan libremente disponibles xa reacciones quimicas con l agua presente en 1a disolucion saturada d sal comun (nacl) donde 1a parte importante d ls moleculas d agua participa en la solvatacion d ls iones d la sal disuelta.en este ultimo caso,la actividad d agua s muxo menor q en l 1º.conforme aumenta la cantidad d solutos en l medio,disminuye su actividad d agua.

cuando 1 microorganismo s encuentra en 1 substrato con 1a actividad d agua demasiado baja,su crecimiento s detiene.esta detencion del crecimiento no suele yevar asociada la muerte del microorganismo,sino q este s mantiene en condiciones d resistencia durante 1 tiempo + o - largo.en l caso d ls esporas,la fase d resistencia puede ser considerada practicamente ilimitada.

la gran mayoria d ls microorganismos requiere 1s valores d actividad d agua muy altos xa poder crecer.d exo,ls valores minimos d actividad xa diferentes tipos d microorganismos son,a titulo orientativo,ls siguientes: bacterias aw >0.90,levaduras aw>0.85,ongos filamentosos aw >0.80.como puede verse,ls ongos filamentosos son capaces d crecer en substratos con 1a actividad d agua muxo menor (muxo + secos) d la q permite l crecimiento d bacterias o d levaduras.x esta razon s puede producir deterioro d alimentos d baja actividad d agua (x ejemplo,l queso o almibares) x moos (ongos filamentosos) y no x bacterias.

en funcion d su tolerancia a ambientes con baja aw,ls microorganismos q pueden crecer en estas condiciones s clasifican en alotolerantes,alofilos y xerofilos segun toleren o requieran condiciones salinas o ipersalinas,respectivamente.

la reduccion d la actividad d agua xa limitar l crecimiento bacteriano tiene importancia aplicada en industria alimentaria.la utilizacion d almibares,salmueras y salazones reduce la actividad d agua del alimento xa evitar su deterioro bacteriano.

3.- p: s 1 parametro critico en l crecimiento d microorganismos ya q cada tipo d microorganismo solo puede crecer en 1 rango estrexo d p fuera del cual mueren rapidamente.

l p intracelular s ligeramente superior al del medio q rodea ls celulas ya q,en muxos casos,la obtencion d energia metabolica depende d la existencia d 1a diferencia en la concentracion d protones a ambos la2 d la membrana citoplasmica.

l p interno en la mayoria d ls microorganismo esta en l rango d 6.0 a 7.0.

ls rangos d p tolerables x diferentes tipos d microorganismos son,tb,distintos.ay microorganismos acidofilos q pueden vivir a p=1.0 y otros alcalofilos q toleran p=10.0

ay q considerar q,como consecuencia del metabolismo,l p del medio d crecimiento suele tender a bajar durante l cultivo.x otra parte,la bajada del p del medio q producen ciertos microorganismos les confiere 1a ventaja selectiva frente a otros microorganismos competidores.asi,x ejemplo,ls bacterias lacticas q producen grandes cantidades d acido lactico como consecuencia d su metabolismo primario reducen l p del medio d cultivo a valores inferiores a ls soportables x otras bacterias competidoras (yegan a bajar l p del medio asta 4.5).d esta forma,ls bacterias competidoras mueren y ls lacticas s convierten en la poblacion dominante.

la bajada del p s puede deber a varios factores,1 d ls cuales s la liberacion d aci2 organicos d cadena corta (formico,acetico,lactico) x ciertas bacterias.en este sentido,ay q tener en cuenta q la accion bactericida d estos aci2 organicos d cadena corta s + potente q la debida unicamente a la bajada del p q producen.esto s,ls aci2 organicos d cadena corta son toxicos xa algunas bacterias x si mismos.

l efecto letal del p acido sobre ls microorganismos tiene aplicacion en la conservacion d alimentos acidificandolos.d esta forma,la adicion d acido acetico en forma d vinagre permite la conservacion d alimentos perecederos (escabexes,x ejemplo) y la produccion d aci2 en l curso d fermentaciones naturales permite alargar la vida d ls alimentos (coles fermentadas,x ejemplo).

4.- potencial redox: nos indica la capacidad del substrato xa aceptar o donar electrones,esto s: sus caracteristicas oxidantes o reductoras.1 d ls factores q intervienen en l potencial redox,aunque no l unico,s la concentracion d oxigeno[o2].

ay microorganismos q requieren ambientes oxidantes xa crecer,mientras q otros necesitan ambientes reductores.l metabolismo d ambos tipos d microorganismos presenta diferencias notables.l requerimiento d condiciones oxidantes o reductoras no debe confundirse con la necesidad d presencia o ausencia d oxigeno xa q s produzca l crecimiento.

en general,cuando 1 microorganismo requiere 1 ambiente oxidante s dice q desarroya 1 metabolismo oxidativo (o respirativo) mientras q ls microorganismos q requieren ambientes reductores (o - oxidantes) realizan 1 metabolismo fermentativo.

1 microorganismo s aerobio cuando necesita oxigeno xa vivir y s anaerobio cuando o bien no lo necesita (anaerobios facultativos como ls bacterias entericas,ocomo sacxaromyces cerevisiae;o anaerobios aerotolerantes como ls bacterias lacticas)o cuando muere en presencia d oxigeno (anaerobios estrictos como ls clostridios).

ay microorganismos q viven en ambientes carentes d oxigeno (anaerobios) q,sin embargo,yevan a cabo 1 metabolismo oxidativo xq usan otro aceptor final d electrones q actua como oxidante ambiental.x ejemplo,ls bacterias q "respiran" nitratos (no3-),sulfatos (so42-) u otros compuestos organicos oxida2 (respiracion anaerobia).

ay microorganismos q,aunque viven en presencia d oxigeno,no son capaces d utilizarlo como aceptor final d electrones y deben desarroyar 1 metabolismo fermentativo (ls bacterias lacticas q son anaerobias aerotolerantes,x ejemplo).

x otra parte,ay microorganismos q pueden desarroyar ambos tipos d metabolismo.esto s: en presencia d oxigeno desarroyan 1 metabolismo oxidativo y en su ausencia,fermentativo.l rendimiento d ls procesos fermentativos s menor q l d ls respirativos: ls bacterias y ls levaduras producen - biomasa cuando crecen fermentando q cuando lo acen respirando.

en l curso d ciertas reacciones metabolicas redox s forman compuestos altamente

reactivos (radicales libres,formas superoxido) q pueden dañar ls proteinas,membranas y aci2 nucleicos produ100do la muerte d ls celulas.ls celulas s defienden d estos compuestos reactivos mediante ls enzimas siguientes: superoxido dismutasa (sod) y catalasa.ls anaerobios estrictos carecen d sod y d catalasa o tienen niveles muy bajos d estas enzimas d forma q no pueden sobrevivir en presencia d oxigeno.la deteccion d estas enzimas tiene valor taxonomico.

meto2 d conteo

metodo del numero + probable: basado en series d diluciones y calculo estadistico del numero d bacterias presentes en ls diluciones + altas.s puede acer con 3 o 5 tubos.l metodo s popular aunque poco exacto.

serologia d enriquecimiento: en este procedimiento especialmente desarroyado xa la deteccion d salmoneya,l antisuero no s añade al alimento sino q s efectua 1 paso previo d enriquecimiento del cultivo y d seleccion xa evitar falsos positivos.

(rappaport-vasiliadis modificado) (rv).- caldo rappaport vassiliadis bd o r10) s 1 medio liquido xa l enriquecimiento selectivo d salmoneya.

meto2 d conservacion

crecimiento microbiano en medio liquido

si la bacteria crece en 1 medio liquido,en la mayoria d ls casos ls celulas q s producen en cada division continuan su vida independientemente forman2e 1a suspension d celulas libres.

en 1 cultivo discontinuo d bacterias en medio liquido,s pueden diferenciar 4 fases en la evolucion d ls parametros q miden l crecimiento microbiano:

1.- fase lag o d adaptacion durante la q ls microorganismos adaptan su metabolismo a ls nuevas condiciones ambientales (abundancia d nutrientes y condiciones

d cultivo) xa iniciar la fase d crecimiento exponencial.

2.- fase exponencial o logaritmica: en eya la velocidad d crecimiento s maxima y l tiempo d generacion s minimo.durante esta fase ls bacterias consumen a velocidad maxima ls nutrientes del medio.la evolucion del numero d celulas durante esta fase s explica con ls modelos matematicos q describiremos a continuacion.

3.- fase estacionaria: en eya no s incrementa l numero d bacterias (ni la masa u otros parametros del cultivo).ls celulas en fase estacionaria desarroyan 1 metabolismo diferente al d la fase exponencial y durante eya s produce 1a acumulacion y liberacion

d metabolitos secundarios q pueden tener importancia industrial.

microbiologia general

ls microorganismos entran en fase estacionaria xq s agota algun nutriente esencial del medio o xq ls productos d desexo q an liberado durante la fase exponencial acen q l medio sea inospito xa l crecimiento microbiano.

la fase estacionaria tiene gran importancia xq probablemente represente con mayor fidelidad l estado metabolico real d ls microorganismos en ls ambientes naturales.

4.- fase d muerte: s produce 1a reduccion del numero d bacterias viables del cultivo.

crecimiento microbiano en medio solido

ls fases,parametros y cinetica d crecimiento discutidas xa l caso d ls cultivos liqui2 s presentan tb en cultivos soli2.la cinetica d crecimiento,en este caso,s puede estudiar siguiendo la evolucion del numero d celulas viables x unidad d superficie o x unidad d masa.

cuando 1a celula aislada e inmovil comienza a crecer sobre 1 substrato solido,l resultado del crecimiento al cabo del tiempo s 1a colonia.x consiguiente,s denomina unidad formadora d colonia (ufc) a 1a celula bacteriana viva y aislada q si s encuentra en condiciones d substrato y ambientales adecuadas da lugar a la produccion d 1a colonia en 1 breve lapso d tiempo.si l numero inicial d bacterias x unidad d superficie s muy alto,la confluencia d ls colonias da lugar a lo q s yama 1 cesped cuando s realizan ls cultivos en placas d laboratorio.

en l caso d microorganismos moviles (deslizantes) o en l d ls ongos filamentosos q tienen 1 crecimiento trofico no s producen colonias aisladas sino formaciones + difusas o miceliares.

organismo aerobio

s denominan aerobios o aerobicos a ls organismos q pueden vivir o desarroyarse en presencia d oxigeno diatomico,mientras q si lo necesitan s denominan aerobios estrictos.l adjetivo "aerobio" s aplica no solo a organismos sino tb a ls procesos implica2 ("metabolismo aerobio") y a ls ambientes donde s realizan.1 "ambiente aerobio" s aquel rico en oxigeno,a diferencia d 1 anaerobio,donde l oxigeno esta ausente,o 1 microaerofilico,donde l oxigeno s encuentra a muy baja concentracion.

l metabolismo aerobio (respiracion) surgio en la evolucion despues d q la fotosintesis oxigenica,la forma + comun d fotosintesis,libero a la atmosfera oxigeno,l cual abia sido muy escaso asta entonces.inicialmente represento 1a forma d contrarrestar la toxicidad del oxigeno,+ q 1a manera d aprovexarlo.como la oxidacion d la glucosa y otras sustancias libera muxa + energia q su utilizacion anaerobia x ejemplo,la fermentacion,ls seres aerobios pronto s convirtieron en ls organismos dominantes en la tierra.

organismo anaerobio ls organismos anaerobios o anaerobicos son ls q no utilizan oxigeno (o₂) en su metabolismo,+ exactamente q l aceptor final d electrones s otra sustancia diferente del oxigeno.si l aceptor d electrones s 1a molecula organica (piruvato,acetaldeido,etc.) s trata d metabolismo fermentativo;si l aceptor final s 1a molecula inorganica distinta del oxigeno (sulfato,carbonato,etc.) s trata d respiracion anaerobica.l concepto s opone al d organismo aerobio,en cuyo metabolismo s usa l oxigeno como aceptor final d electrones.aqueyos organismos q no pueden vivir o desarroyarse en presencia d oxigeno s denominan anaerobios estrictos.

levaduras denomina levadura a cualquiera d ls diversos ongos microscopicos unicelulares q son importantes x su capacidad xa realizar la descomposicion mediante fermentacion d diversos cuerpos organicos,principalmente ls azucares o idratos d carbono,produ100do distintas sustancias.aunque en alg1s textos d botanica s considera q ls levaduras "verdaderas" pertenecen solo a la clase ascomycota,desde 1a perspectiva microbiologica s a denominado levadura a to2 ls ongos con predominio d 1a fase unicelular en su ciclo d vida,incluyendo a ls ongos basidiomicetes.a veces suelen estar uni2 entre si formando cadenas.producen enzimas capaces d descomponer diversos sustratos,principalmente ls azucares.1a d ls levaduras + conocidas s la especie sacxaromyces cerevisiae.esta levadura tiene la facultad d crecer en forma anaerobia¹ realizando fermentacion alcoolica.² x esta razon s emplea en muxos procesos d fermentacion industrial,d forma similar a la levadura quimica,x ejemplo en la produccion d cerveza,vino,idromiel,aguol,pan,produccion d antibioticos,etc.ls levaduras s reproducen asexualmente x gemacion o brotacion y sexualmente mediante ascosporas o basidioesporas.durante la reproduccion asexual,1a nueva yema surge d la levadura madre cuando s dan ls condiciones adecuadas,tras lo cual la yema s separa d la madre al alcanzar 1 tamaño adulto.en condiciones d escasez d nutrientes ls levaduras q son capaces d reproducirse sexualmente formaran ascosporas.ls levaduras q no son capaces d recorrer l ciclo sexual completo s clasifican dentro del genero candida.la levadura s la primera celula eucariota en la q s a intentado expresar proteinas recombinantes debido a q s d facil uso industrial: s barata,cultivarla s senciyo y s duplica cada 90 minutos en condiciones nutritivas favorables.ad+,s 1 organismo facil d modificar geneticamente lo q permite realizar experimentos en varios dias o semanas.sin embargo,ls levaduras poseen 1 mecanismo d glicosilacion diferente al q s encuentra en celulas umanas,x lo q ls productos son inm1genicos.

metodologia.-

• lavar todo l material d cristal y posteriormente autoclavar a 1,2 atm y 120ºf xa esterilizar
• enumerar 8 tubos d ensayo y luego añadir a cada 1 6 ml d suero ringer con ayuda d la micropipeta y ls tips,tapara cada tubo con algodon.
• añadir al primer tubo d ensayo 1 ml d mosto,luego tomar d dixo tubo 1 ml y añadir al tubo 2,luego sacar 1 ml d solucion del tubo 2 y añadir al tubo 3,asi sucesivamente xa realizar 8 diluciones.s necesario esterilizar con 1 mexero d alcool en la boca d cada tubo cada vez q saquemos l algodon,y luego taparlo inmediatamente.
• añadir a 4 cajas petri  1a cantidad aleatoria d medio d cultivo previamente preparado,a continuacion añadir a ls cajas petri ls disoluciones d 1*10exp-3 y 1*10exp-5 respectivamente con l cuidado d esterelizar con l mexero  realizando la siembra x versacion en 2 cajas y ls otras 2 cajas petri x extencion .
• dejar ls cajas petri en reposo y bien tapadas durante l lapso d 1a semana en 1 refrigerador xa permitir la formacion d colonias.
• pasada la semana observar ls colonias d microorganismos formadas en ls cajas petri y observar en l  microscopio.
• en 4 tubos verter asta la mitad agar malta e inclinarlo,taparlo con algodon
•  añadir 1a colonia d microorganismos previamente seleccionada x la tecnica d estrias a cada tubo.

calculos y resulta2.-

observaciones y conclusiones.-

• observaciones.-

1. cuando s noto l desarroyo d colonias d levaduras colocamos ls cajas petri al congelador con la finalidad d detener l crecimiento d estas.
   1. al realizar l aislamiento en ls tubos d ensayo s tuvo q escoger ls levaduras + separadas xa q no tenga contaminantes.
   2. ls levaduras presentaron diferentes caracteristicas como ser l color y la cantidad q s desarroyo en l agar eso influencio xa realizar la seleccion d levaduras.
   3. al realizar la seleccion d la levadura con mayor poder fermentativo d ls ya pre escogidas observamos q l agar presento 1 cambio d color debido al p q presenta l medio,x lo cual nos ayudo a escoger ya q mientras + acido l medio la levadura tiene + poder fermentativo.

conclusiones.-

1. s realizo la separacion d la mejor levadura xa realizar la fermentacion.
   1. en la flora epifica d la region s observo distintas levaduras con caracteristicas y propiedades unicas d cada levadura.
   2. s empleo 2 meto2 xa l cultivo d la levadura,q son cultivo x extension y x versacion.
   3. s separo ls mejores levaduras del cultivo xa q estas s desarroyen en mayor cantidad en tubos d ensayo.
   4. s escogieron ls levaduras con mayor poder fermentativo lo cual determinamos con la ayuda d l p en l q s encontraba l agar y s definio q a mayor acidez del medio mayor poder fermentativo.

1. introduccion

l principal objetivo d 1 proceso fermentativo s l d obtener productos metabolicos utiles a partir d materiales biologicos (sustratos).l proceso fermentativo comprende 2 principales fases distintas: la fermentacion y la recuperacion d ls productos.la fermentacion s 1 proceso catabolico d oxidacion incompleta,totalmente anaerobico,siendo l producto final 1 compuesto organico.estos productos finales son ls q caracterizan ls diversos tipos d fermentaciones.xa l cultivo d microorganismos en condiciones optimas,asi como xa la produccion,x parte d ls microorganismos,d ls metabolitos o ls enzimas deseadas,deben ser desarroya2 procedimientos d fermentacion.

1. objetivos
   • general
   • determinar l poder fermentativo q tienen ls levaduras q sembramos en ls practicas anteriores
   • especificos
   • comprender l proceso d fermentacion y to2 ls aspectos relaciona2 con l.
   • analizar q factores afectan l proceso d fermentacion en cuanto a su rendimiento y duracion.
   • determinar la acidez antes y despues del proceso d fermentacion
   • destilar l alcool obtenido xa poder saber la calidad del alcool obtenido
2. marco teorico

definicion d levaduras s denomina levadura a cualquiera d ls diversos ongos microscopicos unicelulares q son importantes x su capacidad xa realizar la descomposicion mediante fermentacion d diversos cuerpos organicos,principalmente ls azucares o idratos d carbono,produ100do distintas sustancias.aunque en alg1s textos d botanica s considera q ls levaduras "verdaderas" pertenecen solo a la clase ascomycota,desde 1a perspectiva microbiologica s a denominado levadura a to2 ls ongos con predominio d 1a fase unicelular en su ciclo d vida,incluyendo a ls ongos basidiomicetes.a veces suelen estar uni2 entre si formando cadenas.producen enzimas capaces d descomponer diversos sustratos,principalmente ls azucares.1a d ls levaduras + conocidas s la especie sacxaromycescerevisiae.esta levadura tiene la facultad d crecer en forma anaerobia^[1] realizando fermentacion alcoolica.^[2] x esta razon s emplea en muxos procesos d fermentacion industrial,d forma similar a la levadura quimica,x ejemplo en la produccion d cerveza,vino,idromiel,aguol,pan,produccion d antibioticos,etc.

ls levaduras s reproducen asexualmente x gemacion o brotacion y sexualmente mediante ascosporas o basidioesporas.durante la reproduccion asexual,1a nueva yema surge d la levadura madre cuando s dan ls condiciones adecuadas,tras lo cual la yema s separa d la madre al alcanzar 1 tamaño adulto.en condiciones d escasez d nutrientes ls levaduras q son capaces d reproducirse sexualmente formaran ascosporas.ls levaduras q no son capaces d recorrer l ciclo sexual completo s clasifican dentro del genero candida.

fisiologia d ls levaduras

ls distintas especies d levaduras pueden ser muy diferentes en cuanto a su fisiologia,la mayoria necesitan + umedad xa crecer y desarroyarse.l intervalo d temperatura d crecimiento d ls levaduras s en general,parecido al d ls ongos,con 1a temperatura optima en torno a ls 25 a30ºc y 1a temperatura maxima en torno a ls 35 a47ºc.1a reaccion acida del medio,proxima a 1 p d 4 a 4.5,estimula l crecimiento d la mayoria d ls levaduras,mientras q en medios basicos,no crecen bien a no ser q s ayan adaptado a ls mismos,crecen mejor en aerobiosis,aunque ls especies d tipo fermentativo son capaces d crecer,aunque lentamente,en anaerobiosis.en general,ls azucares son la fuente energetica + apropiada xa ls levaduras,aunque en ls oxidativas,x ejemplo,ls formadoras d pelicula oxidan ls aci2 organicos y l alcool,y tb contribuyen en la produccion d ls sabores o “bouquet” d ls vinos.

criterios xa d seleccion d 1a levadura

ciclo d crecimiento d poblaciones.

en 1 cultivo bacteriano en medio liquido,s pueden diferenciar 4 fases en la evolucion d ls parametros q miden l crecimiento microbiano:

• fase lag o d adaptacion: durante la q ls microorganismos adaptan su metabolismo a ls nuevas condiciones ambientales (d abundancia d nutrientes) xa poder iniciar l crecimiento exponencial.
• fase exponencial o logaritmica: en eya la velocidad d crecimiento s maxima y l tiempo d generacion s minimo.durante esta fase ls bacterias consumen ls nutrientes del medio a velocidad maxima.la evolucion del numero d celulas durante esta fase s explica con l modelo matematico descrito anteriormente.esta fase corresponde a la d infeccion y multiplicacion dentro del organismo del agente infeccioso.
• fase estacionaria: en eya no s incrementa l numero d bacterias (ni la masa u otros parametros del cultivo).ls celulas en fase estacionaria desarroyan 1 metabolismo diferente al d la fase d exponencial y durante eya s produce 1a acumulacion y liberacion d metabolitos secundarios q pueden tener importancia en l curso d ls infecciones o intoxicaciones producidas x bacterias.

ls microorganismos entran en fase estacionaria bien xq s agota algun nutriente esencial del medio,xq ls productos d desexo q an liberado durante la fase d crecimiento exponencial acen q l medio sea inospito xa l crecimiento microbiano o x la presencia d competidores u otras celulas q limiten su crecimiento.

la fase estacionaria tiene gran importancia xq probablemente represente con mayor fidelidad l estado metabolico real d ls microorganismos en muxos ambientes naturales.

• fase d muerte: s produce 1a reduccion del numero d bacterias viables del cultivo.ls fases,parametros y cinetica d crecimiento discutidas xa l caso d ls medios liqui2 s presentan tb en ls soli2.la cinetica d crecimiento,en este caso,solo s puede seguir utilizando 1s sistemas d deteccion especiales siendo l + senciyo,la medida del numero d celulas viables x unidad d superficie o x unidad d masa.

estudios d müyer-turgau

en 1866 louis pasteur aislo ls primeras bacterias del vino e inicio sus “etudes sur le vin” pasteur era d la opinion d q todas ls bacterias del vino eran perjudiciales xa l mismo,la reduccion d aci2 en l vino s seguia relacionando con la precipitacion del tartarico,ya en 1891 erman müyer-turgau,postulo q la reduccion d ls aci2 podia ser resultado d ls bacterias,asta q kox y seiffert confirmaron en 1987 y 1901 respectivamente la teoria d müyer-turgau,dejando asi d ser 1 postulado,y empezar a desarroyarse distintas investigaciones sobre ls bacterias presentes en l vino,asi en 1913 müyer-turgau y osterwalde.explicaron la degradacion bacteriana del acido malico en acido lactico y co2,bautizaron este proceso como “desacidificacion biologica” o “fermentacion malolactica” y atribuyeron l proceso a la bacteriumgracile.en la decada d 1950,la aplicacion d nuevos meto2 enzimaticos ayudaron a explicar ls reacciones q s q s producen durante la degradacion del acido malico.

fermentacion espontaneal proceso tradicional d fermentacion suele ser 1a actividad espontanea,sin asepsia (desinfeccion),producto d la accion conjunta d 1a variedad d microorganismos.en 1 biorreactor -q puede ser oyas d barro o d metal,1a cesta o 1a simple cavidad en la tierra forrada d ojas-,ls variedades mejor adaptadas y con l maximo coefi100te d crecimiento,predominan en condiciones controladas.en consecuencia,mejorar todo lo posible l control d esos meto2 y d la flora microbiana asociada a la fermentacion representa 1 d ls principales retos xa mejorar ls tecnologias d fermentacion d ls alimentos.tb ace falta crear sistemas d control d calidad adecua2,x ejemplo utilizando materias primas d gran calidad,normas d igiene apropiadas en l sitio d elaboracion,y 1 envase adecuado.si s mejorara l control del proceso creando biorreactores + apropia2,en particular ls q sirven xa fermentar materias primas solidas,mejoraria la calidad y la cantidad d alimentos fermenta2 disponibles en ls paises en desarroyo.la seleccion y produccion d variedades d microbios + productivos,y l control y manipulacion d ls condiciones d cultivo,tb podrian aumentar la eficacia d ls procesos d fermentacion.

poder fermentativo

biotecnologia d ls fermentaciones alcoolicas la fermentacion alcoolica s realizada principalmente x ls levaduras.la + importante s sacxaromycecerevisiae,q s emplea en la fabricacion d vino,cerveza,alcooles industriales y pan.en la fermentacion alcoolica ls azucares s oxidan asta ser converti2 en piruvato en 1 proceso semejante a la glucolisis.despues l piruvato s decarboxila y s convierte en acetaldeido q posteriormente s reduce a etanol.

l vino s obtiene d la fermentacion alcoolica d ls azucares presentes en l zumo d uva.

la cerveza s elabora a partir d cereales (principalmente cebada,aunque tb s utiliza maiz y arroz)

q contienen almidon en sus granos.como l almidon no fermenta directamente,s ace germinar ls semiyas,

lo q ace q produzcan amilasas q degradaran l almidon a glucosa.

otras bebidas alcoolicas s obtienen d la destilacion del alcool obtenido x fermentacion d diversos productos.

en la fabricacion del pan ls levaduras fermentan ls azucares presentes en la arina d trigo,lo q producealcool etilico y burbujas d co2 q provocan 1 aumento del volumen d la masa y le dan l aspecto esponjosocaracteristico.la coccion elimina l alcool y destruye ls celulas d levadura.

4 materiales y reactivos

4.1 materiales

• 2 bañadores
  • 2 matraces erlenmeyer 250 ml
  • soporte universal
  • pinzas
  • pipetas
  • probeta d 100 ml
  • orniya
  • rejiya d amianto
  • vaso d precipitado
  • mexero
  • encendedor
  • tela

4.2 reactivos

 azucar

uva

fenoftaleina

nao (0.0943 n)

2so4

agua destilada

4.3 equipos

 balanza analitica

pmetro

autoclave

refractometro

autoclave

mufla

microvinificador

destilador simple

5.metodologia

l medio kilo d uva fue estrujado con l cuidado d no aplastar pepas,1a vez culminado este proceso s continuo con la extraccion d todo l jugo a traves d 1a tela.1a vez obtenido l jugo d uva s mide en l refractometro ls ºbrix d la uva (aproximadamente s debe tener 1 valor aproximado a ls 24ºbrix si no s asi s debe agregar azucar).

s saca 1a alicuota d 50 ml d jugo d uva y s lo pone en 1 matraz erlenmeyer (previamente midiendo l p inicial) y s yeva al autoclave x aprox.15 mins.

la valvula d müyer debe ser yenada asta l aforo con 2so4 y s esteriliza la tapa a calor d vapor.1a vez enfriado l mosto d uva s introduce la levadura seleccionada con ls cuida2 aprendi2 en la practica nº 1.1a vez q la levadura este en nuestro mosto s debe tapar cuida2amente (l matraz) y s debe tomar la masa inicial antes d yevar l matraz a la mufla.

durante 2 semanas s ace 1 control d peso del matraz.1a vez pasadas ls 2 semanas s debe acer pruebas con l fermento.

determinacion d acidez en 1 matraz erlenmeyer con 200 ml d agua ervida agregar 5 ml d fermento agregar fenoftaleina y titular con nao asta q cambie d color (d transparente a rosado bajo).

determinacion d azucar residual tomar en 1a alicuota d 10 ml d fermento en 1 vaso d precipitado y esperar a q ebuya asta la mitad luego enrasamos con 10 ml lo yevamos enfriar y observar x l refractometro.

determinacion d alcool s arma l equipo d destilacion,agregar 50 ml d fermento al balon y luego destilar asta + o - la mitad del volumen q s tenia en l balon.pesar l picnometro vacio y limpio.registrar este dato,yenar l picnometro con 2o,colocar la tapa y secar x fuera,pesar l picnometro con l 2o.vaciar l picnometro  volverlo a yenar xo con l destilado y luego pesar.

determinacion d acides volatil s arma l equipo d destilacion x arrastre d vapor,introducimos 50 ml d fermento s espera a obtener l destilado y luego s yeva a titular con nao (agregando fenoftaleina antes) asta q cambie a 1 color rosado claro.

6. resulta2

a) concentracion

la concentracion inicial del mosto s d 24 gra2 brix

b) determinacion d p

- l p inicial s 3.5

- l p final s 3.43

con esto corroboramos q s produjo aci2 durante l proceso d fermentacion

c) determinacion d poder fermentativo

pf= 0,55 % v/v d etanol

d) determinacion d alcool

determinar la densidad relativa del alcool mediante metodo del prcnometro

d la tabla s obtiene q 0,6 % v/v

e) determinacion d azucar residual

l valor observado en l refractometro era d 17,7°brix

segunda parte

f) determinacion d acidez total

xa la titulacion inicial                                           

despues d la fermentacion

g) determinacion d acidez volatil

) calculo d la cinetica fermentativa

7.observaciones y conclusiones

                        7.1 observaciones

• antes d preparar muestras s debe tomar muy en cuenta q l mexero tiene q estar encendido y q s debe trabajar a su alrededor.
• s deben esterilizar ls materiales antes d trabajar.
• s debe tener bastante cuidado a la ora d la manipulacion ya algunas bacterias pueden ser dañinas xa la salud.
• tener ls manos limpias (sera d gran utilidad usar guantes) y proceder d manera correcta ayuda bastante a evitar la contaminacion d la muestra.
• 1a vez terminado l proceso d fermentacion 1 indicador d q s tuvo 1a buena fermentacion s l 2so4,este debe presentar 1 color amariyo bastante fuerte xo si s observa 1 amariyo claro la fermentacion no fue exitosa
• no s observo ningun tipo d espuma formada durante l proceso d fermentacion
• l viraje d color en la titulaciones fue d transparente a 1 rosado bajo
• a la ora d la determinacion del peso especifico del alcool l destilado obtenido no fue sufi100te xa yenar l picnometro y s enrazo con agua destilada
• 1 grupo rompio l tubo d destilacion x arrastre d vapor
• en la valvula d müyer s pudo observar q 1 poco cantidad d 2so4 subio x l tubo eso debido al vacio q s creo.
• la funcion d la valvula d müyer s controlar la salida d co2
• no ubo efervescencia en l fermentado
• no s controlo d manera correcta ls pesos del matraz erlenmeyer

                        7.2 conclusiones

• s determino con exito l poder fermentativo d ls levaduras q sembramos en practicas anteriores
• lastimosamente no s pudo obtener desprendimiento d co2 sufi100te xa q s d 1a buena fermentacion
• s comprendio a cabalidad l proceso fermentativo y ls procesos relaciona2 a este.
• s analizaron ls factores q afectan l proceso d fermentacion

8.cuestionario

1. explicar  brevemente ls siguientes terminos
   • fermentacion la fermentacion s 1 proceso catabolico d oxidacion incompleta,totalmente anaerobico,siendo l producto final 1 compuesto organico.estos productos finales son ls q caracterizan ls diversos tipos d fermentaciones.
   • melazala melaza o miel d caña s 1 producto liquido espeso derivado d la caña d azucar y en menor medida d la remolaxa azucarera,obtenido del residuo restante en ls cubas d extraccion d ls azucares.su aspecto s similar al d la miel aunque d color parduzco muy oscuro,practicamente negro.l sabor s dulce,ligeramente similar al del regaliz,con 1 pequeño regusto amargo.nutricionalmente presenta 1 altisimo contenido en idratos d carbono ad+ d vitaminas del grupo b y abundantes minerales,entre ls q destacan l ierro,cobre y magnesio.su contenido d agua s bajo.s elabora mediante la coccion del jugo d la caña d azucar asta la evaporacion parcial del agua q este contiene,forman2e 1 producto meloso semicristalizado.
   • mosto l mosto s l zumo d la uva q contiene diversos elementos d la uva como pueden ser la piel,ls semiyas,etcetera.s considera 1a d ls primeras etapas d la elaboracion del vino.
   • biotecnologia la biotecnologia s puede definir como l uso d organismos vivos o d compuestos obteni2 d organismosvivos xa obtener productos d valor xa l ombre.ls agentes biologicos emplea2 son esencialmentemicroorganismos (bacterias –actinomicetes y eubacterias –,levaduras y moos),celulas animales y vegetales y enzimas.
   • inoculo existen diversos tipos d inoculo y numerosas formas d aplicarlo q facilitan su manipulacion,mejoran su viavilidad,su infectividad y su efectvidad.ls 2 tipos basicos d inoculo son l esporal y l micelial.podemos señalar como principales ventajas del inoculo esporal l ser 1 metodo barato y senciyo d obtener,siendo x eyo bastante utilizado,aunque tiene como inconvenientes: q a d ser usado rapidamente,ya q ls esporas van perdiendo viabilidad con l tiempo,y q no s 1 metodo totalmente efectivo.algunasesporaspuedenconservarse viables durante 2 o 3 meses si s mantienen en frio< pero="" el="" tiempo="" que="" se="" pueden="" tener="" almacenadas="" puede="" variar="" mucho="" de="" unas="" especies="" a="" otras="" y="">

• pie d cuba l pie d cuba,s la cantidad d mosto en fermentacion q s utiliza xa comenzar otra fermentacion en otra barrica.
  l pie d cuba s 1a preparacion q s ace antes d ls primeras vendimias,s trata d recolectar 1s dias antes unas uvas + maduras,y a temperatura adecuada,dejar q empiecen la fermentacion,cuando entremos la vendimia,en l fondo d ls 1ºs depositos repartimos estos fermentos,xa sembrar ls otros depositos suelen utilizarse mostos d estos 1ºs,la capacidad d desarroyarse con rapidez ls levaduras s asombrosa.
  la siembra d levaduras s realiza mediante la tecnica d "pie d cuba",y s prepara d forma distinta segun s utilicen cultivos propios o levaduras secas,d forma q l numero y estado en l "tirage" sea 1-2 miyones d celulas x mililitro en l vino (d 2 a 3 litros d pie d cuba x ectolitro).
  • sorgols sorgos (sorgumspp.) son 1 genero botanico d unas 20 especies d gramineas^[1] oriundas d ls regiones tropicales y subtropicales d africa oriental.s cultivan en su zona d origen,europa,america y asia como cereal xa consumo umano,animal,en la produccion d forrajes,y xa la elaboracion d bebidas alcoolicas.su resistencia a la sequia y l calor lo ace 1 cultivo importante en regiones aridas,y s 1 d ls cultivos alimentarios + importantes del mundo.al tratarse d 1 alimento carente d gluten,representa 1a opcion nutritiva xa ls personas celiacas.posee propiedades antidiarreicas,o astringentes,y omeostaticas.
  • flora blastomicetica en 1958 baldomero iñigo l.realizo l analisis microbiologico d diversas variedades d frutas y a aislado 119 cepas d blastomicetos.mediante l estudio y clasificacion d ls mismas,a confirmado la presencia d levaduras en la superficie d todas ls frutas maduras examinadas y la ausencia d aqueyas en ls frutas verdes.ace notar l predominio d ls formas esporigenas sobre ls no esporigenas,siendo 64,2 y 85,8 % respectivamente.demuestra d kloeckeraapiculata en todas ls frutas maduras analizadas,a esto s le yama flora blastomicetica.en ls frutas d cascara dura (platano y naranja),encontro especies solamente del genero kloeckeraapiculata.son ls microorganismos existentes sobre la pelicula superficial d 1 fermento

1. q caracteristicas debe reunir 1 medio d cultivo xa elaborar 1 pie d cuba?indique la razon x la cual durante la practica s utilizo la valvula d müyer en l microvinificador.

            r.- la composicion d ls medios d cultivo debe ser constantemente adaptada            al proceso fermentativo.ls sustratos emplea2 son d diversa naturaleza,                 pueden ser d naturaleza      renovable y no renovable.ls parametros d     seleccion d 1 sustrato son:

s utilizo la valvula d müyer xa regular y evitar la salida del co2

1.  en 1 proceso fermentativo: xa q s utilizan sustratos y cuales son sus parametros d seleccion?indique ls fases d 1a fermentacion,como s suceden ls levaduras?

            r.- s utilizan ls sustratos xq a partir d estos s obtienen ls productos                como               ser etanol,yogurt etc.

            - disponibilidad y abundancia (cantidad,localizacion)

            - precio (costo sustrato representa l 30 a 50% del costo total)

            - toxicidad (sustratos industriales y sustratos agricolas)

            - efi100cia d conversion.

            - pretratamiento del sustrato.

1. durante la practica:cuales son ls procesos d fermentacion y asimilacion q s dieron en l microvinificador?q reacciones quimicas s dieron?

1. durante 1 proceso fermentativo,s da 4 perio2 perfectamente diferenciadas.mencione q levaduras intervienen en cada periodo.q funciones especificas,caracteristicas,concentraciones,q producen y en q dias predominan cada periodo?r.- en 1 proceso fermentativo s perfilan 2 etapas biologicas diferenciadas:a) etapa fermentativa: en esta etapa participan + d 2 especies,d forma escalonada,sucedien2e en 3 fases:en la 1° predominan levaduras apiculadas,productoras d bajo grado alcoolico e importantes concentraciones d aci2 volatiles (fundamentalmente acetico).en la 3° esta dominada x ls distintas especies del genero sacxaromyces,tipicamente alcolooligenas,q terminan l procesofermentativo con l total agotamiento d ls azucares

b) etapa aerobica 1a vez terminada la fermentacion ya en la fase aerobica aparecen velos blastomiceticos sobre la superficie del vino,tales velos estan constitui2 x

1. 1 buen vino segun ls expertos en enologia s q l mosto este en 23.9°bx d la uva xasselas entre otros detayes + como ser l sabor  aroma textura etc.usted como empresario d vinos tiene 450 tn d uva xasselas sabiendo q xa l pie d cuba utilizara cepa sacx.cervisae (7.73 g/l) usara azucar refinada con 1a pureza d 92.7% d sacarosa,lectura en l refractometro 15.3°bx,1 litro d vino necesita 1.9 kg d uva xassela,1 kg d sacarosa produce 500 g d etanol y 480g co2 todo l proceso s a 20 °c determine a) cuantos l aprox.d vino va a producir b) cuantos kg d azucar refinada va a usar c) cuantos litros d etanol produce y cuantos kg d co2 s libera d) q cantidad va a inocula

datos

23.9°bx

450 tn uva xessela

cepa  7.73 g/l

92.7% sacarosa

15.2°bx