Duplicación del adn
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-Movimiento de partículas según carga en un campo eléctrico.
-Fraccionamient de ac nucleicos y proteínas
-Ac nucleico acidico por el fosfato. Carga negativa
Malla molecular
-Agarosa -> Aparecen poros según la concentración. El medio se mezcla con tampón (todo lo que es eléctrico debe estar en tampón). El gel es la malla y las partículas a estudiar pasan a través de el.
*Para estudiar el ADN, debemos agregarle bromuro de etidio para poder visualizarlo (Intercalante)
*Azul de bromofenol avanza hacia el polo positivo sin interactuar con nada, indica el avance de la reacc. (Indicador del frente iónico)
-Para comparar, los acid nucleicos deben ser lineales.
-Poliacrilamida (PAA) le agregamos Bisacrilamida y en conjunto con el PAA produce una "celdilla", las celdillas o poros son mas pequeños que los formados en la agarosa. En general los geles verticales son para Proteínas.
-La solución se agrega cuando esta todo liquido, las proteínas pueden tener o no carga neta. Cada proteína tiene un pH donde tiene carga neta. (A pH 7 la mayoría de las proteínas tiene carga neta negativa)
Condiciones
*Neutra o nativa dejamos las moléculas como son.
*Denaturante cuando se quiere identificar el tamaño de la molécula. Se deben abrir enlaces disulfuro. (BMe) y (SDS -> estabiliza la denaturacion). Cuando se denatura tienen todas casi la misma carga y forma.
-Al introducir una mezcla, algunas moléculas tienen desventaja en cuanto a camino recorrido. Para eso, hay geles especiales:
1*Separador: ordena las moléculas según tamaño de poros, su pH es alrededor de 8.
2*Espaciador: sus poros son mas grandes que los del separador. Su pH es alrededor de 6 (pH parecido al pI de la glicina)
-La glicina empuja a las proteínas a través del g.espaciador.
-El gel debe teñirse posteriormente para visualizar las proteínas ( Tinción coomassie, metal, fluorosforo,etc).