Técnicas cromatográficas: MEKC, HPLC-DAD y GC-FID

Resumen

El documento describe tres técnicas cromatográficas: la Cromatografía Electrocinética Micelar (MEKC), la Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC) con detector de arreglo de diodos (DAD) y la Cromatografía de Gases (GC) con detector de ionización de llama (FID). Se explican sus principios de separación, el funcionamiento de los detectores y algunas aplicaciones. El estudiante aprenderá qué fases intervienen en cada técnica y cuándo conviene usar cada detector.

Puntos clave

La MEKC separa muestras por partición entre micelas (fase pseudo-estacionaria) y una solución tampón acuosa (fase móvil).
En MEKC la solución contiene tensoactivos en concentración superior a la Concentración Micelar Crítica (CMC).
La HPLC separa analitos mediante una fase móvil y una fase estacionaria, y mejora los resultados gracias a la alta presión de la corrida.
El DAD es un detector UV que monitoriza el rango UV completo mediante una matriz de fotodiodos.
La GC se usa principalmente para compuestos potencialmente volátiles y se acopla a diversos detectores según el compuesto a medir.
El FID produce una respuesta por combustión de compuestos orgánicos en llama aire-hidrógeno, midiéndose la corriente entre dos electrodos; es universal para orgánicos y destructivo.

Ponte a prueba

Cromatografía Electrocinética Micelar (MEKC)

La Cromatografía Electrocinética Micelar (MEKC) es una técnica cromatográfica que separa las muestras por partición diferencial entre micelas (fase pseudo-estacionaria) y una solución tampón acuosa circundante (fase móvil).

Los métodos básicos de configuración y detección utilizados para el MEKC son los mismos que para la Electroforesis Capilar (CE). La diferencia radica en que la solución contiene agentes tensoactivos en una concentración superior a la Concentración Micelar Crítica (CMC). Por encima de esta concentración, los monómeros tensoactivos están en equilibrio con las micelas.

Ejemplos de Aplicación de MEKC:

Detección de pesticidas.
Separación de aminoácidos esenciales de cadena ramificada.

Equipos y Funcionamiento de la Cromatografía de Alta Resolución

Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC) con Detector de Arreglo de Diodos (DAD)

La Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC) es una técnica que se utiliza para la separación de analitos mediante dos fases, una móvil y otra estacionaria. Optimiza los resultados debido a la elevación de la presión a la que se somete la corrida cromatográfica.

Funcionamiento del Detector de Arreglo de Diodos (DAD)

El Detector de Arreglo de Diodos (DAD) es un avanzado detector UV con la capacidad de monitorear a través del rango UV completo. Utiliza una matriz de fotodiodos que detectan la luz dispersada por un monocromador fijo en una gama de longitudes de onda.

Este método es útil para mezclas complejas que contienen compuestos con rangos de absorbancia muy diferentes.

Cromatografía de Gases (GC) con Detector de Ionización de Llama (FID)

La Cromatografía de Gases (GC) se utiliza principalmente para compuestos potencialmente volátiles. Generalmente se acopla a detectores de diversos tipos para poder cuantificar los compuestos. La elección del detector depende principalmente de las características del compuesto que se desea medir.

Funcionamiento del Detector de Ionización de Llama (FID)

El Detector de Ionización de Llama (FID) se acopla a la GC. La respuesta del detector se debe a la combustión de los compuestos orgánicos en una llama de aire-hidrógeno. Los compuestos, al quemarse, producen iones y electrones que pueden conducir la corriente eléctrica. Se mide la intensidad de esta corriente entre dos electrodos situados a los lados de la llama.

Características del FID:

Respuesta universal a compuestos orgánicos.
Es un detector destructivo.

Preguntas frecuentes

¿Qué es la MEKC?

La Cromatografía Electrocinética Micelar es una técnica que separa muestras por partición diferencial entre micelas y una solución tampón acuosa. Sus métodos de configuración y detección son los mismos que los de la Electroforesis Capilar.

¿Para qué compuestos es útil el detector DAD?

El DAD es útil para mezclas complejas que contienen compuestos con rangos de absorbancia muy diferentes, porque registra todo el rango UV.

¿Por qué el FID es un detector universal y destructivo?

Responde a compuestos orgánicos en general porque al quemarse producen iones y electrones que conducen corriente. Es destructivo porque la muestra se quema en la llama.