Métodos de introducción del vector de clonación

TEMA 8. Clonación De ácidos nucleicos.

1)¿Qué es la clonación molecular?. Enumera Sus ventajas como técnica de amplificación de ADN. ¿Qué dos elementos son Imprescindibles para clonar una molécula de ADN?

-Es un proceso de amplificación in vivo de Secuencias de ADN genómico o de ADNc basada en la tecnología de ADN recombinante.

-VENTAJAS:        

oPermite obtener cantidades ilimitadas de la Secuencia de interés.

oSe pueden clonar secuencias de ADN de gran Tamaño, mucho mayores q las q se pueden amplificar mediante PCR.

oPosibilita la expresión de genes o de secuencias Para la producción de proteínas, hormonas…

-Los dos elementos imprescindibles: Los vectores De clonación y las células hospedadoras que incorporan el vector y que lo Multiplican por replicación.

2)El proceso de clonación implica:

-La inserción del fragmento de ADN q se quiere Amplificar en una molécula portadora o vector.

-La introducción del vector recombinante en una Célula viva hospedadora.

-La selección y multiplicación en cultivo de las Células q portan el ADN recombinante.

-La recuperación del fragmento amplificado.

3)Fases del proceso de clonación (TRES):

-Creación de un vector recombinante. (preparación adn q se va a clonar, del vector de clonación[vector circular con diana de Restricción, vector circular con dos dianas d restric, vector lineal con diana De restric única, vector lineal con dos dianas de restric], inserción del adn Extraño en el vector)

-Introducción del vector recombinante en la Célula hospedadora. (transf. Bacteriana, transfeccion, transducción, Electroporacion)

-Selección e identificación de los clones q Llevan la secuencia de interés.

4)Define:

-Vector de clonación: son moléculas de ADN Q pueden replicarse autónomamente en una célula huésped y que permiten la Inserción de ADN, sin perder la capacidad de replicación autónoma.

-Vector lanzadera: vectores híbridos q Contienen orígenes de replicación de dos hospedadores diferentes, un plasmido Bacteriano y otro de levadura o de virus animal como el SV40.

-Vector recombinante: aquel q contiene un Inserto de ADN extraño.

-Célula hospedadora: son aquellas en las q Se introduce el vector de clonación para su amplificación mediante replicación.

-Transfección: proceso similar a la transf Bacteriana, pero en células hospedadoras eucariotas, ppalmnte animales.

-Transformación bacteriana: captación e Internalización x parte de una bacteria de molec de ADN presentes en el medio Externo.

-Transducción: introducción d material Genético extraño en una cel x la acción d un virus.

-Electroporacion: aplicar cortos pulsos Eléctricos de alto voltaje a una mezcla de células hospedadoras en suspensión y Vectores recombinantes en solución.

-Ratoon transgénico: aquel al q se le ha Modificado su ADN, ya sea x la introducción d un gen nuevo o x la eliminación d Un gen propio. Se usan x estudio enfermdds genéticas.

-Terapia génica: consiste en transferir Genes normales a células somáticas para corregir una enfrmdd genética (hemofilia, Fibrosis quística…)