Microscopio: Tipos, Partes y Técnicas de Observación Bacteriológica

Microscopio simple (lupa): lente convergente de pequeña distancia focal. Produce una imagen virtual, aumentada y derecha.

Microscopio compuesto: utiliza dos sistemas de lentes (objetivo y ocular) para obtener una imagen virtual, invertida y aumentada.

Partes del microscopio

Sistema mecánico

Pie (estabilidad), columna/brazo (transporte y soporte), tubo (alberga el revólver y el ocular), platina (plataforma con pinzas y movimientos) y subplatina (sostiene el condensador, el diafragma iris, el espejo y los tornillos macrométrico y micrométrico).

Sistema óptico

Ocular (actúa como lupa, por ejemplo 5X, 10X, 15X), objetivos (de bajo poder, de gran poder y de inmersión en aceite), condensador (concentra la luz) y espejo.

Técnicas especiales

Campo oscuro: para objetos pequeños, pálidos o incoloros (por ejemplo, T. pallidum). Se ven brillantes sobre fondo negro mediante luz indirecta.

Contraste de fase: usa anillos ópticos para transformar diferencias de fase en amplitud, permitiendo ver cuerpos transparentes sin coloración previa.

Manejo y cuidado del microscopio

En seco

Usar el objetivo de bajo poder, subir el condensador, abrir el diafragma y enfocar primero con el tornillo macrométrico, afinando con el micrométrico.

Inmersión en aceite

Colocar una gota de aceite de cedro sobre la preparación, llevar el condensador arriba, al tope, y usar el objetivo de inmersión con mucho cuidado para no dañar la lente.

Mantenimiento

Proteger del polvo y la humedad. Limpiar las lentes con pincel suave o gasa (con agua destilada si es necesario) y retirar los residuos de aceite con éter, gasolina o xilol.

Observación bacteriológica

Examen en fresco

Permite estudiar bacterias vivas (morfología y movilidad). Se visualizan gracias al índice de refracción (por ejemplo, entre lámina y laminilla, en campo oscuro o con tinta china).

Previa coloración

Es necesaria porque el índice de refracción de las bacterias es similar al del agua. Se prefieren colorantes básicos (con afinidad por el núcleo o cuerpo bacteriano, como el azul de metileno), que se potencian con mordientes (ácido tánico, lugol) para fijar el color de forma más rápida e intensa.

Tipos de coloración y microorganismos

Coloración simple

Usa un solo colorante básico (por ejemplo, azul de metileno).

Coloración de Gram (diferencial)

Grampositivos

Retienen el cristal violeta (color violeta/azul) debido a su menor cantidad de lípidos y a su pared gruesa.

• Cocos: Streptococcus pyogenes, S. pneumoniae, Staphylococcus aureus, etc.
• Bacilos: Bacillus subtilis, Corynebacterium diphtheriae, Clostridium tetani, etc.

Gramnegativos

Se decoloran con alcohol-acetona y se tiñen con safranina (rojo-rosado).

• Cocos: Neisseria gonorrhoeae, Neisseria meningitidis.
• Bacilos: enterobacterias (Salmonella, Shigella, Escherichia, Proteus, Klebsiella, Pseudomonas).

Otras coloraciones

• Ziehl-Neelsen: bacilos ácido-alcohol resistentes (BAAR), como Mycobacterium tuberculosis.
• Giemsa: células sanguíneas y parasitología.
• Hiss: cápsulas.
• Albert: gránulos metacromáticos.
• Fontana-Tribondeau: espiroquetas (enfermedades de transmisión sexual).