Producción de Anticuerpos Monoclonales y Técnicas Inmunoenzimáticas

Producción de Anticuerpos Monoclonales

La producción de anticuerpos monoclonales se realiza a partir del sobrenadante de cultivos en masa tras la inoculación intraperitoneal del hibridoma en animales histocompatibles. Los anticuerpos monoclonales se separarán y purificarán mediante los métodos convencionales.

Aunque son susceptibles de mutar, los hibridomas mantienen sus características durante muchas generaciones. A los 10 días, el cultivo contendrá únicamente los hibridomas, ya que poseen las características de los linfocitos B (LB) sin necesidad de estimulación previa. El proceso consiste en distribuir los hibridomas en pocillos para inducir la producción de anticuerpos y seleccionar aquellos de interés.

Reacciones Inmunoenzimáticas

En estas técnicas, uno de los componentes está marcado con una enzima. Al finalizar, se añade un sustrato cromogénico que reacciona con la enzima provocando un cambio de color. Son métodos de alta sensibilidad.

Técnica ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)

Se realiza en placas de microtitulación y presenta diversas variantes:

• ELISA en Sándwich (detección de antígenos): Se inmovilizan anticuerpos en la placa, se añade el suero con el antígeno (Ag) y, finalmente, se añaden anticuerpos marcados con la enzima.
• ELISA indirecto (detección de anticuerpos): Se inmoviliza el antígeno, se añade el suero con el supuesto anticuerpo y, posteriormente, se introduce un anti-anticuerpo marcado.
• ELISA de captura (detección de anticuerpos): Se inmoviliza un anti-anticuerpo, se añade el suero con el anticuerpo, luego el antígeno que se unirá a este y, finalmente, un anticuerpo marcado.

Es necesario frenar la reacción con HCl. La cuantificación se realiza midiendo las absorbancias a diferentes concentraciones de sustrato cromogénico, lo que permite determinar el título del suero.

DOT-ELISA y Western Blot

• DOT-ELISA: La enzima y el sustrato cromogénico generan un producto coloreado insoluble. Es una técnica cualitativa que se realiza sobre placas de nitrocelulosa y no requiere frenar la reacción.
• Western Blot (Inmunotransferencia): Procedimiento utilizado, por ejemplo, para la detección del VIH. Se realiza una electroforesis en gel de poliacrilamida donde se cargan los marcadores de peso molecular (PM) y la muestra. Posteriormente, se transfiere a una membrana de nitrocelulosa y se detecta el antígeno mediante el uso de anticuerpos específicos.