Pruebas bioquímicas para la caracterización microbiana: rojo de metilo, VP, TSI, MacConkey y más

Biología21 abr 2025Actualizado el 7 nov 20267 KB

Resumen

El documento describe las principales pruebas y medios bioquímicos usados para identificar y caracterizar bacterias en el laboratorio de microbiología. Se explican pruebas como rojo de metilo, Voges-Proskauer, TSI, SIM y LIA, así como medios selectivos y diferenciales como MacConkey, Hektoen, XLD y EMB. El estudiante aprenderá qué detecta cada prueba y cómo interpretar los cambios de color y los resultados.

Puntos clave

La prueba de rojo de metilo detecta la producción de ácidos fuertes a partir de glucosa, con viraje a rojo por debajo de pH 4.4.
La prueba de Voges-Proskauer detecta acetoína, que reacciona con alfa-naftol para dar un color rojo.
En el agar TSI, el viraje a amarillo indica fermentación y el ennegrecimiento indica producción de H₂S.
El agar MacConkey separa las bacterias fermentadoras de lactosa (colonias rosadas/rojas) de las no fermentadoras (colonias incoloras).
El agar EMB permite diferenciar fermentadores rápidos de lactosa, como E. coli, que forman colonias con brillo verde metálico.
La prueba SIM evalúa producción de H₂S, producción de indol y movilidad en un único medio semisólido.
El agar LIA demuestra la actividad de lisina descarboxilasa y lisina desaminasa, además de la producción de H₂S.

Ponte a prueba

Pruebas Bioquímicas para la Caracterización Microbiana

Prueba de Rojo de Metilo

Determina la capacidad de un microorganismo para producir y mantener estables los productos terminales ácidos de la fermentación de la glucosa y vencer la capacidad amortiguadora del sistema. La prueba de Rojo de Metilo es cuantitativa para la producción de ácido y requiere que los microorganismos produzcan ácidos fuertes a partir de glucosa, de forma que el pH del medio descienda a menos de 4.4. Esta distinción puede hacerse a través del indicador rojo de metilo, que presenta color amarillo por encima de un pH de 5.1 y solo presenta color rojo cuando el pH desciende a 4.4.

Prueba de Voges-Proskauer (VP)

Determina la capacidad de algunas bacterias de generar un producto final neutro (acetoína) a partir de la fermentación de la glucosa. Los productos neutros formados, en presencia de oxígeno atmosférico, álcalis y peptonas, se oxidan a diacetilo, reactante para el color producido en la reacción. El alfa-naftol actúa como catalizador para revelar un complejo color rojo.

Agar TSI (Triple Sugar Iron)

Es una prueba usada para observar la fermentación de la glucosa, lactosa y sacarosa, y la producción de H₂S por parte de la bacteria. El cambio del color rojo anaranjado inicial del medio a amarillo indica fermentación. Si se fermenta únicamente la glucosa, el cambio de color del medio ocurre solamente en el fondo (pico de flauta) debido a que se encuentra 10 veces menos concentrada que la sacarosa y la lactosa, y los productos ácidos no son suficientes para hacer virar todo el medio. La producción de gas (H₂ y CO₂) se evidencia por burbujas o ruptura del agar. La producción de ácido sulfhídrico (H₂S) a partir de tiosulfato se observa por un ennegrecimiento del medio debido a la formación de sulfuro ferroso.

Agar MacConkey

Agar selectivo y diferencial para el aislamiento de enterobacterias y otros bacilos Gram negativos. El medio contiene sales biliares y cristal violeta, que son inhibidores de la mayoría de la microbiota Gram positiva. La lactosa, junto con el indicador rojo neutro, sirven para la comprobación de la degradación de dicho azúcar, dividiendo el grupo en dos: bacterias fermentadoras de lactosa (colonias rosadas/rojas) y no fermentadoras de lactosa (colonias incoloras).

Agar Hektoen Enteric (HE)

Es un medio de cultivo selectivo y diferencial para la identificación y aislamiento de bacterias intestinales patógenas, especialmente Salmonella y Shigella. La alta concentración de sales biliares inhibe el desarrollo de la mayoría de las bacterias Gram positivas. La fuscina ácida reacciona con el azul de bromotimol; el medio vira a amarillo o salmón al bajar el pH por acción de los ácidos que se pueden producir a partir de la fermentación de los tres hidratos de carbono que contiene el medio (lactosa, sacarosa, salicina). La combinación de tiosulfato sódico y una sal de hierro (citrato férrico amónico) permite detectar la producción de H₂S, dando una coloración negra a las colonias H₂S positivas (típicamente Salmonella). Las no fermentadoras que no producen H₂S (como Shigella) crecen como colonias verdes o azul-verdosas.

Agar XLD (Xilosa Lisina Desoxicolato)

Medio selectivo y diferencial usado para el aislamiento y diferenciación de bacilos entéricos Gram negativos, especialmente patógenos como Shigella y Salmonella. La degradación ácida a partir de la xilosa, lactosa y sacarosa produce un viraje a amarillo del indicador rojo de fenol. El tiosulfato de sodio y la sal de hierro revelan la formación de ácido sulfhídrico (H₂S) por la precipitación del sulfuro de hierro (negro) en las colonias (típico de Salmonella). Las bacterias que descarboxilan la lisina (como Salmonella), después de agotar la xilosa, producen cadaverina; esto alcaliniza el medio y las colonias vuelven al color rojo (o rojo con centro negro si producen H₂S). Las que no fermentan los azúcares ni descarboxilan la lisina (como Shigella) aparecen como colonias rojas. El desoxicolato de sodio actúa como inhibidor de Gram positivos. El efecto inhibidor general de este medio es relativamente débil comparado con otros medios entéricos.

Agar EMB (Eosina Azul de Metileno)

Es un agar selectivo y diferencial para el aislamiento de bacilos Gram negativos entéricos. Los colorantes eosina Y y azul de metileno inhiben a las bacterias Gram positivas y a algunas Gram negativas nutricionalmente exigentes. También se combinan y precipitan a pH ácido, actuando como indicadores de la producción de ácidos a partir de los carbohidratos presentes en el medio (lactosa y sacarosa). Los fermentadores rápidos de lactosa (ej. E. coli) producen colonias con un característico brillo verde metálico. Los fermentadores más lentos producen colonias rosadas o púrpuras. Los no fermentadores producen colonias incoloras o transparentes.

Prueba SIM (Sulfuro, Indol, Movilidad)

Medio semisólido que permite determinar tres características bacterianas: producción de ácido sulfhídrico (H₂S), producción de indol y movilidad. La producción de H₂S se evidencia por un ennegrecimiento del medio. El indol es uno de los productos de la degradación metabólica del aminoácido triptófano. Las bacterias que poseen la enzima triptofanasa son capaces de hidrolizar y desaminar el triptófano con producción de indol, ácido pirúvico y amoníaco; el indol se detecta añadiendo reactivo de Kovacs o de Ehrlich (formación de anillo rojo). La movilidad se observa por el crecimiento difuso de la bacteria a partir de la línea de siembra por punción.

Agar LIA (Lisina Hierro)

Es un medio diferencial que sirve para demostrar la producción de dos enzimas relacionadas con el aminoácido lisina: la lisina descarboxilasa (LDC) y la lisina desaminasa (LDA), además de la producción de H₂S y gas. Se utiliza principalmente para diferenciar enterobacterias. La descarboxilación de la lisina (anaerobia, en el fondo del tubo) produce cadaverina, alcalinizando el medio (vira a púrpura). La desaminación de la lisina (aerobia, en la superficie inclinada) produce un ácido alfa-ceto, que con citrato férrico y el indicador (púrpura de bromocresol) da un color rojo vino. La fermentación de la pequeña cantidad de glucosa produce ácido (vira a amarillo), pero si hay LDC, la posterior alcalinización revierte el color a púrpura en el fondo. La presencia de sales de hierro sirve para detectar la producción de H₂S (ennegrecimiento).

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Preguntas frecuentes

¿Qué detecta la prueba de Voges-Proskauer?

Detecta la capacidad de algunas bacterias de producir acetoína a partir de la fermentación de la glucosa. Tras oxidarse a diacetilo, reacciona con alfa-naftol y produce un complejo de color rojo.

¿Qué significa un ennegrecimiento en el agar TSI?

Indica la producción de ácido sulfhídrico (H₂S) a partir de tiosulfato, que forma sulfuro ferroso de color negro.

¿Para qué sirve el agar MacConkey?

Es un medio selectivo y diferencial para aislar enterobacterias y otros bacilos Gram negativos, distinguiendo los fermentadores de lactosa por el color de sus colonias.