sajhfgskjhdfgaksjhgf

Espectro de absorción atómica: se trata de una técnica óptica de espectroscopia en las que existe un intercambio de energía entre la radiación electromagnética y la materia. Estos cambios son debidos a transiciones entre distintos niveles energéticos (de niveles fundamentales a niveles excitados).//Preparación de la muestra: los analitos se encuentran en la muestra de forma ionizada y debemos transformarlos en átomos. Para ello tenemos dos posibilidades en función de la naturaleza de la muestra.//Muestras gaseosas o liquidas se utiliza el sistema de llama. Tratándose de un sistema de medida continuo y siendo el mas utilizado. Lo primero que debemos hacer es aspirar la muestras por un capilar hasta llegar a una cámara de gran tamaño (cámara de mezclado) donde se formaran los aerosoles que se mezclaran con el combustible y el comburente (agente oxidante) en la cámara de mezclado. En el interior de la cámara estarán una serie de deflectores que reducen aun mas el tamaño de las partículas. Cuando sale toda esta mezcla se produce una chispa haciendo que todo pase a la llama.//Una vez que las partículas se encuentran en la llama se produce una desolvatacion, secado o evaporación rápida del líquido que contiene el analito, seguida de una volatilización (cambio de estado de liquido a estado gaseoso) y finalmente tendrá lugar la atomización donde se producirá la rotura de los enlaces del analito con otros átomos, transformándolos en átomos elementales, siendo esta la especie absorbente. Debemos de evitar la excitación excesiva o la ionización de esos átomos puesto que si sucede esto no absorberán. Temperatura controlada.//Muestras liquidas o solidas mediante atomización electrotérmica siendo un sistema de medida discreto. Se sitúa una alícuota de la muestra en un sistema de horno de grafito y se somete a un programa de cambio de temperatura como son la calcinación (destrucción de la matriz solida) y la atomización.//Fundamento: los átomos se encuentran en su estado fundamental (ni excitados ni ionizados) en una nube atómica donde son capaces de absorber radiación UV-V. Para ello se hace pasar a través de la nube atómica, una radiación de λ determinada correspondiente a una línea del espectro de absorción del átomo absorbente (identificación). Los átomos absorbentes presentes en la nube atómica pasan del estado electrónico fundamental a un estado excitado (salto de electrones externos del átomo a un nivel electrónico superior). Con todo esto a mayor absorción mayor concentración de los átomos en la nube atómica y por tanto mayor concentración del analito en la muestra original (cuantificación).//Componentes: fuente monocromática (contendrá el elemento a determinar), dispositivo atomizador (llama o electrotérmico), monocromador (selector λ), detector…//Aplicaciones: para metales pesados como los alcalinotérreos (Ca, Cu, Pb).//Espectro de absorción molecular: se trata de una técnica óptica de espectroscopia en las que existe un intercambio de energía entre la radiación electromagnética y la materia. Estos cambios son debidos a transiciones entre distintos niveles energéticos (de niveles fundamentales a niveles excitados).//Preparación muestra: se puede realizar de forma directa cuando el analito es una molécula que absorbe a una λ del espectro UV-V disponiendo una alícuota directamente de la muestra en la cubeta o bien mediante una reacción química donde el analito es una molécula que no absorbe a una λ del espectro UV-V, se hace reaccionar una alícuota de la muestra con reactivos específicos para obtener un producto que si absorba a una λ del espectro UV-V que luego ponemos en la cubeta.//Fundamento: las moléculas son capaces de absorber la radiación UV-V en una cubeta. Para ello se hace pasar a través de la cubera la radiación de λ correspondiente a una banda del espectro de absorción de la molécula absorbente (identificación). Las moléculas absorbentes presentes en la cubeta pasan del estado electrónico fundamental a un estado excitado (debido al salto de electrones de enlace a un nivel electrónico superior). A mayor absorbancia mayor concentración de la molécula absorbente y mayor cantidad de analito (cuantificación).//Componentes: fuente de energía, rendijas de entrada y salida, sistema selector de λ, cubeta, detector (monocromador) y dispositivo de lectura.//Aplicaciones: moléculas con dobles y/o triples enlaces, conjugados que proceden de analitos de interés bioquímico (glucosa, colesterol, triglicéridos…).//Espectro de emisión atómica: técnica basada en la espectroscopia de emisión. Este fenómeno se produce cuando los átomos son excitados y se relajan a niveles menos energéticos emitiendo energía en forma de fotones. Cada desplazamiento se corresponde con una determinada cantidad de energía o máximo de emisión que forma parte del espectro de emisión. Para cada elemento existe un numero de desplazamientos posibles, dependiendo de su configuración electrónica.//Preparación muestra: los analitos se encuentran en la muestra de forma ionizada y hay que transformarlos en átomos excitados.//Muestras gaseosas o liquidas. Mediante sistema de llama (igual que absorción atómica). Ultimo paso excitación donde los átomos presentes en la nube atómica pasan del estado electrónico fundamental a un estado excitado (salto de electrones externos del átomo a un nivel electrónico superior). Se debe evitar que se ionicen pues no emitirán.//Muestras liquidas o solidas mediante emisión de plasma. Es necesario una antorcha de gas inerte donde los electrones alcanzan altas temperaturas.//Fundamento: los átomos excitados (no ionizados) en una nube atómica son capaces de emitir radiación UV-V. Los átomos excitados se relajan y pasan del estado excitado al estado fundamental emitiendo la misma λ, perteneciente a su espectro de emisión (identificación). A mayor emisión, mayor concentración de átomos en la nube atómica y por tanto mayor concentración de analito en la muestra (cuantificación).//Componentes: atomizador-excitador (llama), sistema de selección de λ (monocromador), fotodetectores.//Aplicaciones: para detección de metales ligeros como los alcalinos (Li, Na, K).//Fluorescencia atómica: técnica basada en la espectroscopia de emisión tras absorción de radiación. Se produce cuando los átomos son excitados mediante una radiación electromagnética UV-V de una λ correspondiente a su espectro de absorción y se relajan a niveles menos energéticos emitiendo energía en forma de fotones de la misma λ (se corresponde a su espectro de emisión).//Preparación muestra: los analitos se encuentran en la muestra de forma ionizada y hay que transformarlos en átomos. Sistema de llama (igual que en absorción atómica). La excitación se realiza con la fuente que se encuentra de manera perpendicular al monocromador, es importante porque la luz que no se absorbe no se tiene en cuenta porque se libera y no se suma con la luz emitida que es la que medimos.//Fundamento: los átomos se encuentran en estado fundamental (ni excitados ni ionizados) en una nube atómica donde son capaces de absorber radiación UV-V y emitir a continuación la radiación de la misma λ.//Se hace pasar a través de la nube atómica la radiación de λ correspondiente a una línea del espectro de absorción del átomo absorbente. Los átomos presentes en la nube atómica pasan del estado electrónico fundamental a un estado excitado (salto de electrones externos del átomo a un nivel electrónico superior. Los átomos excitados se relajan y pasan del estado excitado al fundamental emitiendo la misma λ, perteneciente a su espectro de emisión (identificar). A mayor emisión mayor concentración de los átomos en la nube atómica y por lo tanto mayor concentración del analito en la muestra original (cuantificación).//Componentes:  fuente policromática, sistema de selección de λ (monocromador), cubeta con muestra, monocromador y detector. Tanto la fuente como el primer monocromador se disponen perpendiculares a la cubeta.//Aplicaciones: para la medición de Zn, Hg, Se…//Fluorescencia molecular: técnica basada en la espectroscopia de emisión tras absorción de radiación. Se produce cuando las moléculas son excitadas mediante una radiación electromagnética V-UV, a una λ correspondiente a su espectro de absorción y se relajan a niveles menos energéticos emitiendo energía en forma de fotones de mayor λ (energía menor). El espectro de emisión será en banda, espectro continuo.//Preparación muestra: los analitos mas comunes no suelen ser fluorescentes ni fosforescentes por lo que se pueden hacer dos preparaciones mediante reacción química: derivatizacion (se hacer reaccionar una alícuota de la muestra con reactivos específicos para obtener un producto que si emita radiación de fluorescencia. A continuación, lo disponemos en la cubeta), o bien por fluoroinmunoanalisis (se hace reaccionar el analito (proteína) con un anticuerpo marcado con un ligando fluorescente (fluoresceína), a continuación, se mide mediante algún tipo de inmunoensayo).//Las moléculas fluorescentes tienen estructuras planas, con rigidez. Los posible saltos don de pi a pi excitado y de n a pi excitado. También tiene que ser moléculas con dobles y/o triple enlaces, conjugados.//Fundamento: moléculas capaces de absorber radiación UV-V excitarse a un estado electrónico superior y a continuación relajarse y emitir radiación de λ igual o inferior a la absorbida en una cubeta. Se hace pasar a través de la cubeta una radiación de λ correspondiente a una banda del espectro de absorción de la molécula absorbente (identificación). Las moléculas absorbentes presentes en la cubeta pasan del estado electrónico fundamental a un estado excitado. Las moléculas excitadas se relajan y pasan del estado excitado al fundamental emitiendo una λ igual o inferior a la absorbida y perteneciente a su espectro de emisión. A mayor emisión mayor concentración de la molécula y por tanto mayor cantidad de analito (cuantificación).//Componentes: fuente de energía, selector λ (monocromador), cubeta con muestra, monocromador y detector.//Aplicaciones: moléculas con dobles y/o triple enlaces, conjugados y de estructura rígida que proceden de analitos de interés bioquímico. Proteínas determinadas por fluoroinmunoanalisis.

Fundamento absorción atómica: los átomos se encuentran en su estado fundamental (ni excitados ni ionizados) en una nube atómica donde son capaces de absorber radiación UV-V. Para ello se hace pasar a través de la nube atómica, una radiación de λ determinada correspondiente a una línea del espectro de absorción del átomo absorbente (identificación). Los átomos absorbentes presentes en la nube atómica pasan del estado electrónico fundamental a un estado excitado (salto de electrones externos del átomo a un nivel electrónico superior). Con todo esto a mayor absorción mayor concentración de los átomos en la nube atómica y por tanto mayor concentración del analito en la muestra original (cuantificación).//Fundamento fluorimetría molecular: moléculas capaces de absorber radiación UV-V excitarse a un estado electrónico superior y a continuación relajarse y emitir radiación de λ igual o inferior a la absorbida en una cubeta. Se hace pasar a través de la cubeta una radiación de λ correspondiente a una banda del espectro de absorción de la molécula absorbente (identificación). Las moléculas absorbentes presentes en la cubeta pasan del estado electrónico fundamental a un estado excitado. Las moléculas excitadas se relajan y pasan del estado excitado al fundamental emitiendo una λ igual o inferior a la absorbida y perteneciente a su espectro de emisión. A mayor emisión mayor concentración de la molécula y por tanto mayor cantidad de analito (cuantificación).//Fundamento nefelometría: se hace pasar a través de la cubeta una radiación de λ de acuerdo al tamaño de la partícula y se utilizara una reacción especifica que transforme el analito en partículas (identificación). La partícula absorbe una parte, otra parte la refleja, otra pasa a través de la cubeta y la transmite. Se mide la luz dispersada en ángulo de 90º o 15º. A mayor dispersión mayor concentración de partículas y por lo tanto mayor cantidad de moléculas en la muestra (cuantificación).//Preparación muestra espectroscopia emisión atómica llama: los analitos se encuentran en la muestra de forma ionizada y hay que transformarlos en átomos excitados.Muestras gaseosas o liquidas. Mediante sistema de llama (igual que absorción atómica). Ultimo paso excitación donde los átomos presentes en la nube atómica pasan del estado electrónico fundamental a un estado excitado (salto de electrones externos del átomo a un nivel electrónico superior). Se debe evitar que se ionicen pues no emitirán.//Preparación muestra fluorimetría molecular: los analitos más comunes no suelen ser fluorescentes ni fosforescentes por lo que se pueden hacer dos preparaciones mediante reacción química: derivatizacion (se hacer reaccionar una alícuota de la muestra con reactivos específicos para obtener un producto que si emita radiación de fluorescencia. A continuación, lo disponemos en la cubeta), o bien por fluoroinmunoanalisis (se hace reaccionar el analito (proteína) con un anticuerpo marcado con un ligando fluorescente (fluoresceína), a continuación, se mide mediante algún tipo de inmunoensayo).Las moléculas fluorescentes tienen estructuras planas, con rigidez. Los posible saltos don de pi a pi excitado y de n a pi excitado. También tiene que ser moléculas con dobles y/o triple enlaces, conjugados.//Preparación muestra reflectometría: los reactivos de química seca constituyen la manera de introducir la muestra en los fotómetros de reflexión. La muestra se distribuye en la capa difusora y comienza a atravesar la capa reactiva. El analito reacciona con los reactivos específicos de la capa reactiva, generando un producto que absorbe la radiación UV-V. El producto continua hasta la capa indicadora del slide. (formado por capa difusora, capa reacción, capa indicadora y soporte).//Secuencia componentes fluorimetría molecular: fuente de luz, sistemas ópticos (lentes, espejos y filtros), reactivos de fase solida (slide), detector de luz reflejada. //Secuencia componentes nefelometría: fuente de energía radiante, selector de λ (monocromador), cubeta, selector λ detección y sistema de detección (0º turbidimetría, 90-15º en nefelometría).//Secuencia componentes bioluminiscencia: cubeta y detector (luminómetro).//Preparación muestra inmunoturbidimetria: los requerimientos en lo que a la suspensión se refiere son comunes para ambas técnicas. Lo principal es que la suspensión sea estable y homogénea durante el intervalo de tiempo requerido para la medida. La formación de las partículas las podemos realizar mediante reacción química de precipitación donde se precipita el analito con un agente precipitante y se obtienen partículas en suspensión que a continuación se disponen en la cubeta. También se pueden conseguir mediante inmunonefelometria o inmunoturbidimetria donde se hace reaccionar el analito con su Ac obteniendo una partícula en forma de complejo Ag-Ac y que a continuación ponemos en la cubeta.//Preparación muestra luminoinmunoanalisis: directamente podemos hacer reaccionar la molécula a medir o el analito de forma que produzca ATP o NADH. El ATP o NADH cuya concentración es directamente proporcional al analito, se emplea en una segunda reacción acoplada de reacción de oxidación-reducción (exotérmica) con un reactivo bioluminiscente (luciferina en presencia del enzima luciferasa). EL ATP es una coenzima de la luciferasa por lo que influirá en la reacción. La reacción desprende energía y el producto queda excitado. Los electrones bajaran a su nivel fundamental emitiendo luz cuya intensidad será directamente proporcional a la cantidad de producto formado y esto a su vez proporcional a la concentración de analito. También se puede realizar por inmunobioluminiscencia donde se utilizan reacciones Ag-Ac con anticuerpos marcados con reactivos bioluminiscentes (luminol, peroxidasa).//Preparación y fundamento quimioluminiscencia: Fundamento: el producto de la rección de oxidación de la reacción quimioluminiscente esta excitado. Los electrones de enlace se encuentran en un nivel electrónico superior y se sitúan en la cubeta de reacción. Los productos excitados se relajan y pasan del estado excitado al estado fundamental emitiendo una λ. Al seleccionar una reacción inicial que sea específica del analito a determinar, con una enzima especifica por ejemplo (identificación). A mayor emisión mayor concentración de producto y mayor concentración de analito en la muestra original (cuantificación).Preparación muestra: se utiliza una reacción en la que intervenga el analito y se produzca O2 o H2O2, este O2 o H2O2 de la primera reacción cuya concentración es directamente proporcional al analito, se emplea en una segunda reacción acoplada, una reacción de oxidación-reducción (exotérmica) con un reactivo quimioluminiscente como el luminol. La reacción desprende energía y el producto queda excitado. También se puede realizar por medio de la inmunoquimioluminiscencia donde se utilizan reacciones Ag-Ac marcados con reactivos quimioluminiscentes. Se trata de una segunda reacción de oxidación-reducción en la que el producto formado ya está excitado. El H2O2 cuya concentración es directamente proporcional al analito, se emplea en una segunda reacción acoplada en la que interviene el luminol.

Quimioluminiscencia: técnica basada en la emisión con excitación mediante reacción química. Se origina cuando se produce una especie excitada como consecuencia de una reacción química que emite radiación electromagnética en la zona UV. No se necesita excitación luminosa. Su fundamento es químico. Usualmente se emplean reacciones redox que involucran el O2 o H2O2 y un sustrato orgánico oxidable como el luminol. La energía se libera por estas radiaciones exotérmicas y se emite en forma de luz en lugar de calor.//Preparación muestra: se utiliza una reacción en la que intervenga el analito y se produzca O2 o H2O2, este O2 o H2O2 de la primera reacción cuya concentración es directamente proporcional al analito, se emplea en una segunda reacción acoplada, una reacción de oxidación-reducción (exotérmica) con un reactivo quimioluminiscente como el luminol. La reacción desprende energía y el producto queda excitado. También se puede realizar por medio de la inmunoquimioluminiscencia donde se utilizan reacciones Ag-Ac marcados con reactivos quimioluminiscentes. Se trata de una segunda reacción de oxidación-reducción en la que el producto formado ya está excitado. El H2O2 cuya concentración es directamente proporcional al analito, se emplea en una segunda reacción acoplada en la que interviene el luminol.//Fundamento: el producto de la rección de oxidación de la reacción quimioluminiscente esta excitado. Los electrones de enlace se encuentran en un nivel electrónico superior y se sitúan en la cubeta de reacción. Los productos excitados se relajan y pasan del estado excitado al estado fundamental emitiendo una λ. Al seleccionar una reacción inicial que sea específica del analito a determinar, con una enzima especifica por ejemplo (identificación). A mayor emisión mayor concentración de producto y mayor concentración de analito en la muestra original (cuantificación).//Componentes: cubeta y detector (luminometro).//Aplicaciones: bioquímica básica y proteómica.//Bioluminiscencia: técnica basada en la emisión con excitación mediante reacción química. Es una forma particular que se observa en organismos vivos, en las que una enzima aumenta la eficacia de la reacción quimioluminiscente. Para ello se utilizan sustratos como la luciferina. La enzima implicada es la luciferasa.//Preparación de la muestra: directamente podemos hacer reaccionar la molécula a medir o el analito de forma que produzca ATP o NADH. El ATP o NADH cuya concentración es directamente proporcional al analito, se emplea en una segunda reacción acoplada de reacción de oxidación-reducción (exotérmica) con un reactivo bioluminiscente (luciferina en presencia del enzima luciferasa). EL ATP es una coenzima de la luciferasa por lo que influirá en la reacción. La reacción desprende energía y el producto queda excitado. Los electrones bajaran a su nivel fundamental emitiendo luz cuya intensidad será directamente proporcional a la cantidad de producto formado y esto a su vez proporcional a la concentración de analito. También se puede realizar por inmunobioluminiscencia donde se utilizan reacciones Ag-Ac con anticuerpos marcados con reactivos bioluminiscentes (luminol, peroxidasa).//Fundamento: el producto de la rección de oxidación de la reacción bioluminiscente esta excitado. Los electrones de enlace se encuentran en un nivel electrónico superior y se sitúan en la cubeta de reacción. Los productos excitados se relajan y pasan del estado excitado al estado fundamental emitiendo una λ. Al seleccionar una reacción inicial que sea específica del analito a determinar, con una enzima especifica por ejemplo (identificación). A mayor emisión mayor concentración de producto y mayor concentración de analito en la muestra original (cuantificación).//Componentes: cubeta y detector (luminómetro).//Aplicaciones: bioquímica básica y proteómica.//Turbidimetría: es la medida de la disminución de la intensidad de un haz de luz incidente causada por dispersión, reflexión y absorción de la luz cuando pasa a través de una suspensión de partículas. Suele emplearse para concentraciones altas de la sustancia a medir.//Preparación muestra: los requerimientos en lo que a la suspensión se refiere son comunes para ambas técnicas. Lo principal es que la suspensión sea estable y homogénea durante el intervalo de tiempo requerido para la medida. La formación de las partículas las podemos realizar mediante reacción química de precipitación donde se precipita el analito con un agente precipitante y se obtienen partículas en suspensión que a continuación se disponen en la cubeta. También se pueden conseguir mediante inmunonefelometria o inmunoturbidimetria donde se hace reaccionar el analito con su Ac obteniendo una partícula en forma de complejo Ag-Ac y que a continuación ponemos en la cubeta.//Fundamento: se hace pasar a través de la cubeta una radiación de λ de acuerdo al tamaño de la partícula y se utilizara una reacción especifica que transforme el analito en partículas (identificación). La partícula absorbe una parte de la radiación, otra parte la refleja, otra parte se dispersa en todas las direcciones y otra parte pasa a través de la cubeta y se transmite. Se mide la luz transmitida en ángulo de 0º. A mayor transmitancia menor dispersión, menor concentración de partículas y por lo tanto menos cantidad de moléculas en la muestra (cuantificación).//Componentes: fuente de energía radiante, selector de λ (monocromador), cubeta, selector λ detección y sistema de detección (0º turbidimetría, 90-15º en nefelometría).//Aplicaciones: proteómica (proteínas de interés clínico, inmunoturbidimetria)//Nefelometría: es la medida de la luz dispersada en ángulos distintos al de incidencia (normalmente 15 o 90º). La medida se realiza en aparatos diseñados con el sistema de detección situada a ángulos predeterminados. La nefelometría a diferencia de la turbidimetría precisa de aparatos diseñados exclusivamente para esta técnica. Suele emplearse para concentraciones bajas de la sustancia a medir, que dan lugar a poca turbidez.//Preparación muestra: los requerimientos en lo que a la suspensión se refiere son comunes para ambas técnicas. Lo principal es que la suspensión sea estable y homogénea durante el intervalo de tiempo requerido para la medida. La formación de las partículas las podemos realizar mediante reacción química de precipitación donde se precipita el analito con un agente precipitante y se obtienen partículas en suspensión que a continuación se disponen en la cubeta. También se pueden conseguir mediante inmunonefelometria o inmunoturbidimetria donde se hace reaccionar el analito con su Ac obteniendo una partícula en forma de complejo Ag-Ac y que a continuación ponemos en la cubeta.//Fundamento: se hace pasar a través de la cubeta una radiación de λ de acuerdo al tamaño de la partícula y se utilizara una reacción especifica que transforme el analito en partículas (identificación). La partícula absorbe una parte, otra parte la refleja, otra pasa a través de la cubeta y la transmite. Se mide la luz dispersada en ángulo de 90º o 15º. A mayor dispersión mayor concentración de partículas y por lo tanto mayor cantidad de moléculas en la muestra (cuantificación).//Componentes: fuente de energía radiante, selector de λ (monocromador), cubeta, selector λ detección y sistema de detección (0º turbidimetría, 90-15º en nefelometría).//Aplicaciones: proteómica (proteínas de interés clínico, inmunonefelometria).//Reflectometría: técnica basada en la reflexión difusa. Cuando un haz de luz incide sobre una superficie, la luz es reflejada por esta superficie producíéndose a la vez dos tipos de reflexión. Por un lado, tenemos la reflexión especular en donde la luz es reflejada como lo haría en un espejo. Y por otro lado una reflexión difusa (reflectancia) que consiste en la reflexión producida al penetrar la luz en las capas internas de la superficie iluminada. Dentro de la fase solida la luz sufre una serie de fenómenos de absorción y dispersión. //Preparación muestra: los reactivos de química seca constituyen la manera de introducir la muestra en los fotómetros de reflexión. La muestra se distribuye en la capa difusora y comienza a atravesar la capa reactiva. El analito reacciona con los reactivos específicos de la capa reactiva, generando un producto que absorbe la radiación UV-V. El producto continua hasta la capa indicadora del slide. (formado por capa difusora, capa reacción, capa indicadora y soporte).//Fundamento: el producto que absorbe la radiación UV-V se hace incidir sobre el slide hasta la capa indicadora mediante una radiación λ correspondiente a una banda del espectro de absorción producto de la reacción química seca (identificación). Las moléculas absorbentes en la cubeta pasan del estado electrónico fundamental a un estado excitado. A mayor absorción mayor concentración de la molécula absorbente y por tanto mayor cantidad de analito (cuantificación).//Componentes: fuente de luz, sistemas ópticos (lentes, espejos y filtros), reactivos de fase solida (slide), detector de luz reflejada. //Aplicaciones: bioquímica básica en urgencias. Proteómica.