Técnicas de identificación de especies y modificación de metabolitos

Técnicas para distinguir dos especies que en electroforesis sale igual la banda

Para distinguir dos especies en las que la banda electroforética se obtiene igual, se podrían realizar técnicas para la identificación de proteínas, ya que al tratarse de animales distintos, presentarán distintas proteínas en sus genes. Estos métodos son:

• ELISA: se fundamenta en el uso de anticuerpos específicos de la proteína que se quiere detectar;
• LFS: tiras impregnadas en con anticuerpos específicos que reconocen determinadas proteínas a analizar;
• Western Blot: las proteínas desnaturalizadas se corren en un gel y se transfiere a una membrana de nitrocelulosa donde se revela mediante la reacción con un anticuerpo primario específico y uno secundario.

Por otra parte, también podría usarse la técnica Northern blot, que también nos sirve para distinguir diferentes regulaciones de RNA que se corresponden con distintas especies. Además se podría llevar a cabo un Southern blot, donde el DNA es digerido con una enzima de restricción y los fragmentos se separan por electroforesis, obteniendo distintas bandas para distintas especies. Finalmente, la última técnica sería una secuenciación masiva de todas las muestras para determinar mediante una base de datos qué especie pertenece a cada banda de electroforesis.

Métodos para la modificación de producción de metabolitos

Los métodos para la modificación de la producción de metabolitos se basarían en la mejora de cepas. Estos métodos son:

• Mutación espontánea
• Mutación inducida: mediante tratamientos con agentes físicos (radiaciones ionizantes, no ionizantes, choque térmico)
• Mutaciones dirigidas por interrupción con un gen de selección: se clonan genes que tengan el cromosoma que queremos clonar y transformamos la bacteria
• Mutagénesis por PCR: se tiene que intentar quitar un trozo de gen. Se diseñan primers que anillen o amplifiquen zonas laterales. Se realiza una amplificación por PCR de los laterales. Posteriormente se realiza una desnaturalización y renaturalización teniendo fragmentos complementarios donde se anillan.