Técnicas de inmunodifusión e inmunoelectroforesis en inmunología: Mancini, Ouchterlony, Laurell e inmunofijación

Técnicas de inmunodifusión e inmunoelectroforesis

A) Mancini (inmunodifusión radial simple), CUANTITATIVA

• El anticuerpo (Ac) está repartido por todo el gel. El antígeno (Ag), es decir, la muestra, se coloca en un pocillo y se extiende en círculo.
• Donde se encuentran se forma un anillo (halo). Más Ag = anillo más grande.
• Para conocer la cantidad se compara el diámetro con una curva de calibración elaborada con muestras patrón (de concentración conocida).
• Solo se mueve el Ag. No se aplica corriente.
• Analogía: una gota de tinta en papel secante. Cuanta más tinta, más grande la mancha.

B) Ouchterlony (inmunodifusión radial doble), CUALITATIVA

• El Ag y el Ac se colocan en pocillos distintos y ambos se difunden hasta encontrarse y formar una línea de precipitación.
• Sensibilidad baja (necesita grandes cantidades de Ag y Ac).
• Sirve para detectar Ag o Ac en muestras, comparar distintos antígenos frente a un mismo anticuerpo y estudiar relaciones antigénicas entre muestras.
• En los esquemas de clase: a y b son antígenos y A y B anticuerpos.
  • I = identidad (a y a: un arco continuo).
  • II = no identidad (a y b: líneas cruzadas).
  • III = identidad parcial (ab y b: arco con espolón).
  Se lee a las 24 horas.

C) Inmunoelectroforesis, CUALITATIVA

• Combina la electroforesis (separación de moléculas mediante corriente eléctrica según su carga y tamaño) con la inmunodifusión.
• Pasos:
  1. Se coloca la muestra en el gel.
  2. Se aplica una corriente eléctrica que separa los componentes.
  3. Se añade el antisuero en una canaleta paralela.
  4. El Ag y el Ac se difunden.
  5. Donde se encuentran aparecen arcos de precipitación.
• Cada antígeno forma su propio arco. Positivo = uno o varios arcos; negativo = ningún arco (no está presente el antígeno buscado o su concentración es insuficiente).
• Usos: estudio de proteínas del suero, alteraciones de inmunoglobulinas y algunas gammapatías monoclonales (enfermedades en las que se produce en exceso un único tipo de inmunoglobulina).

D) Inmunoelectroforesis de contracorriente, CUALITATIVA

• El Ag y el Ac se colocan en pocillos enfrentados y la corriente eléctrica los hace avanzar uno hacia el otro en sentidos opuestos. Donde se encuentran aparece una banda.
• Es un Ouchterlony “con motor”: más rápida y más sensible (detecta cantidades menores).
• Positivo = línea entre los pocillos.

E) Electroinmunodifusión o Laurell, CUANTITATIVA

• El Ac se encuentra en el gel (como en Mancini) y el Ag se coloca en el pocillo, pero en este caso la corriente eléctrica lo impulsa.
• Se forma un precipitado con forma de cohete (rocket). Cuanto más alto es el cohete, mayor es la cantidad de antígeno. Se compara con una curva de calibración.
• Lectura cualitativa: si aparece el cohete, el antígeno está presente. Lectura cuantitativa: la altura del cohete frente a la curva de calibración (elaborada con muestras patrón) indica la concentración.
• Ventajas: rápida, sensible y económica. Limitación: requiere campo eléctrico.
• Usos: cuantificación de proteínas e inmunoglobulinas.

F) Inmunofijación, CUALITATIVA

• Pasos:
  1. La electroforesis separa las proteínas.
  2. Sobre cada carril se aplican antisueros específicos para cada inmunoglobulina; el complejo precipita y queda fijado en el gel.
  3. Lavado (para eliminar lo que no precipitó) y tinción.
• Positivo = banda definida e intensa en su carril; negativo = ausencia de bandas.
• Uso destacado: detección de paraproteínas monoclonales (inmunoglobulina anormal de un único clon) en el mieloma múltiple, la macroglobulinemia de Waldenström y otras gammapatías monoclonales. Presenta alta sensibilidad y especificidad, y permite identificar qué clase de inmunoglobulina está implicada.

G) Fijación del complemento (se lee AL REVÉS)

Detecta anticuerpos de forma indirecta: no los visualiza directamente, sino que comprueba si el complemento se ha consumido. (El complemento es un conjunto de proteínas de la sangre que lisan células.)

1. Se inactiva (mediante calor) el complemento propio del suero.
2. Se mezcla: suero del paciente + antígeno + una cantidad conocida de complemento.
3. Si existen anticuerpos, forman inmunocomplejos que consumen (fijan) el complemento.
4. Se añaden glóbulos rojos sensibilizados con hemolisina (el “indicador”).
5. Se observa si el complemento sobrante lisa los glóbulos rojos (hemólisis).