Técnicas de Preparación en Fresco para Microscopía Microbiológica
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EXAMEN EN FRESCO
Las preparaciones deben obtenerse de material fresco o de cultivos recientes y realizados en medios adecuados pueden utilizarse directamente, si el material es demasiado espeso puede diluirse con solución salina estéril. (Condensador bajo y
diafragma casi cerrado).
Técnica entre porta y cubreobjetos o preparaciones húmedas:
Se coloca una gota del líquido que contiene los microorganismos sobre un portaobjetos limpio y seco, sobre el que se coloca un se deposita primero una gota de agua estéril o solución salina estéril sobre el
portaobjetos, para posteriormente con ayuda del asa previamente flameada y enfriada realizar una suspensión del producto a estudio. El borde entre porta y cubre se puede sellar con parafina o una sustancia similar paradisminuir la evaporación.
El tamaño de la gota debe tener relación con el del cubreobjetos para evitar que traspase los bordes del mismo.
La observación se hace con el objetivo de 10X y luego de 40X con el condensador bajo.
Técnica de la gota pendiente
Se utilizan unos portaobjetos especiales con una o varias excavaciones. Se coloca una gota de la suspensión en el centro de un cubreobjetos con un asa previamente esterilizada, a continuación se coloca el portaobjetos excavado sobre el cubreobjetos de
forma que la gota de suspensión coincida con el centro de la excavación. Después sedará la vuelta rápidamente al portaobjetos, manteniendo el cubreobjetos en su posición. El borde entre porta y cubre puede sellarse con parafina. El tamaño de la gota debe ser el adecuado para evitar una rápida evaporación, y para no contactar con el porta.
Coloración vital
Se pueden considerar como preparaciones en fresco o como técnicas intermedias entre estas y las preparaciones fijadas y coloreadas. Son montajes de materia viva teñidos. Se utilizan determinados colorantes como el azul de metileno, rojo neutro... A muy bajas concentraciones ( 1/1000, 1/10000 ). Su objetivo es facilitar la observación pero sin provocar alteraciones celulares, ni destruir bacterias. (Actualmente se utiliza poco en Microbiología).
TÉCNICA.- Basta con colocar sobre el porta una gota de muestra y al lado otra de colorante, se mezclan con el asa y se coloca enzima el cubre, evitando la formación deburbujas. Se observa al microscopio con objetivo de inmersión.