Técnicas de examen en fresco y coloración vital en microbiología

Resumen

El documento describe las principales técnicas de preparación en fresco para la observación de microorganismos al microscopio: la técnica entre porta y cubreobjetos, la técnica de la gota pendiente y la coloración vital. Explica cómo preparar cada montaje, cómo sellar los bordes y qué aumentos utilizar. Sirve para entender cómo observar material vivo sin fijarlo.

Puntos clave

Las preparaciones en fresco se obtienen de material fresco o de cultivos recientes; si el material es muy espeso, se diluye con solución salina estéril.
En la técnica entre porta y cubre se coloca una gota de agua o solución salina estéril y luego una suspensión del producto a estudiar, con el asa previamente flameada y enfriada.
El tamaño de la gota debe guardar relación con el cubreobjetos para que no traspase sus bordes; el borde puede sellarse con parafina para disminuir la evaporación.
En la técnica de la gota pendiente se usa un portaobjetos excavado: la gota se coloca en el centro del cubreobjetos y se invierte el portaobjetos.
La coloración vital usa colorantes como el azul de metileno o el rojo neutro a concentraciones muy bajas (1/1000 o 1/10000) para facilitar la observación sin alterar las células ni destruir las bacterias.
La observación se realiza primero con objetivo de 10X y después de 40X con el condensador bajo; la coloración vital se observa con objetivo de inmersión.

Ponte a prueba

EXAMEN EN FRESCO

Las preparaciones deben obtenerse de material fresco o de cultivos recientes y realizados en medios adecuados pueden utilizarse directamente, si el material es demasiado espeso puede diluirse con solución salina estéril. (Condensador bajo y

diafragma casi cerrado).

Técnica entre porta y cubreobjetos o preparaciones húmedas:

Se coloca una gota del líquido que contiene los microorganismos sobre un portaobjetos limpio y seco, sobre el que se coloca un se deposita primero una gota de agua estéril o solución salina estéril sobre el

portaobjetos, para posteriormente con ayuda del asa previamente flameada y enfriada realizar una suspensión del producto a estudio. El borde entre porta y cubre se puede sellar con parafina o una sustancia similar paradisminuir la evaporación.

El tamaño de la gota debe tener relación con el del cubreobjetos para evitar que traspase los bordes del mismo.

La observación se hace con el objetivo de 10X y luego de 40X con el condensador bajo.

Técnica de la gota pendiente

Se utilizan unos portaobjetos especiales con una o varias excavaciones. Se coloca una gota de la suspensión en el centro de un cubreobjetos con un asa previamente esterilizada, a continuación se coloca el portaobjetos excavado sobre el cubreobjetos de

forma que la gota de suspensión coincida con el centro de la excavación. Después sedará la vuelta rápidamente al portaobjetos, manteniendo el cubreobjetos en su posición. El borde entre porta y cubre puede sellarse con parafina. El tamaño de la gota debe ser el adecuado para evitar una rápida evaporación, y para no contactar con el porta.

Coloración vital

Se pueden considerar como preparaciones en fresco o como técnicas intermedias entre estas y las preparaciones fijadas y coloreadas. Son montajes de materia viva teñidos. Se utilizan determinados colorantes como el azul de metileno, rojo neutro... A muy bajas concentraciones ( 1/1000, 1/10000 ). Su objetivo es facilitar la observación pero sin provocar alteraciones celulares, ni destruir bacterias. (Actualmente se utiliza poco en Microbiología).

TÉCNICA.- Basta con colocar sobre el porta una gota de muestra y al lado otra de colorante, se mezclan con el asa y se coloca enzima el cubre, evitando la formación deburbujas. Se observa al microscopio con objetivo de inmersión.

Preguntas frecuentes

¿Qué es la técnica de la gota pendiente?

Es una técnica en fresco en la que se coloca una gota de la suspensión en el centro de un cubreobjetos y se invierte sobre un portaobjetos excavado, de modo que la gota quede suspendida en la excavación. El tamaño de la gota debe ser el adecuado para evitar una rápida evaporación y para no tocar el portaobjetos.

¿Para qué sirve la coloración vital?

Sirve para facilitar la observación de material vivo mediante colorantes diluidos, sin provocar alteraciones celulares ni destruir bacterias. El texto indica que actualmente se utiliza poco en Microbiología.

¿Cómo se evita la evaporación en una preparación húmeda?

El borde entre el portaobjetos y el cubreobjetos se puede sellar con parafina o una sustancia similar. Además, el tamaño de la gota debe ser adecuado al cubreobjetos.