Tinciones diferenciales en microbiología: Gram, Ziehl-Neelsen y medios de cultivo

Gram

Gram es una tinción diferencial ampliamente utilizada en microbiología. Proporciona información sobre la morfología, tamaño y agrupamiento de las bacterias. Divide a las bacterias en dos grupos según el color con el que se tiñen: grampositivas y gramnegativas. Esta diferencia en la respuesta a la tinción pone de manifiesto la diferencia en la composición y estructura de las paredes bacterianas.

Fundamento

1 Tinción con un colorante catiónico que se une a la pared bacteriana y un mordiente con yodo que forma un complejo soluble. 2 Decoloración con una mezcla de alcohol/acetona en proporción 1:1, que disuelve la membrana externa y extrae rápidamente el colorante. 3 Coloración de contraste con un colorante rojo.

Procedimiento

1 Cubrir la extensión con solución de cristal violeta y incubar durante 1 minuto a temperatura ambiente. 2 Lavar brevemente con agua destilada y escurrir el porta. El lavado debe ser breve para evitar la decoloración excesiva de las bacterias. 3 Cubrir el porta con lugol e incubar. 4 Lavar con agua destilada. 5 Cubrir el porta con una mezcla de alcohol/acetona en proporción 1:1 durante 30 segundos. 6 Lavar con agua destilada y escurrir el porta. 7 Cubrir el porta con una solución de safranina e incubar durante 2 minutos a temperatura ambiente. 8 Lavar abundantemente con agua destilada y dejar secar a temperatura ambiente. 9 Visualizar al microscopio.

Ziehl-Neelsen

Ziehl-Neelsen es una tinción diferencial que permite distinguir un grupo especial de bacterias llamadas BAAR (bacilos ácido-alcohol resistentes). Estas bacterias tienen gran importancia, ya que incluyen las micobacterias que no se tiñen con otras tinciones. Esta tinción es comúnmente utilizada en la baciloscopia para diagnosticar tuberculosis pulmonar.

Fundamento

1 Tinción en caliente con fucsina fenicada, un colorante básico. Las BAAR tienen en su pared ácidos micólicos y ceras que impiden el paso del colorante, por lo que todas las bacterias se tiñen de rojo. 2 Decoloración en frío con una mezcla ácido-alcohol, que solidifica los ácidos micólicos y las ceras de la pared de las BAAR, atrapando el colorante. 3 Coloración de contraste con azul de metileno en las BAAR.

Procedimiento

1 Cubrir el porta con fucsina fenicada y calentar gradualmente con un mechero hasta que el colorante emita vapores sin llegar a hervir. 2 Dejar que se enfríe y repetir el calentamiento 2-3 veces. 3 Lavar con agua destilada arrastrando el papel. 4 Decolorar con alcohol-clorhídrico durante 2 minutos a temperatura ambiente. 5 Lavar con agua destilada y escurrir. 6 Cubrir el porta con una solución de azul de metileno e incubar. 7 Lavar con agua destilada. 8 Visualizar al microscopio.

Tipos de medio de cultivo

Existen diferentes tipos de medios de cultivo utilizados en microbiología, clasificados según su estado físico, composición y uso.

Tipos de medio de cultivo según su estado físico

• Medios sólidos: contienen un agente solidificante en proporción de 12-15g/l.
• Medios semisólidos: contienen un agente solidificante en proporción de 2-4g/l.
• Medios líquidos: no contienen ningún agente solidificante.

Tipos de medio de cultivo según su composición

• Medios químicamente definidos: se conoce exactamente su composición y la concentración de cada nutriente.
• Medios complejos o indefinidos: no se conoce exactamente la composición ni la concentración de los nutrientes.

Tipos de medio de cultivo según su uso

• Medios comunes: contienen los nutrientes necesarios para el crecimiento de bacterias sin requerimientos especiales.
• Medios enriquecidos: son medios comunes suplementados con sustancias nutritivas para el crecimiento de bacterias exigentes.
• Medios selectivos: incluyen sustancias que inhiben el crecimiento de un tipo de microorganismo, favoreciendo el crecimiento de otros.
• Medios diferenciales: incluyen sustancias que permiten diferenciar bacterias. Se utilizan en procesos de identificación bacteriana.
• Medios de enriquecimiento: son medios líquidos que favorecen el crecimiento de una especie determinada.
• Medios de transporte y mantenimiento: se emplean en la recogida, transporte y conservación de muestras biológicas. Estos medios inhiben las reacciones enzimáticas autodestructivas.