Que son las tiras de ipg

REACTIVOS Muestra de suero (atemperada) Solución deshidratante: Metanol Solución tampón (Veronal sódico 0.04M, dietilbarbiturato sódico 8,24 g/l) pH 8,6 Solución colorante negro amido (0,5 en 45 ml de metanol, más 45 ml de agua, más 10 Ml de ácido acético) o colorante rojo Ponceau (0,5 g en 100 ml de ácido tricloroacético Al 5 por 100) Solución Decolorante negro amido (47,5 ml de etanol, más 47,5 ml de agua, más 5 ml ácido acético) o decolorante rojo Ponceau (ácido acético al 5 por 100) Solución disolvente (ácido acético al 80 por 100). Para la cuantificación por elución. Solución deshidratante: Metanol. Solución Transparentadora A y B. Mezclarse en proporciones 9:1. La mezcla tiene una Duración aproximada de 10 días. O Solución A: 870 ml de etanol más 30 ml de Ciclohexanona.O Solución B: ácido acético PROCEDIMIENTO. - Preparar el alimentador: conectar los cables a la fuente y a la cubeta - Seleccionar V, I, y tiempo - " No conectar todavía a la red" - Preparar la cubeta: Rellenar los receptáculos de la cubeta (limpia y seca) con solución Tampón; asegurarnos que el tampón moja los electrodos. Tapar la cubeta. 1.- Sumergir las tiras en el tampón durante un mínimo de 15´ (aprox. 150 ml/3 tiras). (Una vez abierto el envase de tiras, conservar las sobrantes en solución de metanol al 30-40 % ) 2.- Sacar las tiras y eliminar el exceso de tampón entre dos hojas de papel de filtro. 3.- Montar las tiras sobre el puente con la cara absorbente hacia arriba (superficie Mate, Esquina cortada abajo y derecha). Introducir en la cubeta, tapar y esperar 2-3 minutos A que se estabilicen. 4.- Aplicar la muestra a 1 cm del borde del cátodo (polo negativo, generalmente borne Negro). 2 5.- Tapar la cubeta y conectar el alimentador a la corriente. Seleccionaremos 60 Minutos, intensidad de 10 mA si conectamos una cubeta ó de 100 mA si conectamos Más de una cubeta y Voltaje 200 V. (Todo ello si usamos el aplicador macro). 6.- Transcurridos los 60 minutos, desconectamos la fuente y sacamos la tira. 7.- Coloración: Sumergir las tiras en cubeta con colorante durante 10 minutos (cara Absorbente hacia abajo). 8.- Decolorar las tiras sumergíéndolas en 3 ó 4 baños de solución decolorante hasta Conseguir el fondo blanco ( 1 ó 2 minutos con agitación). Eliminar el exceso de Decolorante con papel de filtro. 9.- Deshidratar las tiras en un baño de metanol durante 1 minuto. 10.- Transparentar con solución transparentadora A y B en proporción 9:1. Se sumergen Las tiras durante 1-2 minutos con agitación. La solución transparentadora se prepara en El momento de usarla. 11.- Sacar la tira y extenderla sobre una placa de vidrio con la cara absorbente hacia Abajo(hacia el cristal). Eliminar las burbujas con un rodillo. 12.- Calentar la placa en una estufa a 60-70 grados hasta que la transparencia sea Completa (3-4 minutos). (Puede dejarse a Tª ambiente durante una hora). 13.- Dejar enfriar a Tª ambiente unos 30´ antes de retirar las tiras. 14.- Lectura de cuantificación: se introduce la tira en el fotodensitómetro. Se obtiene el Proteinograma con los porcentajes y el trazado electroforético.