Vector prueba de promotor

BIOT  EN SALUD HUM .-Desarrollo en tecnologías para el diagnóstico de enfermedades infecciosas o de desordenes genéticos.--*Obtención de nuevos compuestos químicos para el control de enfermedades.*Obtención de nuevos productos cosméticos. *La producción de proteínas,  vacunas.*Desarrollo y producción de sistemas de diagnóstico. *El diseño, producción y métodos de administración de fármacos. *La biología molecular del genoma humano y medicina molecular.BIOT  ANIMAL Su aplicación es dirigida a sistemas diagnósticos, nuevas vacunas y drogas, fertilización de embriones in vitro, uso de hormonas de crecimiento, etc. *El incremento en la productividad y calidad de carne y leche (uso de hormonas). *Producción de elementos de alto valor agregado en animales transgénicos (antibióticos, vitaminas y enzimas).*Producción de nuevas vacunas e inmunización intracelular.* Desarrollo de métodos de diagnóstico. *Animales transgénicos como un modelo de estudio de enfermedades humanas.BIOT  INDUSTRIAL  es la disciplina que hace uso de los conocimientos científicos campos de biología molecular, microbiología, bioquímica e ingeniería bioquímica, para contribuir al desarrollo de la agricultura, la medicina y las ciencias ambientales  *La obtención de cepas mejoradas.*El diseño y sobreproducción de enzimas con propiedades  especiales.*El desarrollo de nuevos bioprocesos (enzimas inmovilizadas, biosensores, bioreactores). * La producción de metabolitos por cultivos in vitro de células vegetales y animales.BIOT VEGETAL *Plantas transgénicas resistentes : plagas y factores abióticos*Plantas transgénicas con carácterísticas mejoradas y/o nuevas.*Células y plantas transgénicas: como sistemas de producción de metabolitos secundarios, plástico biodegradable, etc.*Mapas genómicos :  fitomejoramiento tradicional. *Reemplazo de agroquímicos por productos de origen biológico.EN LA AGRICULTURA SE ORIENTAN HACIA:  *El incremento en el redimiento, la productividad y la calidad de los productos agrícolas.*Disminución en el tiempo y costo de programas de fitomejoramiento.*Producción de metabolitos. *Biopesticidas y control biológico.* Plantas como modelo genético. *Virología molecular. *Evaluación y utilización de la diversidad genética BENEFICIOS*Alimentos con más vitaminas, minerales y proteínas, y menor contenido en grasas*Cultivos más resistentes al ataque de virus, hongos insectos sin la necesidad de emplear productos químicos, lo que supone un mayor ahorro económico y menor daño al medio ambiente*Mayor tiempo de conservación de frutas y verduras*Cultivos tolerantes al sequía y estrés EN  CONTRA Aparición de alergias insospechadas*Desaparición de avifauna que no se adapte a las nuevas condiciones  de plantas mejoradas. BIOT  AMBIENTAL se refiere a la aplicación de los procesos biológicos modernos para la protección y restauración de la calidad del ambiente. El uso de microorganismos  (biorremediación ) en  procesos ambientales .*El tratamiento de aguas residuales (aerobio y anaerobio).  *El uso creciente de bioabonos y biopesticidas. *tratamiento de sólidos y gases.VENT DE LA BIOTEC *Bajo consumo energético.*Facilidad de acceso a materias primas (producción in situ). *Contrastados y probados a lo largo de toda la evolución biológica. *Especificidad. *Sustentabilidad medioambiental.SISTEMAS DE Expresión Producción DE Proteínas RECOMBINANTES .-*Vectores de clonamiento: permiten insertar secuencias de DNA (pBluescript, pBR322, pTOPO, pGMT).*Enzimas de restricción. Uso de enzimas de corte poco frecuente.*Fragmentos de ADN de genes de interés. Secuencias génicas con regiones regulatorias.*Amplificados mediante PCR. Secuencias génicas sin regiones regulatorias. Marcos de lectura abiertos (ORF).*Vectores de expresión: permiten sobreexpresar los genes clonados (pET-21a-d; pBAC)*Huéspedes de clonamiento: células que reciben vectores de clonamiento. E. Coli JM109, DH-5α*Huéspedes de expresión: células que pueden sobreexpresar un gen clonado en un vector de expresión. E. Coli JM109(DE3) REQUERIMIENTOS PARA LA EXPRESIÓN DE UN GEN *El gen se transcriba y traduzca.*Un promotor para el inicio de la transcripción y un terminador.*Una RNA polimerasa compatible con la célula hospedera. El sistema del promotor puede ser regulado con IPTG o cambiando la temperatura (promotores termosensibles).*Que la proteína sea activa y se secrete. PROBLEMAS COMUNES EN LA Producción DE Proteínas RECOMBINANTES *La proteína recombinante puede ser degradada por enzimas proteolíticas de la célula huésped.*Formación de cuerpos de inclusión.*Plegamiento apropiado de las proteínas y actividad.*Modificaciones postraduccionales.*Estabilidad del vector. Degradación por sistemas de restricción. PRODUCCIÓN DE PROTEÍNAS HUMANAS CON FINES FARMACÉUTICO Ventajas: -Conseguimos compuestos imposibles de sintetizar químicamente.-Obtenemos grandes cantidades, por la mayor velocidad de crecimiento de los microorganismos con respecto a otros seres vivos. -Las proteínas producidas son idénticas a las humanas, por lo que desaparecen los problemas de rechazo inmunológico. Expresión DE GENES EN Huéspedes BACTERIANOS .-USO DE BACTERIAS*Simplicidad.*Tiempo de generación corto.*Alto rendimiento a bajo costo. B. Subtilis puede excretar el producto al medio de cultivo.INCONVENIENTES*Productos con actividad biológica inestable *Modificaciones postraduccionales para procariontes.--Formación de enlaces disulfuro.-Ruptura proteolítica de precursores (eliminación de secuencias específicas para generar proteínas activas.-Glicosilación (adición de azúcares) en residuos de serina, treonina, asparagina. *Purificación insuficiente. Producto final con compuestos bacterianos tóxicos. *La proteína debe ser idéntica a la proteína natural: propiedades  bioquímicas, físicas y funcionales. *  Cuerpos de inclusión: proteínas inactivas. *Proteínas recombinantes tóxicas para la célula huésped.USO DE ESCHERICHIA COLI COMO HUÉSPED * Es el microorganismo mejor estudiado * No patógeno * Fácil de cultivar en medios baratos* Crecimiento rápidoVENTAJAS*Genética bien conocida.*Mecanismos regulatorios conocidos*Crecimiento rápido y fácil*Medios de cultivo baratos*Altos niveles de expresiónDESVENTAJAS*Las proteínas no son secretadas*Contienen endotoxinas*No realizan modificaciones post-traduccionales para eucariontes*Posibilidad de plegamiento incorrecto de proteínas*La separación de células puede dañar las proteínasExpresión DE GENES EN Células EUCARIONTES *TRANSFORMACIÓN.:Introducción de DNA en el interior de células bacterianas y levaduras: *TRANSFECCIÓN.Introducción de DNA exógeno en células animalesUSO DE VECTORES SIMILARES A LOS UTILIZADOS CON BACTERIAS: *Marcadores de selección.*Secuencia promotora eucarionte.*Sistema de transcripción y traducción eucarionte.*Secuencia señal de poliadenilación del RNAm transcrito.*Los vectores pueden insertarse en el genoma (recombinación homóloga.