Fases Clave en las Técnicas de Hibridación Molecular
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Las diferentes técnicas de hibridación, de forma genérica, se pueden dividir en 4 fases:
1. Preparación de la Muestra y Soporte (Prehibridación)
En esta fase se preparan la muestra y el soporte. Dependiendo de la técnica a realizar, se pueden desarrollar esta fase en múltiples pasos, incluyendo digestiones enzimáticas, electroforesis, bloques de uniones inespecíficas, etc.
2. Hibridación
Se producirá el híbrido sonda/secuencia diana, teniendo en cuenta:
- Tm del híbrido que sea óptima: dependiente del ADN o ARN utilizado.
- Creación de mismatch o híbridos imperfectos: que tienen Tm cercanas a la óptima. Normalmente, este mismatch es un 15% dentro de una molécula de ácido nucleico, pero para evitarlo habrá que definir el tiempo de