Медицинская микробиология кишечных и зоонозных инфекций: диагностика и свойства возбудителей

1. Классификация и общая характеристика семейства кишечных бактерий

Грамотрицательные короткие палочки с закруглёнными концами.

Спор и макрокапсул не образуют.

Преимущественно подвижны, перитрихи.

Беспорядочно располагаются в мазке.

Ферментируют глюкозу (и другие углеводы) до кислоты или до кислоты и газа.

Факультативные анаэробы или аэробы.

Хорошо растут на обычных питательных средах.

Место обитания – ЖКТ и ВДП.

Фекально-оральный механизм заражения.

Каталазопозитивны.

2. Энтеропатогенные кишечные палочки. Морфологические свойства

Классификация

• Семейство: Enterobacteriaceae (более 30 родов)

а) патогенные (роды): •Shigella •Salmonella •Escherichia (отдельные варианты) •Yersinia

б) условно-патогенные (роды): •Escherichia •Klebsiella •Proteus

Морфологические свойства

Грамотрицательные короткие палочки с закруглёнными концами.

Спор и макрокапсул не образуют.

Преимущественно подвижны, перитрихи.

Беспорядочно располагаются в мазке.

Ферментируют глюкозу (и другие углеводы) до кислоты или до кислоты и газа.

Факультативные анаэробы или аэробы.

Хорошо растут на обычных питательных средах.

Место обитания – ЖКТ и ВДП.

Фекально-оральный механизм заражения.

Каталазопозитивны.

3. Микробиологическая диагностика эшерихиозов

1 этап. Посев эмульсии испражнений на чашку со средой ЭНДО (проводим штрихом на среде). Исследуемый материал: · Фекалии · Рвотные массы · Пищевые продукты (при подозрении на пищевое заражение)

· Цель: Получение изолированных колоний. На этих средах кишечная палочка (E. coli) растет в виде цветных колоний (например, на среде Эндо — колонии малиново-красного цвета с металлическим блеском), что позволяет отличить ее от других бактерий.

2 этап

А) Описание культуральных свойств колоний, выросших на среде Эндо. Выросли лактозопозитивные малиновые с металлическим блеском колонии (цвет и блеск фуксия), так как лактоза расщепляется с образованием кислоты и газа и меняет pH среды.

Б) Приготовление мазков из лактозопозитивных колоний на среде Эндо, окраска по Граму.

В) Посев лактозопозитивной колонии со среды Эндо на трёхсахарный агар (штрихом и уколом) и пептонную воду, и изучение ферментативных свойств.

Г) Постановка реакции агглютинации на стекле лактозопозитивной колонии со среды Эндо со смесью colli OB сывороток = лактозопозитивные колонии являются Escherichia coli.

3 этап

А) Учёт изменений на трёхсахарном агаре и ПВ: произошло изменение цвета трёхсахарного агара с малинового на жёлтый = расщепление глюкозы и лактозы до кислоты, а также выделение газа. На ПВ сероводород не образуется (индикатор не чернеет), а проба на индол – положительная.

Вывод: по ферментативным свойствам культура соответствует E. coli.

Б) Постановка реакции агглютинации на стекле чистой культуры с эшерихиозными типовыми агглютинирующими сыворотками.

Вывод: произошла агглютинация с типовой O-111 сывороткой.

Заключение: из образцов ребёнка выделена чистая культура E. coli на основе изученных свойств:

- морфологических и тинкториальных (мелкие, хаотично расположенные, Гр-, палочки);

– культуральных (лактозопозитивные красные с металлическим блеском колонии на среде Эндо);

– биохимических (на трёхсахарном агаре расщепление глюкозы и лактозы до кислоты и газа и положительная проба на индол и ПВ);

– антигенных (положительная реакция агглютинации на стекле со смесью colli OB сывороток и тип. Colli O-111).

Нами выделена чистая культура энтеропатогенной кишечной палочки Серова O-111.

4. Биологические препараты, применяемые для лечения кишечных инфекций

1. Бифидумбактерин

1. Назначение препарата: Лечебное.

2. Что представляет собой: Лечебный препарат, представляющий собой лиофилизированную живую культуру бактерий Bifidobacterium bifidum (или других видов бифидобактерий).

3. Способ получения: Препарат получают путем культивирования в стерильных условиях на питательных средах специально отобранных штаммов бифидобактерий. После накопления биомассы бактериальную взвесь отделяют от питательной среды, промывают, смешивают с криопротектором (для защиты клеток) и высушивают методом лиофилизации (сушка в замороженном состоянии под вакуумом).

2. Колибактерин

1. Назначение препарата: Лечебное.

2. Что представляет собой: Лечебный препарат, представляющий собой лиофилизированную живую культуру специального непатогенного штамма Escherichia coli M-17.

3. Способ получения: Препарат получают путем культивирования штамма E. coli M-17 на питательных средах в ферментерах. После достижения необходимой концентрации бактерий их центрифугируют, суспендируют в стабилизирующей среде и высушивают методом лиофилизации.

3. Лактобактерин

1. Назначение препарата: Лечебное.

2. Что представляет собой: Лечебный препарат, представляющий собой лиофилизированную живую культуру бактерий Lactobacillus plantarum или других видов лактобактерий.

3. Способ получения: Препарат получают путем культивирования в стерильных условиях штаммов лактобактерий на питательных средах. Бактериальную биомассу отмывают от продуктов метаболизма, концентрируют и высушивают методом лиофилизации.

4. Бификол

1. Назначение препарата: Лечебное.

2. Что представляет собой: Комбинированный лечебный препарат, представляющий собой лиофилизированную смесь живых культур двух видов бактерий: Bifidobacterium bifidum и Escherichia coli M-17.

3. Способ получения: Препарат получают путем раздельного культивирования штаммов бифидобактерий и кишечной палочки. После накопления биомассы культуры смешивают в установленном соотношении, стабилизируют и высушивают методом лиофилизации.

5. Бифилакт

1. Назначение препарата: Лечебное.

2. Что представляет собой: Комбинированный лечебный препарат, представляющий собой лиофилизированную смесь живых культур двух видов бактерий: Bifidobacterium и Lactobacillus.

3. Способ получения: Препарат получают путем раздельного культивирования штаммов бифидобактерий и лактобактерий. После накопления биомассы культуры смешивают в определенной пропорции, суспендируют в стабилизирующей среде и высушивают методом лиофилизации.

5. Сальмонеллы. Морфобиологические свойства. Роль в патологии человека

1. Морфобиологические свойства сальмонелл

А. Морфологические свойства:

· Форма: Палочковидные бактерии.

· Окраска по Граму: Грамотрицательные (Гр -).

· Споры и капсулы: Не образуют спор. Большинство не образуют и капсулу, однако три серовара обладают микрокапсулой (Vi-антигеном): · Salmonella Typhi · Salmonella Paratyphi C · Salmonella Dublin

· Органеллы движения: Имеют жгутики, расположенные по всей поверхности клетки (перитрихи), что обеспечивает их подвижность.

Б. Культуральные свойства:

· Тип дыхания: Факультативные анаэробы (могут расти как в присутствии кислорода, так и без него).

· Питательные среды: Неприхотливы, хорошо растут на простых питательных средах (Мясо-Пептонный Агар - МПА, Мясо-Пептонный Бульон - МПБ).

· Температурный оптимум: 15-45 °C.

· Элективные (избирательные) факторы: Обладают уникальной устойчивостью к солям желчных кислот, что является важным диагностическим и патогенетическим признаком. Желчь для них – стимулятор роста.

· Другие элективные факторы: селенит натрия, хлористый магний, анилиновые красители.

В. Биохимические свойства:

· Ферментация углеводов:

· Ферментируют глюкозу с образованием кислоты и, как правило, газа (кроме S. Typhi, которая образует только кислоту).

· Не ферментируют лактозу и сахарозу, что является ключевым признаком для дифференциации на средах (например, Эндо, Левина, трехсахарный агар), где их колонии остаются бесцветными.

· Образование сероводорода (H₂S): Большинство сероваров (кроме S. Paratyphi A) продуцируют H₂S, что видно на средах типа Кligler Iron Agar.

Г. Антигенное строение (основа для классификации по схеме Кауфмана-Уайта):

· О-антиген (соматический): Термостабильный липополисахарид клеточной стенки. Определяет серологическую группу (A, B, C1, C2, D, E и т.д.).

· Н-антиген (жгутиковый): Термолабильный белковый. Важной особенностью является его двухфазность:

· Фаза 1 (специфическая): Антигены обозначаются строчными латинскими буквами (a, b, c, d, i...).

· Фаза 2 (неспецифическая): Антигены обозначаются арабскими цифрами или буквами.

· Vi-антиген (капсульный): Встречается только у трех сероваров (S. Typhi, S. Paratyphi C, S. Dublin). Связан с вирулентностью и устойчивостью к фагоцитозу.

Д. Устойчивость во внешней среде:

Сальмонеллы чрезвычайно устойчивы:

· В воде, почве, пыли – до 3 месяцев.

· В колбасных изделиях – до 6 месяцев.

· В замороженном мясе и яйцах – до 1 года.

· В молочных продуктах (масло) – до 120 дней.

· Отмечается рост штаммов, устойчивых к антибиотикам.

2. Роль в патологии человека

Сальмонеллы вызывают у человека три основные группы заболеваний:

А. Брюшной тиф и паратифы A, B, C (Тифо-паратифозные заболевания)

· Возбудители: Salmonella Typhi (брюшной тиф), S. Paratyphi A, B, C (паратифы). Это антропонозы (источник – только человек).

· Механизм передачи: Фекально-оральный (водный, пищевой, контактно-бытовой).

· Патогенез: Бактерии проникают через кишечник → размножаются в лимфатических узлах (пейеровых бляшках) → поступают в кровь (бактериемия) → разносятся по органам (печень, селезенка, костный мозг, желчный пузырь) → вторично с желчью возвращаются в кишечник, вызывая воспаление, некроз и образование язв.

· Клиника: Циклическое течение с длительной лихорадкой, интоксикацией ("тифозный статус" – помрачение сознания), розеолезной сыпью, увеличением печени и селезенки, характерным стулом ("гороховый суп").

· Осложнения: Кишечное кровотечение, перфорация кишечника, перитонит.

· Исходы: Выздоровление, смерть или формирование бактерионосительства (острого до 3 мес. или хронического – годами).

Б. Сальмонеллез (Сальмонеллезный гастроэнтерит)

· Возбудители: Многочисленные серовары (более 2600), наиболее частые – S. Enteritidis и S. Typhimurium (80-90% случаев). Это зооантропонозы (источник – животные, птицы, реже человек).

· Механизм передачи: Пищевой (мясо, яйца, молоко), реже водный и контактно-бытовой.

· Патогенез: Массивное размножение бактерий в просвете тонкого кишечника → разрушение части бактерий → высвобождение эндотоксина и энтеротоксинов → воспаление, нарушение водно-электролитного баланса → диарея, интоксикация. Генерализация (проникновение в кровь) возможна при ослаблении иммунитета.

· Клинические формы:

· Гастроинтестинальная (85-90% случаев): Гастрит, гастроэнтерит, энтероколит с тошнотой, рвотой, обильной водянистой диареей ("болотная тина"), болями в животе, лихорадкой.

· Генерализованная:

· Тифоподобный вариант: Напоминает брюшной тиф.

· Септикопиемический вариант: Тяжелое течение с формированием гнойных очагов в различных органах.

· Бактериовыделение: Острое, хроническое, транзиторное.

В. Внутрибольничный (нозокомиальный) сальмонеллез

· Особенность: Вызывается особыми госпитальными штаммами (чаще S. Typhimurium), обладающими множественной устойчивостью к антибиотикам, дезинфектантам и высокой выживаемостью во внешней среде.

· Источник: Больные, носители, персонал, загрязненные объекты больничной среды (пыль, поверхности, аппаратура).

· Группы риска: Новорожденные, пожилые, пациенты с иммунодефицитами, после операций, получающие антибиотики или химиотерапию.

· Течение: Преобладают тяжелые и среднетяжелые гастроинтестинальные и генерализованные формы. Летальность достигает 3-8%.

6. Антигенная структура и классификация сальмонелл по Кауфману-Уайту

· О-антиген (соматический): Термостабильный липополисахарид клеточной стенки. Определяет серологическую группу (A, B, C1, C2, D, E и т.д.).

· Н-антиген (жгутиковый): Термолабильный белковый. Важной особенностью является его двухфазность:

· Фаза 1 (специфическая): Антигены обозначаются строчными латинскими буквами (a, b, c, d, i...).

· Фаза 2 (неспецифическая): Антигены обозначаются арабскими цифрами или буквами.

· Vi-антиген (капсульный): Встречается только у трех сероваров (S. Typhi, S. Paratyphi C, S. Dublin). Связан с вирулентностью и устойчивостью к фагоцитозу.

7. Монорецепторные сальмонеллезные сыворотки. Принципы их получения

Монорецепторные сальмонеллезные сыворотки — это диагностические сыворотки, содержащие антитела (агглютинины) только к одному специфическому антигену сальмонелл. Они являются ключевым инструментом для серологической идентификации и типирования сальмонелл по схеме Кауфмана-Уайта.

· Исходно: Нативная сыворотка (Ат A + Ат B + Ат C)

· Адсорбция: Сыворотку смешивают с бактериями, имеющими антигены B и C.

· Результат: Ат B и Ат C адсорбируются и удаляются.

· Конечный продукт: Адсорбированная монорецепторная сыворотка, содержащая только Ат A.

Применение

Монорецепторные сыворотки используются для точного определения О-, Н- и Vi-антигенов в ходе серологической идентификации сальмонелл, что позволяет установить их серогруппу и серовар.

8. Микробиологическая диагностика сальмонеллезов

1 этап. Посев эмульсии испражнений на чашку со средой висмут-сульфитного агара (БИА) (проводим штрихом на среде).

Исследуемый материал: · Фекалии · Рвотные массы · Пищевые продукты (при подозрении на пищевое заражение)

Цель: Получение изолированных колоний. На этой среде сальмонеллы (Salmonella spp.) растут в виде колоний черного цвета с металлическим блеском, что позволяет отличить их от других бактерий.

2 этап

А) Описание культуральных свойств колоний, выросших на среде БИА. Выросли лактозонегативные колонии черного цвета с металлическим блеском, так как сальмонеллы образуют сероводород, который взаимодействует с солями железа в среде.

Б) Приготовление мазков из лактозонегативных колоний на среде БИА, окраска по Граму.

В) Посев лактозонегативной колонии со среды БИА на трёхсахарный агар (штрихом и уколом) и пептонную воду, и изучение ферментативных свойств.

Г) Постановка реакции агглютинации на стекле лактозонегативной колонии со среды БИА со смесью сальмонеллезных O-сывороток = лактозонегативные колонии являются Salmonella spp.

3 этап

А) Учёт изменений на трёхсахарном агаре и ПВ: произошло изменение цвета скошенной части трёхсахарного агара на малиновый, а столбика - на желтый = расщепление только глюкозы до кислоты и газа. Столбик почернел = образование сероводорода. На ПВ сероводород не образуется (индикатор не чернеет), а проба на индол – отрицательная.

Вывод: по ферментативным свойствам культура соответствует Salmonella spp.

Б) Постановка реакции агглютинации на стекле чистой культуры с сальмонеллезными типовыми агглютинирующими сыворотками.

Вывод: произошла агглютинация с типовой O-группы B сывороткой.

Заключение: из испражнений ребёнка выделена чистая культура Salmonella spp. на основе изученных свойств:

– морфологических и тинкториальных (мелкие, хаотично расположенные, Гр-, палочки);

– культуральных (лактозонегативные черные с металлическим блеском колонии на среде БИА);

– биохимических (на трёхсахарном агаре расщепление только глюкозы до кислоты и газа, образование сероводорода и отрицательная проба на индол на ПВ);

– антигенных (положительная реакция агглютинации на стекле со смесью сальмонеллезных O-сывороток и типовой Salmonella O-группы B).

2. Экспресс-диагностика

· ИФА (иммуноферментный анализ) — для обнаружения антигенов сальмонелл в материале.

· ПЦР (полимеразная цепная реакция) — для выявления специфических фрагментов ДНК сальмонелл. Позволяет быстро получить результат.

3. Серодиагностика (используется ретроспективно)

· Применяется преимущественно для ретроспективной диагностики и эпидемиологического анализа.

· Исследуют парные сыворотки крови больного, взятые с интервалом 7-10 дней, для выявления нарастания титра антител в РНГА (реакция непрямой гемагглютинации).

· Для диагностики брюшнотифозного носительства используют РНГА с Vi-антигеном (диагностический титр 1:40 и выше).

9. Особенности микробиологической диагностики сальмонеллёзов у детей

1. Внутрибольничный сальмонеллёз: первые вспышки нозокомиального сальмонеллёза характеризовались вовлечением в эпидпроцесс детей в возрасте до 1 года и новорожденных. Таким образом, дети этой возрастной группы составляют основную группу риска по внутрибольничному сальмонеллёзу.

2. Фактор риска: Особому риску подвержены новорожденные, находящиеся на искусственном вскармливании.

3. Основной метод диагностики: Как и для взрослых, основным методом лабораторной диагностики является бактериологический, который включает выделение чистой культуры сальмонелл и её идентификацию.

4. Возбудитель: Наиболее частым возбудителем внутрибольничных сальмонеллёзов, в том числе и у детей, является Salmonella Typhimurium.

5. Свойства возбудителя: Штаммы, вызывающие внутрибольничные инфекции, обладают:

· Множественной устойчивостью к антимикробным препаратам (это определяет необходимость определения чувствительности).

· Устойчивостью к бактериофагам и дезинфектантам.

· Антилизоцимной активностью и IgA-протеазной активностью, что позволяет им преодолевать защитные барьеры организма.

10. Общая характеристика возбудителей брюшного тифа и паратифов

1. Таксономия и номенклатура:

· Правильное название: Salmonella enterica subsp. enterica.

Правильные обозначения сероваров:

· Salmonella enterica ser. Typhi (или сокращенно Salmonella Typhi) — возбудитель брюшного тифа.

· Salmonella enterica ser. Paratyphi A, B, C — возбудители паратифов A, B и C.

2. Морфологические свойства:

· Грамотрицательные палочки.

· Не образуют спор и капсул (за исключением трех сероваров, имеющих микрокапсулу).

· Имеют жгутики (перитрихи).

3. Культуральные свойства:

· Факультативные анаэробы.

· Не требовательны к питательным средам, растут на МПА и МПБ.

· Оптимальная температура роста: 15-45 °C.

· Устойчивы к солям желчных кислот, которые являются для них элективным (избирательным) фактором.

4. Биохимические свойства:

· Ферментируют глюкозу без образования газа (S. Typhi, S. Paratyphi A) или с образованием газа (S. Paratyphi B).

· Не ферментируют лактозу и сахарозу.

· Большинство (S. Typhi, S. Paratyphi B) образуют сероводород (H₂S).

5. Антигенное строение (основа для серодиагностики и классификации по схеме Кауфмана-Уайта):

· О-антиген (соматический).

· Н-антиген (жгутиковый), обладает двухфазностью (специфическая и неспецифическая фазы).

· Vi-антиген (антиген вирулентности). Обладают три серовара: S. Typhi, S. Paratyphi C, S. Dublin.

6. Факторы вирулентности:

· Факторы адгезии и инвазии (пили, белки наружной мембраны).

· Обладают лимфотропностью — поражают лимфатический аппарат кишечника.

· Система секреции III типа (T3SS) — обеспечивает инвазию в клетки.

· Устойчивость к фагоцитозу (обеспечивается Vi-антигеном, каталазой, супероксиддисмутазой).

· Токсины:

· Эндотоксин (ЛПС) — основной фактор интоксикации.

· Тифоидный токсин (A2B5) — вырабатывается только возбудителями брюшного тифа и паратифов. Содержит субъединицы, обладающие ДНК-азной и АДФ-рибозилтрансферазной активностью.

7. Резистентность:

· Обладают высокой устойчивостью во внешней среде (в воде, почве, пыли — до 3 мес., в пищевых продуктах — от нескольких дней до года).

· Отмечается неуклонный рост штаммов, устойчивых к антибиотикам.

11. Методы микробиологической диагностики брюшного тифа в связи с патогенезом

Ключевые фазы патогенеза и их диагностика:

1. Фаза внедрения и первичной бактериемии (1-я неделя болезни)

· Патогенез: Возбудитель (Salmonella Typhi) проникает через рот, достигает тонкого кишечника, внедряется в лимфоидные образования (пейеровы бляшки, солитарные фолликулы), размножается в них и прорывается в кровь (первичная бактериемия).

· Материал для исследования: Кровь.

· Основной метод: Бактериологический (посев крови — гемокультура).

· Цель: Прямое выделение возбудителя из крови для подтверждения диагноза.

· Методика: Кровь засевают в среды обогащения (желчный бульон, среда Рапопорта). Это увеличивает вероятность обнаружения возбудителя даже при малой концентрации.

2. Фаза паренхиматозной диффузии и вторичной бактериемии (2-3-я неделя болезни)

· Патогенез: Возбудитель с током крови заносится в паренхиматозные органы (печень, селезенку, костный мозг, желчный пузырь), где размножается в макрофагах. Это приводит к массивной вторичной бактериемии и началу выделения бактерий из организма.

· Материалы для исследования:

· Кал (копрокультура) — основной материал в этот период, так как возбудитель массово выделяется с желчью в просвет кишечника.

· Моча (уринокультура) — бактерии выделяются через почки.

· Кровь — бактериемия сохраняется.

· Основной метод: Бактериологический.

· Методика:

· Посев кала и мочи на плотные дифференциально-диагностические среды (Висмут-сульфит агар, среды Эндо, Плоскирева) для получения изолированных колоний.

· Одновременно используют среды обогащения (селенитовый бульон) для увеличения высеваемости.

· Дополнительный метод: Серологический (Реакция Видаля).

· Цель: Обнаружение специфических антител в сыворотке крови больного.

3. Фаза реконвалесценции и бактерионосительства

· Патогенез: После выздоровления возбудитель может длительно персистировать в желчном пузыре и выделяться во внешнюю среду.

· Материалы для исследования: Кал, моча, дуоденальное содержимое (желчь).

· Основной метод: Бактериологический.

· Многократное исследование кала и мочи.

· Наиболее достоверный метод выявления носительства — бактериологическое исследование желчи, полученной при дуоденальном зондировании, так как основной очаг персистенции — желчный пузырь.

· Серологический метод (РПГА с Vi-антигеном):

· Используется как скрининговый. Обнаружение высокого титра Vi-антител позволяет заподозрить хроническое носительство.

12. Выделение гемокультуры при брюшном тифе

Исследование гемокультуры от больного брюшным тифом и тифо-паратифозной группой

1 этап

Посев крови больного в желчный бульон (10 мл крови в 100 мл бульона), соотношение крови и среды 1:10.

2 этап

Высев из желчного бульона на среду Эндо (посев петлей штрихом).

3 этап

А) Учет результатов посева на среде Эндо. Выросли лактозонегативные колонии.

Б) Приготовление мазка из выросших колоний, окраска по Граму.

В) Постановка реакции агглютинации на стекле выросшей культуры на среде Эндо со смесью поливалентных сывороток A, B, C, D, E.

Вывод: произошла агглютинация со смесью сывороток A, B, C, D, E; следовательно, Salmonella принадлежит к группам A, B, C, D, E.

Г) Посев на развернутый ряд Гисса лактозопозитивной колонии со среды Эндо, а также на пептонную воду для изучения ферментативных свойств и на скошенный МПА для получения чистой культуры.

4 этап

А) Учет изменений на пёстром ряду Гисса (глюкоза + кислота, лактоза -, мальтоза + кислота, маннит + кислота, сахароза -, ПВ -, сероводород +, индол +).

Вывод: по пёстрому ряду предполагаем, что это брюшной тиф.

Б) По биохимическим свойствам это Salmonella typhi.

Постановка реакции агглютинации на стекле, выделение чистой культуры с монорецепторными сальмонеллёзными O9 и Hd сыворотками (произошла агглютинация = Salmonella typhi).

Заключение

Из периферической крови больного выделена чистая культура на основании изученных свойств:

- морфологических и тинкториальных (мелкие, хаотично расположенные в мазке Гр- палочки);

- культуральных (на среде Эндо были лактозонегативные колонии);

- биохимических (на пёстром ряду Гисса расщепились глюкоза, мальтоза, маннит с образованием кислоты и выделением сероводорода на ПВ);

- антигенных (положительная реакция агглютинации с поливалентной A, B, C, D, E сывороткой и с монорецепторными O9 и Hd сальмонеллёзными сыворотками).

Нами выделена чистая культура Salmonella typhi (S. typhi).

13. Выделение копрокультуры при брюшном тифе

1 этап: Посев на среды обогащения

· Материал: Проба испражнений (фекалий) больного.

· Методика: Посев пробы в селенитовый бульон (или другую среду обогащения, например, среду Мюллера-Кауфмана). Соотношение материала и среды стандартное (например, 1:10).

· Цель: Накопление сальмонелл и подавление роста сопутствующей микрофлоры.

· Инкубация: При 37°C в течение 12-18 часов.

2 этап: Высев на плотные дифференциальные среды

· Методика: Петлей производится высев из обогатительной среды (селенитового бульона) на плотные дифференциально-диагностические среды – среду Эндо и/или Висмут-сульфит агар. Посев выполняется штрихом для получения изолированных колоний.

· Цель: Получение изолированных колоний для дальнейшей идентификации.

3 этап: Идентификация подозрительных колоний

· А) Учет роста на среде Эндо: На среде Эндо выросли бесцветные, лактозонегативные колонии, что характерно для сальмонелл.

· Б) Микроскопия: Приготовление мазка из выросших колоний, окраска по Граму. Обнаружены мелкие грамотрицательные палочки, расположенные хаотично.

· В) Ориентировочная серологическая идентификация: Постановка реакции агглютинации на стекле выросшей культуры со смесью поливалентных О-сальмонеллёзных сывороток (А, В, С, D, E).

· Вывод: Произошла агглютинация со смесью сывороток; следовательно, выделенная культура принадлежит к одной из серогрупп сальмонелл (А, В, С, D, E).

· Г) Получение чистой культуры: Посев выросшей лактозонегативной колонии на «пёстрый ряд» Гисса (или трёхсахарный агар с мочевиной) для изучения ферментативных свойств и на скошенный МПА для накопления чистой культуры.

4 этап: Окончательная идентификация

· А) Учет результатов на «пёстром ряду» Гисса:

· Результат: Глюкоза + (кислота), Лактоза –, Мальтоза + (кислота), Маннит + (кислота), Сахароза –, Сероводород +, Индол –, Мочевина –.

· Вывод: По биохимическим свойствам культура соответствует роду Salmonella.

· Б) Окончательная серологическая идентификация: Постановка реакции агглютинации на стекле с чистой культурой с монорецепторными сальмонеллёзными сыворотками:

· Произошла агглютинация с О9 и Hd сыворотками.

· Вывод: Выделена Salmonella Typhi.

Заключение

Из испражнений (копрокультуры) больного выделена чистая культура на основании изученных свойств:

· Морфологических и тинкториальных: Мелкие, хаотично расположенные в мазке Гр– палочки.

· Культуральных: На среде Эндо выросли лактозонегативные колонии.

· Биохимических: На «пёстром ряду» Гисса расщепляет глюкозу, мальтозу, маннит с образованием кислоты без газа, образует сероводород, не ферментирует лактозу и сахарозу.

· Антигенных: Положительная реакция агглютинации с поливалентной О-сывороткой (ABCDE) и с монорецепторными О9 и Hd сальмонеллёзными сыворотками.

Вывод: Выделенная культура является Salmonella Typhi (S. Typhi).

14. Серологическая диагностика брюшного тифа (реакция непрямой гемагглютинации)

1. Суть метода:

Выявление в крови антител к Vi-антигену возбудителя. Эритроциты покрывают Vi-антигеном. Если в сыворотке есть антитела – эритроциты склеиваются («зонтик»), нет – оседают «пуговкой».

2. Компоненты:

· Сыворотка крови больного

· Vi-эритроцитарный диагностикум (эритроциты + Vi-антиген)

· Контроли: положительная и отрицательная сыворотки

3. Для чего используется:

Основная цель – выявление хронических носителей.

Vi-антиген позволяет бактерии долго жить в желчном пузыре, что поддерживает высокий уровень Vi-антител.

4. Результаты:

· Положительно: «зонтик» из эритроцитов

· Отрицательно: «пуговка» на дне лунки

· Диагностический титр: 1:40 и выше – подозрение на носительство

5. Важно:

Положительная РНГА – показание к полному обследованию (посев желчи, кала). Это скрининговый метод, а не окончательный диагноз.

15. Специфическая профилактика брюшного тифа и паратифов

I. Инактивированная корпускулярная вакцина

1. Назначение: Профилактическое.

2. Описание препарата: Представляет собой лиофилизированную (высушенную) взвесь убитых (инактивированных спиртом) бактерий Salmonella Typhi. Содержит 10 µg клеток на дозу.

3. Способ приготовления: Возбудитель культивируется, затем инактивируется этиловым спиртом и высушивается.

· Пример: ТИФИВАК (брюшнотифозная спиртовая сухая вакцина).

II. Vi-полисахаридные вакцины

1. Назначение: Профилактическое.

2. Описание препарата: Содержит очищенный капсульный Vi-полисахарид (поверхностный антиген) бактерии Salmonella Typhi. Оптимальный метод получения — хроматографический. Является слабореактогенной.

3. Способ приготовления: Vi-полисахарид выделяется из культур бактерий методами очистки, чаще всего хроматографическими.

· Пример: ВИАНВАК (брюшнотифозная Ви-полисахаридная жидкая вакцина).

III. Комбинированная вакцина

1. Назначение: Профилактическое.

2. Описание препарата: Состоит из двух компонентов: сухой спиртовой корпускулярной вакцины (как в п. I) и раствора очищенного Vi-антигена (как в п. II). Компоненты смешиваются непосредственно перед применением. Является слабореактогенной.

3. Способ приготовления: Комбинируется готовый лиофилизат инактивированных бактерий и готовый раствор очищенного полисахарида.

· Пример: Брюшнотифозная спиртовая вакцина, обогащенная Vi-антигеном.

IV. Живая аттенуированная вакцина

1. Назначение: Профилактическое.

2. Описание препарата: Содержит живой, но ослабленный (авирулентный) мутантный штамм Salmonella Typhi (штамм Ty21a). Выпускается в виде капсул или лиофилизата для приготовления суспензии. Применяется перорально (через рот).

3. Способ приготовления: Получается путем селекции или генетического модифицирования штамма, утратившего патогенность, но сохранившего способность к размножению в кишечнике и индукции иммунитета.

· Пример: Вакцина ТУ-212 (применяется за рубежом).

V. Конъюгированные вакцины (TCV - Typhoid Conjugate Vaccine)

1. Назначение: Профилактическое.

2. Описание препарата: Vi-полисахарид химически связан (конъюгирован) с белком-носителем (например, рекомбинантным столбнячным или дифтерийным анатоксином). Это значительно усиливает иммуногенность и позволяет формировать длительный иммунитет у детей раннего возраста.

3. Способ приготовления: Очищенный Vi-полисахарид ковалентно связывается с белковым носителем методами биохимической конъюгации.

· Пример: Vi-DT вакцина (преквалифицирована ВОЗ).

Средство для экстренной профилактики

· Брюшнотифозный бактериофаг

1. Назначение: Профилактическое (экстренное).

2. Описание препарата: Представляет собой фильтрат фаголизата (раствора, полученного после разрушения бактерий бактериофагами), содержащий вирусы, специфичные к Salmonella Typhi. Выпускается в таблетках с кислотоустойчивым покрытием для перорального приема.

3. Способ приготовления: Получают путем культивирования бактериофагов на штаммах S. Typhi, последующего фильтрования и лиофилизации.

16. Шигеллы — возбудители бактериальной дизентерии. Морфобиологические свойства. Классификация

1. Таксономия и классификация:

· Семейство: Enterobacteriaceae

· Род: Shigella

· Виды (серогруппы):

· Группа A: S. dysenteriae (16 серотипов; 1-й серотип продуцирует Шига-токсин)

· Группа B: S. flexneri (8 серотипов и 11 подтипов)

· Группа C: S. boydii (18 серотипов)

· Группа D: S. sonnei (1 серотип)

2. Морфологические свойства:

· Мелкие грамотрицательные палочки с закругленными концами (0,5x1–3 мкм).

· Не образуют спор.

· Жгутиков не имеют (неподвижны).

· Некоторые серотипы (например, S. flexneri) могут образовывать капсулоподобные структуры.

3. Культуральные свойства:

· Факультативные анаэробы.

· Нетребовательны к питательным средам (хорошо растут на МПА, МПБ).

· На плотных средах образуют S- и R-формы колоний. Для S. sonnei характерна высокая частота S-R диссоциации.

· На жидких средах вызывают диффузное помутнение.

· Оптимальная температура роста +37°C; S. sonnei могут размножаться в диапазоне от +10 до +45°C.

· Основные питательные среды:

· Дифференциальные: Среда Эндо, среда Левина, трёхсахарный агар, среды Гисса.

· Элективно-дифференциальная: Среда Плоскирева.

4. Биохимические свойства:

· Обладают низкой биохимической активностью.

· Ферментируют глюкозу без образования газа.

· Не продуцируют сероводород (H₂S).

· Не ферментируют лактозу в течение 48 часов (исключение – S. sonnei, которая медленно ферментирует лактозу в течение 72 часов).

· S. dysenteriae не ферментирует маннит, остальные шигеллы его расщепляют.

5. Антигенные свойства:

· О-антиген (ЛПС клеточной стенки) – основной для серотипирования.

· К-антиген – имеется у некоторых шигелл.

17. Микробиологическая диагностика дизентерии. Особенности лабораторной диагностики у детей

Особенности у детей:

У детей раннего возраста заболевание часто протекает тяжелее, с выраженной интоксикацией и быстрым развитием обезвоживания. Для лабораторной диагностики предпочтительным материалом являются фекалии, взятые до начала антибактериальной терапии. У детей младшего возраста важно правильно собрать материал (например, с помощью стерильного тампона или катетера), чтобы избежать контаминации.

1 этап: Посев материала

· Материал: испражнения, ректальный мазок, рвотные массы.

· Среда: селективно-дифференциальные среды (среда Плоскирева, Эндо, висмут-сульфитный агар).

· Метод: посев петлёй штрихом для получения изолированных колоний.

2 этап: Идентификация колоний

· Учёт результатов: на среде Эндо шигеллы образуют бесцветные (лактозонегативные) колонии.

· Микроскопия: приготовление мазка, окраска по Граму.

Результат: мелкие грамотрицательные палочки, расположенные хаотично.

3 этап: Биохимическая идентификация

· Посев на «пёстрый ряд» Гисса или трёхсахарный агар с мочевиной.

· Характерные свойства шигелл:

· Ферментация глюкозы без газа;

· Отсутствие H₂S;

· Неферментация лактозы (кроме S. sonnei, которая ферментирует её медленно).

4 этап: Серологическая идентификация

· Постановка реакции агглютинации на стекле с поливалентными и моновалентными шигеллёзными сыворотками (группы A, B, C, D).

· Пример: агглютинация с сывороткой группы B → Shigella flexneri.

5 этап: Дополнительные методы

· ПЦР: для выявления генов токсинов (Shiga-токсин).

· ИФА: для обнаружения антигенов шигелл в фекалиях.

· Серодиагностика (ИФА): ретроспективно — для выявления антител в сыворотке крови.

Заключение:

На основании проведённых исследований выделена чистая культура бактерий рода Shigella.

· Морфологические и тинкториальные свойства: мелкие грамотрицательные палочки.

· Культуральные свойства: рост на среде Эндо в виде бесцветных лактозонегативных колоний.

· Биохимические свойства: ферментация глюкозы без газа, отсутствие H₂S, отсутствие ферментации лактозы.

· Антигенные свойства: положительная реакция агглютинации с сывороткой группы B (Shigella flexneri).

Вывод: выделена культура Shigella flexneri, являющаяся возбудителем дизентерии у пациента.

18. Возбудители холеры. Морфобиологические свойства. Антигенная структура и классификация

1. Таксономия и классификация:

· Семейство: Vibrionaceae

· Род: Vibrio

· Вид: Vibrio cholerae

· Основные серогруппы, вызывающие холеру: O1 и O139 (Бенгал).

· Серогруппа O1 подразделяется на два биовара:

· Классический (V. cholerae cholerae)

· Эль-Тор (V. cholerae eltor)

· Серогруппа O1 также подразделяется на три серотипа по структуре О-антигена:

· Огава (компоненты A и B)

· Инаба (компоненты A и C)

· Гикошима (компоненты A, B и C) – встречается реже.

2. Морфологические свойства:

· Форма: Короткие, изогнутые (в форме запятой) палочки.

· Подвижность: Очень подвижны. Имеют один полярно расположенный жгутик (монотрих).

· Окраска по Граму: Грамотрицательные.

· Споры: Не образуют.

· Капсула: V. cholerae серогруппы O139 образует капсулу. У других серогрупп капсула отсутствует.

· Пили: На поверхности клетки имеются пили (фимбрии).

3. Культуральные свойства:

· Тип дыхания: Факультативный анаэроб.

· Требовательность к питательным средам: Нетребователен, хорошо растет на простых средах (МПА, МПБ).

· Рост в щелочной среде: Устойчив к щелочной среде (pH 8.5–9.0), что является диагностическим признаком. Для культивирования используют 1% щелочную пептонную воду (ПВ) и 1% щелочной агар.

· Характер роста:

· На пептонной воде через 6–8 часов образует нежную голубоватую пленку.

· На плотных средах (например, TCBS – тиосульфат-цитрат-бромтимоловый-сахарозный агар) образует ярко-желтые колонии, так как ферментирует сахарозу.

4. Биохимические свойства:

· Обладает высокой ферментативной активностью.

· Окислительный тест: Положительный.

· Ферментация углеводов: Относится к I группе по Хейбергу:

· Манноза: +

· Сахароза: +

· Арабиноза: –

· Разжижение желатина в виде воронки (перистон).

5. Антигенная структура:

· Н-антиген (жгутиковый): Является общим для всего рода Vibrio (родоспецифический).

· О-антиген (соматический): ЛПС клеточной стенки, термостабильный. Определяет серогрупповую принадлежность. Известно более 200 серогрупп, но эпидемические вспышки вызывают только O1 и O139.

· К-антиген (капсульный): Обнаружен у серогруппы O139.

6. Факторы патогенности:

· Холерный экзотоксин (холероген): Белковый энтеротоксин, состоящий из субъединиц А и В. Субъединица А активирует аденилатциклазу, что приводит к усиленной секреции воды и электролитов в просвет кишечника, вызывая секреторную диарею.

· Эндотоксин (ЛПС): Высвобождается при разрушении бактерии, обуславливает общую интоксикацию.

· Ферменты агрессии: Нейраминидаза, протеазы (способствуют адгезии и инвазии).

· Токсин-корегулируемые пили (IV типа): Обеспечивают прикрепление к эпителию кишечника.

19. Особенности патогенеза и лечения холеры

ПАТОГЕНЕЗ ХОЛЕРЫ

1. Проникновение и адгезия:

· Возбудитель (Vibrio cholerae) проникает в организм перорально с инфицированной водой или пищей.

· Часть вибрионов гибнет в желудке под действием соляной кислоты.

· Выжившие вибрионы достигают тонкого кишечника.

· С помощью токсин-корегулируемых пилей (IV типа) вибрионы прикрепляются к эпителию кишечника.

2. Колонизация и токсинообразование:

· Вибрионы размножаются на поверхности слизистой оболочки, не проникая внутрь клеток.

· Вырабатывают основной фактор патогенности – холерный экзотоксин (холероген).

3. Механизм действия холерогена:

· Субъединица В токсина связывается с рецепторами на поверхности энтероцитов.

· Субъединица А проникает в клетку и активирует фермент аденилатциклазу.

· Это приводит к резкому повышению уровня цАМФ внутри клетки.

· Нарушается работа ионных каналов: происходит массивная секреция ионов натрия, хлора и воды в просвет кишечника при одновременном блокировании их обратного всасывания.

· Развивается профузная секреторная диарея.

4. Действие других токсинов:

· Мембранотоксин: Повышает проницаемость мембран энтероцитов и капилляров, способствуя выходу электролитов и воды из крови в кишечник.

· Эндотоксин (ЛПС): Вызывает сокращение гладкой мускулатуры (желудка, илеоцекального клапана), что приводит к обильной рвоте.

5. Клинические последствия (ведущее звено патогенеза):

· Массивная потеря жидкости и электролитов (калий, натрий, бикарбонаты) с диареей и рвотой.

· Развитие обезвоживания (эксикоза) различной степени тяжести.

· Сгущение крови, гиповолемия, нарушение микроциркуляции.

· Развитие гиповолемического шока, метаболического ацидоза и почечной недостаточности.

· Без лечения – летальный исход.

ЛЕЧЕНИЕ ХОЛЕРЫ

1. Патогенетическая терапия (ОСНОВНОЙ и СРОЧНЫЙ метод):

· Регидратация: Восполнение потерь жидкости и электролитов.

· Пероральная регидратация (при легких и среднетяжелых формах) с использованием глюкозо-солевых растворов (например, «Регидрон»).

· Внутривенная регидратация (при тяжелых формах и шоке) – проводят введением полиионных растворов (например, «Трисоль», «Квартасоль», «Ацесоль») в большом объеме, часто струйно.

2. Этиотропная терапия (вспомогательный метод):

· Антибиотики: Назначаются для сокращения длительности диареи и вибрионовыделения.

· Препараты выбора: тетрациклин, доксициклин.

· Альтернативные: фторхинолоны (ципрофлоксацин), макролиды (азитромицин).

· Бактериофаги: Специфические холерные бактериофаги.

· Пробиотики: Для восстановления нормальной микрофлоры кишечника.

20. Микробиологическая диагностика холеры. Специфическая профилактика

СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА

1. Высокоочищенная холерная вакцина (WC/rBS)

· Тип: Моновалентная убитая цельноклеточная жидкая вакцина.

· Состав:

· Создана на основе убитых вибрионов серогруппы O1 серотипов Огава (штамм 569В) и Инаба классического и Эль-Тор биоваров.

· Содержит очищенную рекомбинантную В-субъединицу холерного экзотоксина.

· Схема вакцинации:

· Вакцинация двукратная.

· Для детей в возрасте 2-6 лет – трехкратная.

· Ревакцинация:

· Проводится каждые 2 года.

· Для детей в возрасте 2-5 лет – каждые 6 месяцев.

2. Вакцина холерная инактивированная бивалентная химическая таблетированная (Россия, 1992 г.)

· Тип: Бивалентная химическая таблетированная вакцина.

· Состав:

· Представляет собой смесь холероген-анатоксина с О-антигеном.

· Получена из штаммов серогруппы O1 классического биовара: штаммов 569В или КМ-76 (серотип Инаба) и М-41 (серотип Огава).

· Схема вакцинации:

· Вакцинация однократная (разрешена с 2 лет).

· В зависимости от возраста принимается 1-3 таблетки с кишечнорастворимой оболочкой.

· Ревакцинация:

· Проводится каждые 8 месяцев.

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ХОЛЕРЫ

1 этап: Посев материала

· Материал: испражнения, рвотные массы, вода, смывы с объектов окружающей среды.

· Среда: 1% щелочная пептонная вода (pH 8.5–9.0) и щелочной агар.

· Метод: Посев материала в среду обогащения (пептонную воду) и параллельно на плотные среды (ТЦБС – тиосульфат-цитрат-бромтимоловый-сахарозный агар).

2 этап: Выделение подозрительных колоний

· Учет результатов:

· На пептонной воде через 6–8 часов образуется нежная голубоватая пленка.

· На среде ТЦБС холерный вибрион образует крупные желтые колонии (ферментирует сахарозу).

· Метод: Проводится высев с пептонной воды на плотные питательные среды (ТЦБС, щелочной агар) для получения изолированных колоний.

3 этап: Идентификация выделенной культуры

А) Учет результатов на плотных средах:

· На среде ТЦБС выросли крупные колонии желтого цвета.

Б) Микроскопия:

· Приготовление мазка из выросших колоний, окраска по Граму.

· Результат: Обнаружены мелкие, изогнутые, грамотрицательные палочки, расположенные хаотично.

В) Реакция агглютинации на стекле:

· Постановка реакции агглютинации на стекле выделенной культуры с холерными сыворотками O1 (Инаба, Огава) и O139.

· Вывод: Произошла агглютинация с сывороткой O1 (Инаба); следовательно, выделенный вибрион принадлежит к серогруппе O1, серотипу Инаба.

Г) Углубленное изучение:

· Посев выделенной культуры на развернутый ряд Гисса и на пептонную воду для изучения ферментативных свойств.

· Посев на скошенный МПА для получения чистой культуры.

4 этап: Изучение биохимических свойств

А) Учет результатов на ряду Гисса:

· Глюкоза: + (кислота)

· Лактоза: –

· Сахароза: + (кислота)

· Маннит: + (кислота)

· Арабиноза: –

· Образование сероводорода: –

· Разжижение желатина: + (воронкообразное)

· Вывод: по биохимическим свойствам соответствует Vibrio cholerae (I группа по Хейбергу: манноза +, сахароза +, арабиноза –).

Б) Окончательная идентификация:

· Постановка реакции агглютинации на стекле чистой культуры с моновалентными холерными сыворотками Огава и Инаба.

· Результат: Положительная реакция агглютинации с сывороткой Инаба.

Заключение

На основании проведенных исследований из испражнений больного выделена чистая культура микроорганизма, которая по изученным свойствам:

· Морфологическим и тинкториальным: Мелкие, изогнутые, грамотрицательные палочки, подвижные (имеют один полярный жгутик).

· Культуральным:

· Образует нежную пленку на 1% щелочной пептонной воде.

· На среде ТЦБС образует желтые колонии.

· Биохимическим:

· Ферментирует глюкозу, сахарозу, маннит с образованием кислоты (без газа).

· Не ферментирует лактозу и арабинозу.

· Разжижает желатин по типу воронки.

· Антигенным: Положительная реакция агглютинации с поливалентной O1 и моновалентной Инаба холерными сыворотками.

Вывод: выделена чистая культура Vibrio cholerae серогруппы O1, серотипа Инаба, являющаяся возбудителем холеры у данного пациента.

21. Условно-патогенные микроорганизмы как причина госпитальных инфекций. Значение в детской патологии

Госпитальные (нозокомиальные) инфекции — инфекции, связанные с оказанием медицинской помощи (ИСМП). УПМ, в норме безопасные, вызывают заболевания в условиях стационара.

2. Основные возбудители

· Бактерии: Эшерихии (E. coli), Протей (Proteus), Клебсиеллы, Синегнойная палочка, Энтерококки, Стафилококки (S. aureus, S. epidermidis), Клостридии (C. perfringens), Бациллы (B. cereus).

· Грибы: Кандиды (Candida spp.).

3. Особенности госпитальных штаммов

· Множественная устойчивость к антибиотикам.

· Устойчивость к дезинфектантам.

· Устойчивость во внешней среде.

· Способность к образованию биопленок.

4. Факторы риска у детей

· Незрелость иммунной системы.

· Длительная госпитализация (особенно в ОРИТ).

· Инвазивные процедуры (ИВЛ, катетеры).

· Дисбиоз после антибиотикотерапии.

· Искусственное вскармливание.

5. Значение в детской патологии

· Новорожденные и дети до 1 года — группа наибольшего риска.

· Эшерихии (E. coli): кишечные инфекции (ЭПКП), инфекции мочевыводящих путей, сепсис, менингит.

· Протей (Proteus): пищевые токсикоинфекции, гнойно-воспалительные процессы.

· Синегнойная палочка: инфекции у детей с ожогами, муковисцидозом.

· Стафилококки: сепсис и катетер-ассоциированные инфекции у новорожденных (S. epidermidis), пневмонии, инфекции мягких тканей (S. aureus).

· Кандиды: системные кандидозы на фоне иммуносупрессии.

22. Возбудители пищевых токсикоинфекций

Пищевые токсикоинфекции (ПТИ) — это острые, неконтагиозные заболевания, возникающие при употреблении пищи, массивно обсемененной условно-патогенными микроорганизмами (УПМ) и их токсинами.

Основные возбудители ПТИ:

1. Условно-патогенные бактерии семейств:

· Enterobacteriaceae:

· Энтеропатогенные серотипы Escherichia coli (ЭПКП).

· Бактерии рода Proteus (P. vulgaris, P. mirabilis).

· Другие: Citrobacter, Hafnia, Klebsiella, Edwardsiella, Serratia.

· Vibrionaceae: · Vibrio parahaemolyticus. · V. vulnificus.

· Pseudomonadaceae: · Pseudomonas, Aeromonas.

2. Спорообразующие бактерии:

· Аэробы: Bacillus cereus.

· Анаэробы: Clostridium perfringens (тип A).

Патогенез и диагностика:

· Заболевание развивается при поступлении в ЖКТ большого количества живых клеток возбудителя (более 10⁵–10⁸ в 1 г/мл пищи), которые разрушаются, выделяя эндотоксин.

· Основной метод диагностики — бактериологический, с обязательным количественным учетом возбудителя (более 10⁵ кл/г в испражнениях).

23. Возбудители пищевых интоксикаций

Пищевые интоксикации (токсикозы) — это острые заболевания, возникающие при употреблении пищи, содержащей готовые токсины (экзотоксины), которые накопились в результате развития в продукте специфических возбудителей.

Ключевая характеристика: При интоксикациях сам возбудитель не участвует в патогенезе болезни. Заболевание вызывает только токсин, потребленный с пищей.

1. Бактериальные токсикозы

а) Ботулизм

· Возбудитель: Clostridium botulinum.

· Токсин: Ботулотоксин (нейротоксин, блокирует нервно-мышечную передачу).

· Характеристика возбудителя: Грамположительная палочка, строгий анаэроб, образует споры.

· Условия возникновения: Накопление токсина происходит в анаэробных условиях (консервы домашнего приготовления – мясные, рыбные, овощные, грибные).

· Клиника: Поражение черепных нервов, прогрессирующая мышечная слабость, птоз, паралич мышц глотки, гортани и дыхательной мускулатуры.

· Устойчивость: Споры высокоустойчивы. Токсин термолабилен (разрушается при кипячении 20 мин).

б) Стафилококковый токсикоз

· Возбудитель: Энтеротоксигенные штаммы Staphylococcus aureus.

· Токсин: Стафилококковый энтеротоксин (несколько антигенных типов: A, B, C и др.).

· Характеристика возбудителя: Грамположительные кокки.

· Условия возникновения: Продукция токсина происходит в продуктах при температуре 28-37°C. Благоприятные среды: молоко, кондитерские изделия с кремом, мясные блюда.

· Клиника: Короткий инкубационный период (1-6 ч), тошнота, рвота, боли в эпигастрии.

· Устойчивость: Токсин чрезвычайно устойчив к кипячению (до 2 часов), кислотам, щелочам, замораживанию.

2. Микотоксикозы

Это хронические или острые интоксикации, вызываемые микотоксинами – токсинами микроскопических грибов.

а) Эрготизм

· Возбудитель: Гриб Claviceps purpurea (спорынья).

· Токсин: Алкалоиды спорыньи (нейротоксическое действие).

· Источник: Злаковые культуры (чаще рожь), пораженные «рожками» спорыньи.

· Клиника: Поражение ЦНС (судороги, психические расстройства) или нарушение кровообращения (гангрена).

б) Афлатоксикозы

· Возбудитель: Грибы родов Aspergillus (A. flavus, A. parasiticus) и Penicillium.

· Токсин: Афлатоксины (B₁, B₂, G₁, G₂ и др.).

· Источник: Зерновые, кукуруза, арахис, орехи, специи.

· Клиника: Поражение печени (некроз, цирроз, первичный рак печени).

· Устойчивость: Афлатоксины не разрушаются при термической обработке.

в) Фузариотоксикозы

· Возбудитель: Грибы рода Fusarium (например, F. graminearum).

· Токсин: Трихотеценовые микотоксины и другие.

· Источник: Зерно, пораженное грибком («пьяный хлеб»).

· Клиника: Поражение ЦНС (головокружение, рвота, нарушение координации).

24. Морфобиологические свойства патогенных иерсиний (псевдотуберкулёз, кишечный иерсиниоз)

1. Морфологические свойства

· Форма: Грамотрицательные палочки.

· Полиморфизм: Часто овоидные (бочонковидные).

· Подвижность: Подвижны (перитрихи). Важно: Подвижность проявляется при температуре культивирования ниже 30°C.

· Споры: Не образуют.

· Капсула: Некоторые штаммы продуцируют слизистое вещество (подобие капсулы).

3. Культуральные свойства

· Тип дыхания: Факультативные анаэробы.

· Температурный оптимум: 22–28°C.

· Психрофильность: Способны размножаться в широком диапазоне температур от 2 до 40°C. Могут длительно сохраняться и размножаться на пищевых продуктах в холодильнике при 4–6°C.

· Питательные среды: Неприхотливы. Могут расти на "голодных" средах (фосфатно-буферный раствор).

· Используются среды: Эндо, Серова, CIN-агар, МакКонки, "Иерсиния-агар" (содержит агар, желчь, D-глюкозу, мочевину, бромтимоловый синий, бриллиантовый зеленый).

· Характер роста: Образуют R- (шероховатые), RS- (переходные) и S-формы (сероватые слизисто-гладкие) колоний.

4. Биохимические свойства

· Ферментация углеводов:

· Y. pseudotuberculosis: Лактоза (-), Глюкоза (+), Сахароза (-), Рамноза (+).

· Y. enterocolitica: Лактоза (-), Глюкоза (+), Сахароза (+), Рамноза (-).

· Гидролиз мочевины: Уреаза "+" у обоих видов.

· Чувствительность к бактериофагу: Y. pseudotuberculosis чувствителен к псевдотуберкулёзному бактериофагу, Y. enterocolitica – нечувствителен.

5. Антигенные свойства

· Имеют О-соматический и Н-жгутиковый антигены, а также антигены вирулентности V-W.

· Y. pseudotuberculosis по О-антигену подразделяется на 8 сероваров (90% случаев у человека вызывает серовар I).

25. Особенности патогенеза и клинические формы псевдотуберкулёза

Патогенез псевдотуберкулёза (стадии)

1. Внедрение через рот. Возбудитель (Yersinia pseudotuberculosis) попадает в организм алиментарным путем с зараженными продуктами (овощи, молоко, сухофрукты) или водой.

2. Адгезия, колонизация, инвазия и размножение. Бактерии адсорбируются и проникают в энтероциты тонкого кишечника, а также в его лимфоидный аппарат (пейеровы бляшки) и регионарные лимфатические узлы.

3. Развитие острой симптоматики. Происходит развитие энтерита, мезентериального лимфаденита и общей интоксикации.

4. Бактериемия и поражение внутренних органов. Возбудитель прорывается в кровь (бактериемия) и гематогенным путем распространяется по организму, поражая различные органы: печень (с развитием гепатита и желтухи), суставы (артриты), а также может вызывать поражение почек, легких и мозговых оболочек.

5. Иммунный ответ и исход. Активация иммунной системы может привести к выздоровлению. При недостаточности иммунитета возможна генерализация инфекции или развитие хронических аутоиммунных процессов.

Клинические формы и симптомы псевдотуберкулёза

Инкубационный период: от 3 до 18 дней (в среднем около 10 дней).

Общие симптомы:

· Озноб, лихорадка.

· Головная боль, недомогание, бессонница.

· Боли в мышцах и суставах.

· Першение в горле, кашель.

· Тошнота, рвота, боли в животе различной локализации, диарея.

Специфические симптомы и синдромы ("маски" болезни):

1. Скарлатиноподобная форма:

· Ярко-красная точечная сыпь на нормальном или субъиктеричном фоне кожи, появляющаяся на 1-6-й день болезни.

· Сохраняется от нескольких часов до 8 дней и исчезает бесследно.

2. Симптом "капюшона": Одутловатость и гиперемия (покраснение) лица и шеи.

3. Симптом "перчаток" и "носков": Ограниченная гиперемия и отечность кистей и стоп.

4. Симптом "малинового" языка: В первые дни язык обложен белым налетом, затем налет сходит, и язык становится ярко-красным, "зернистым".

5. Желтушная форма: · Боли в правем подреберье. · Увеличение и болезненность печени. · Желтушное окрашивание кожи и склер, потемнение мочи.

26. Микробиологическая диагностика псевдотуберкулёза

Микробиологическая диагностика сальмонеллёза

1 ЭТАП

Посев материала на плотные питательные среды.

· Исследуемый материал:

· Фекалии, рвотные массы

· Пищевые продукты (при подозрении на пищевое заражение)

· Кровь (при генерализованной форме – гемокультура)

· Моча, желчь (в зависимости от стадии заболевания)

· Цель: Получение изолированных колоний для дальнейшего изучения.

· Методика: Посев материала проводят на селективно-дифференциальные среды, такие как среда Эндо, Плоскирева, висмут-сульфитный агар (БСА) или среда МакКонки. На этих средах сальмонеллы, не ферментирующие лактозу, растут в виде бесцветных колоний (на среде Эндо), что позволяет отличить их от лактозопозитивных бактерий, таких как E. coli.

2 ЭТАП

· А) Описание культуральных свойств: На средах Эндо и Плоскирева выросли мелкие, прозрачные, бесцветные колонии (лактозонегативные).

· Б) Приготовление мазков: Из подозрительных лактозонегативных колоний готовят мазки, окрашивают по Граму. Под микроскопом видны мелкие, хаотично расположенные грамотрицательные палочки.

· В) Посев на дифференциальные среды: Лактозонегативную колонию пересевают на трёхсахарный агар Олькеницкого (или Крумвиде-Олькеницкого) уколом в столбик и штрихом по скошенной поверхности, а также в среду для определения подвижности (полужидкий агар) или пептонную воду для постановки биохимических проб (индол, уреаза).

· Г) Реакция агглютинации на стекле: Проводят ориентировочную реакцию агглютинации на стекле с поливалентной сальмонеллёзной О-сывороткой. Положительная реакция (агглютинация) указывает на возможную принадлежность выделенной культуры к роду Salmonella.

3 ЭТАП

· А) Учет изменений на трёхсахарном агаре и биохимических проб:

· Трёхсахарный агар: Происходит изменение цвета скошенной части (красный ➔ желтый) за счет ферментации глюкозы до кислоты. Столбик среды также желтеет, часто наблюдается образование газа (пузырь или разрыв среды). Среда в столбике чернеет из-за образования сероводорода (H₂S). Лактоза и сахароза не ферментируются (цвет не меняется на малиново-красный).

· Пептонная вода / другие пробы: Проба на индол – отрицательная. Проба на уреазу – отрицательная.

· Вывод: по ферментативным свойствам культура соответствует роду Salmonella.

· Б) Серологическая идентификация: Ставят развернутую реакцию агглютинации в пробирках с монорецепторными О- и Н-сальмонеллёзными сыворотками для определения серологической группы (по схеме Кауфмана-Уайта) и серовара возбудителя.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ:

Из фекалий пациента выделена чистая культура, которая на основании изученных свойств:

· Морфологических и тинкториальных: Мелкие грамотрицательные палочки.

· Культуральных: Рост в виде лактозонегативных (бесцветных) колоний на средах Эндо и Плоскирева.

· Биохимических: Ферментация глюкозы с образованием кислоты и газа; образование H₂S на трёхсахарном агаре; отрицательные пробы на индол и уреазу.

· Антигенных: Положительная реакция агглютинации с поливалентной сальмонеллёзной О-сывороткой и последующая идентификация с монорецепторными сыворотками.

Вывод: выделена чистая культура Salmonella enterica серовар [например, Enteritidis или Typhimurium], что является этиологическим подтверждением диагноза «сальмонеллёз».

27. Микробиологическая диагностика возбудителей иерсиниозов

1 ЭТАП: Посев материала на питательные среды и ПЦР-диагностика

· Исследуемый материал:

· Фекалии (основной материал)

· При генерализованной форме – кровь, моча, спинномозговая жидкость

· Резецированные лимфатические узлы (при операции)

· Пищевые продукты (при подозрении на пищевое заражение)

· Цель: Выделение возбудителя и/или обнаружение его ДНК.

· Методика:

1. Бактериологический метод. Для повышения вероятности выделения возбудителя исследуемый материал (фекалии) перед посевом обрабатывают 1% раствором КОН в течение 2-3 минут для подавления сопутствующей микрофлоры. Посев проводят на селективные и дифференциально-диагностические среды:

· Среда Серова: Жидкая среда обогащения (пептонная вода с добавками).

· «Иерсиния-агар» (Обухов): Содержит агар, желчь, мочевину, бромтимоловый синий.

· Среды Эндо, МакКонки: Иерсинии растут в виде мелких (1-2 мм) лактозонегативных колоний.

Чашки инкубируют при 25-28°C в течение 24-48 часов, учитывая психрофильные свойства иерсиний.

2 ЭТАП: Изучение и идентификация подозрительных колоний

· А) Описание культуральных свойств: На CIN-агаре – колонии с малиновым центром и прозрачным краем («бычий глаз»). На средах Эндо/МакКонки – мелкие, прозрачные, лактозонегативные колонии.

· Б) Приготовление мазков: Из подозрительных колоний готовят мазки, окрашивают по Граму. Под микроскопом видны мелкие, овоидные (часто коккобациллы), грамотрицательные палочки.

· В) Изучение биохимической активности: Проводят посев чистой культуры для определения ключевых ферментов:

· Уреаза: Положительная реакция (+++) для Y. enterocolitica.

· Ферментация углеводов: Y. enterocolitica ферментирует глюкозу и сахарозу, но не ферментирует рамнозу.

· Г) Определение подвижности: При культивировании при температуре 20-25°C иерсинии подвижны (перитрихи), при 37°C – неподвижны.

3 ЭТАП: Окончательная идентификация и серодиагностика

· А) Учет биохимических тестов: Комплекс признаков (положительная уреаза, ферментация сахарозы, отсутствие ферментации рамнозы, подвижность при 25°C) подтверждает принадлежность к Y. enterocolitica.

· Б) Серологическая идентификация: Постановка реакции агглютинации со специфическими сыворотками для определения серовара (всего известно около 50, наиболее патогенны для человека серовары O:3 и O:9).

· В) Серодиагностика (основной метод в практике): Постановка РНГА (реакции непрямой гемагглютинации) или РА (реакции агглютинации) с парными сыворотками больного для выявления антител. Диагностическим считается титр антител у взрослых 1:160-1:200 и выше. Используются эритроцитарные диагностикумы кишечно-иерсиниозные O3 и O9.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ:

Из фекалий пациента выделена чистая культура, которая на основании изученных свойств:

· Морфологических и тинкториальных: Мелкие, овоидные, грамотрицательные палочки.

· Культуральных: Рост на CIN-агаре в виде колоний «бычий глаз»; мелкие лактозонегативные колонии на средах Эндо/МакКонки.

· Биохимических: Положительная уреаза; ферментация глюкозы и сахарозы; отсутствие ферментации рамнозы; подвижность при 25°C.

· Антигенных: Положительная реакция агглютинации со специфической сывороткой [например, серовара O:3].

Окончательный вывод: выделена чистая культура Yersinia enterocolitica серовар [O:3/O:9], что в сочетании с положительными результатами серологического исследования (РНГА) является этиологическим подтверждением диагноза «кишечный иерсиниоз».

28. Морфобиологические свойства возбудителей кампилобактериоза и хеликобактериоза. Микробиологическая диагностика заболеваний

Морфобиологические свойства:

1. Кампилобактериоз

· Морфология: Грамотрицательные, извитые (спиралевидные) бактерии, напоминающие «крылья летящей чайки». Очень подвижны благодаря жгутикам. Не образуют спор и капсул.

· Культуральные свойства: Тип дыхания: Строгие микроаэрофилы (оптимальная атмосфера: 5% O₂, 10% CO₂, 85% N₂). Температура роста: Термофильные виды (например, C. jejuni, C. coli) оптимально растут при +42°C. Мезофильные виды (например, C. fetus) — при +37°C.

· Питательные среды: Требовательны к средам. · Железо-эритритный кровяной агар (ЖЭКА) · Кампилобакагар · Кровяной агар

· Характер роста: Колонии могут «растекаться» по поверхности среды, напоминая капли конденсата.

Микробиологическая диагностика кампилобактериоза:

1. Бактериоскопический метод (ориентировочный): Исследование мазков из испражнений для обнаружения характерных извитых, подвижных грамотрицательных палочек.

2. Бактериологический метод (основной):

· Материал: Фекалии.

· Посев на селективные питательные среды (ЖЭКА, Кампилобакагар).

· Инкубация в микроаэрофильных условиях при +42°C.

· Идентификация выросших колоний по морфологии, подвижности и биохимическим тестам.

3. Серодиагностика: Обнаружение специфических антител в сыворотке крови пациента.

4. Экспресс-диагностика (ПЦР): Обнаружение ДНК Campylobacter spp. в кале.

2. Возбудитель хеликобактериоза (Helicobacter pylori)

· Морфология: Грамотрицательные спириллы (извитые палочки). Не образуют спор и капсул. Очень подвижны благодаря пучку жгутиков (лофотрихи). Характерен положительный вискотаксис (способность двигаться в вязкой слизи).

· Культуральные свойства: Тип дыхания: Микроаэрофилы.

· Питательные среды: Очень требовательны. · «Среда 94» · Columbia Agar · Blood Agar Base

· Характер роста: Колонии мелкие, прозрачные, могут продуцировать рубиново-красный пигмент на средах с трифенилтетразолием хлоридом.

· Биохимические свойства:

· Обладает высокой уреазной активностью (гидролизует мочевину с образованием аммиака).

· Продуцирует каталазу, супероксиддисмутазу, алкогольдегидрогеназу.

Микробиологическая диагностика хеликобактериоза:

Методы диагностики делятся на инвазивные (требующие фиброгастродуоденоскопии - ФГДС) и неинвазивные.

А. Инвазивные методы (требующие ФГДС и биопсии):

1. Гистологическое исследование: Обнаружение бактерий в биоптатах слизистой желудка при микроскопии.

2. Бактериологический метод: Посев биоптата на питательные среды с последующей идентификацией H. pylori (используется редко из-за сложности культивирования).

3. Быстрый уреазный тест: Помещение биоптата в среду с мочевиной и индикатором. Изменение цвета свидетельствует о наличии уреазы и, следовательно, H. pylori.

4. ПЦР: Обнаружение ДНК H. pylori в биоптате.

Б. Неинвазивные методы:

1. Дыхательный уреазный тест: Прием пациентом меченой мочевины. Выдыхаемый меченый CO₂ указывает на активность уреазы H. pylori в желудке.

2. Серодиагностика (ИФА): Обнаружение специфических антител (IgG) к H. pylori в сыворотке крови. Показывает инфицированность, но не отличает текущую инфекцию от перенесенной.

3. Идентификация антигена в кале: Обнаружение антигенов H. pylori в испражнениях с помощью ИФА.

29. Морфологические свойства возбудителей зоонозных инфекций (сибирская язва, чума, туляремия, бруцеллёз)

1. Возбудитель сибирской язвы (Bacillus anthracis)

· Форма: Крупная грамположительная палочка.

· Расположение: В мазках из культур располагаются длинными цепочками, концы клеток обрублены, напоминают «бамбуковую трость».

· Капсула: Образует хорошо выраженную капсулу в организме человека и животных.

· Споры: Образует споры во внешней среде, которые чрезвычайно устойчивы.

· Подвижность: Неподвижна.

2. Возбудитель чумы (Yersinia pestis)

· Форма: Мелкая грамотрицательная палочка овоидной (овальной) формы, склонна к полиморфизму.

· Расположение: Характерно биполярное окрашивание (при окраске метиленовым синим концы клетки окрашиваются интенсивнее, чем центр).

· Капсула: Образует капсулу при температуре 37°C (в организме).

· Споры и жгутики: Не образует спор. Неподвижна.

3. Возбудитель туляремии (Francisella tularensis)

· Форма: Очень мелкая грамотрицательная палочка или коккобацилла.

· Полиморфизм: Характерен выраженный полиморфизм.

· Капсула: Может образовывать капсулу в организме.

· Споры и жгутики: Не образует спор. Неподвижна.

4. Возбудитель бруцеллёза (Brucella spp.)

· Форма: Мелкие грамотрицательные коккобациллы (очень короткие палочки), шаровидной или овоидной формы.

· Капсула: Может образовывать капсулу в организме человека в присутствии иммунной сыворотки.

· Споры и жгутики: Не образует спор. Неподвижны.

30. Микробиологическая диагностика и специфическая профилактика сибирской язвы

Диагностика:

1. Бактериоскопия: Обнаружение в материале (содержимое пустулы, кровь, мокрота) крупных грамположительных палочек с капсулой, расположенных цепочками.

2. Бактериологический метод: Посев на питательные среды (МПА, МПБ). Характерный рост: на МПБ - осадок в виде «комка ваты», на МПА - колонии «головы медузы» («львиная грива»).

3. Биологическая проба: Заражение лабораторных животных (мыши, морские свинки).

4. Реакция Асколи (термопреципитации): Экспресс-метод для обнаружения специфического антигена в любом материале, даже разложившемся.

5. ИФА, ПЦР.

Профилактика:

1. Вакцина сибиреязвенная живая сухая (СТИ)

· 1) Назначение: Профилактическое. Для плановой и экстренной профилактики сибирской язвы у людей из групп риска.

· 2) Что представляет: Лиофилизированная взвесь живых спор вакцинного штамма Bacillus anthracis СТИ, лишенного фактора вирулентности, но сохранившего иммуногенные свойства.

· 3) Как получен: Вакцинный штамм культивируют на жидкой питательной среде. Полученную споровую массу отмывают, стандартизируют по концентрации спор, суспендируют в стабилизирующем растворе и лиофилизируют.

2. Противосибиреязвенный иммуноглобулин

· 1) Назначение: Лечебное и для экстренной профилактики. Применяется в комплексе терапии для нейтрализации токсина.

· 2) Что представляет: Препарат сыворотки крови гипериммунизированных животных (часто лошадей), содержащий готовые антитела против возбудителя сибирской язвы и его токсина.

· 3) Как получен: Животных иммунизируют вакцинными штаммами и анатоксином. Из полученной гипериммунной сыворотки выделяют и очищают иммуноглобулиновую фракцию.

31. Микробиологическая диагностика и специфическая профилактика чумы

Диагностика:

1. Экспресс-методы:

· Микроскопия: Обнаружение в материале (пунктат бубона, мокрота, кровь) овоидных грамотрицательных палочек с биполярным окрашиванием.

· ПЦР, ИФА, РИФ.

2. Бактериологический метод: Выделение чистой культуры на специальных средах (среда Хоттингера, кровяной агар). Колонии через 48 часов похожи на «кружевные платочки».

3. Биологический метод: Заражение лабораторных животных.

Специфическая профилактика:

1. Вакцина чумная живая (штамм EV)

· 1) Назначение: Профилактическое. Для иммунизации лиц, проживающих в эндемичных очагах, или работающих с живыми культурами возбудителя.

· 2) Что представляет: Лиофилизированная взвесь живых бактерий аттенуированного (ослабленного) вакцинного штамма Yersinia pestis EV.

· 3) Как получен: Штамм EV культивируют на питательном агаре. Бактериальную массу смывают, стандартизируют по оптической мутности, суспендируют в стабилизаторе и лиофилизируют.

32. Микробиологическая диагностика и специфическая профилактика туляремии

Диагностика:

1. Серодиагностика (основной метод): РА, РНГА, ИФА. Выявление антител в парных сыворотках.

2. Аллергологический метод: Внутрикожная проба с тулярином. Учет через 24-48 часов.

3. Бактериологический метод: Выделение возбудителя затруднено (требователен к средам, медленный рост).

4. Биологический метод: Заражение белых мышей или морских свинок (высокочувствителен).

5. ПЦР.

Специфическая профилактика:

1. Вакцина туляремийная живая (штамм 15 НИИЭГ)

· 1) Назначение: Профилактическое. Для иммунизации населения в очагах туляремии и лиц из групп риска.

· 2) Что представляет: Лиофилизированная взвесь живых бактерий аттенуированного вакцинного штамма Francisella tularensis № 15.

· 3) Как получен: Вакцинный штамм культивируют на плотной питательной среде. Бактериальную массу смывают, стандартизируют, суспендируют в стабилизирующей среде и лиофилизируют.

2. Тулярин (аллерген)

· 1) Назначение: Диагностическое. Применяется для постановки внутрикожной аллергической пробы с целью диагностики туляремии и оценки напряженности иммунитета.

· 2) Что представляет: Взвесь убитых нагреванием туляремийных микробов вакцинного штамма в физиологическом растворе.

· 3) Как получен: Культуру вакцинного штамма инактивируют нагреванием, отмывают, стандартизируют и суспендируют в изотоническом растворе хлорида натрия.

33. Микробиологическая диагностика и специфическая профилактика бруцеллёза

Диагностика:

1. Серодиагностика (основной метод):

· Реакция Райта (пробирочная агглютинация).

· Реакция Хеддльсона (ускоренная агглютинация на стекле).

· ИФА.

2. Аллергологический метод: Внутрикожная проба Бюрне с бруцеллином. Учет через 24-48 часов.

3. Бактериологический метод: Выделение возбудителя (кровь, пунктат лимфоузла) длительное и сложное.

4. ПЦР.

Специфическая профилактика:

1. Вакцина бруцеллёзная живая сухая (штамм 19-BA)

· 1) Назначение: Профилактическое. Для иммунизации лиц, работающих с живыми культурами или в очагах козье-овечьего типа бруцеллёза.

· 2) Что представляет: Лиофилизированная культура живых бактерий аттенуированного вакцинного штамма Brucella abortus 19-BA.

· 3) Как получен: Штамм культивируют на печеночном агаре. Бактериальную массу смывают, стандартизируют, суспендируют в сахарозо-желатиновой среде и лиофилизируют.

2. Бруцеллин (аллерген)

· 1) Назначение: Диагностическое. Применяется для постановки внутрикожной аллергической пробы Бюрне.

· 2) Что представляет: Белково-полисахаридный комплекс, полученный из вакцинного штамма Brucella abortus путем химической обработки и очистки.

· 3) Как получен: Культуру бруцелл обрабатывают трихлоруксусной кислотой или другими методами для экстракции и очистки специфических аллергенных фракций, которые затем диализуют и стандартизируют.

3. Бруцеллёзный диагностикум

· 1) Назначение: Диагностическое. Применяется для постановки реакции агглютинации (РА) на стекле (реакция Хеддльсона) и в пробирках (реакция Райта).

· 2) Что представляет: Взвесь убитых фенолом или нагреванием бруцелл трех основных видов (B. melitensis, B. abortus, B. suis) в физиологическом растворе.

· 3) Как получен: Культуры бруцелл инактивируют, отмывают, стандартизируют по оптической мутности и консервируют фенолом.