Extracción de ácidos nucleicos: recomendaciones, ARNasas y etapas del proceso

Resumen

El documento recoge recomendaciones generales para trabajar con ácidos nucleicos en el laboratorio, como el uso de guantes, el mantenimiento en hielo y la prevención de contaminaciones. Explica por qué el ARN es más difícil de manejar que el ADN debido a las ARNasas, compara las características de ambas moléculas y resume las etapas básicas de un procedimiento general de extracción.

Puntos clave

Hay que usar siempre guantes y mantener en hielo las muestras, las enzimas y los tampones que contengan enzimas, salvo que contengan detergentes o se indique otra temperatura.
Las mezclas demasiado vigorosas (vortex o pipeta) pueden romper las cadenas largas de ADN genómico.
Es más difícil trabajar con ARN que con ADN por su inestabilidad y por la abundancia de ARNasas muy estables.
Las ARNasas no requieren cofactores ni cationes divalentes y no se degradan a 100 °C, por lo que se trabaja con agua libre de ARNasas tratada con DEPC.
El protocolo de extracción depende del tipo de ácido nucleico, de su matriz o procedencia y del uso final previsto.
Las etapas generales son: pulverizado, adición de tampón de extracción, incubación con agitación, centrifugación (desproteinización) y recuperación del ácido nucleico.

Ponte a prueba

Extracción de ácidos nucleicos: recomendaciones y consideraciones

1. ¿Qué recomendaciones generales hay que tener en cuenta en la extracción de ácidos nucleicos?

Respuesta:

Usar siempre guantes.
Mantener en hielo las muestras, las enzimas y las soluciones tampón (buffers) que contengan enzimas, a no ser que contengan detergentes o que se especifique una temperatura determinada.
Las cadenas largas de ADN genómico se pueden romper por fricción mecánica. Para evitarlo, no hacer mezclas demasiado vigorosas (con vortex o con la pipeta).
Prevenir al máximo posibles contaminantes. Si la muestra se ha contaminado en un paso, los siguientes pasos pueden verse afectados y, en el peor de los casos, se puede perder el ADN de una muestra. Para evitarlo, es prudente ser consciente de las diferencias entre las muestras y no usar los mismos utensilios para muestras diferentes.

2. ¿Qué son las ARNasas?

Respuesta:

Es más difícil trabajar con ARN que con ADN debido, principalmente, a su inestabilidad. Lo complica aún más la gran abundancia de ARNasas altamente estables que degradan rápidamente el ARN.

Las ARNasas, además de estar en todas partes, no requieren cofactores ni cationes divalentes y no son degradadas a temperaturas de 100 °C. Por tal motivo, debe trabajarse en condiciones de máxima asepsia y tratar los reactivos y materiales de trabajo con agua libre de ARNasas (mediante tratamiento con dietil pirocarbonato, DEPC).

3. Diferencias entre ADN y ARN que hay que considerar en una extracción de ácidos nucleicos

Comparativa:

ADN	ARN
Molécula cargada negativamente. Hay un gran número de electrones alrededor de los numerosos átomos de oxígeno. Molécula bastante robusta, tal vez la más fácil de trabajar. No presenta tantos problemas de degradación.	Molécula bastante similar al ADN. Es más flexible químicamente y de tamaño más corto.

4. ¿De qué depende el protocolo a utilizar en la extracción de ácidos nucleicos?

El protocolo a utilizar va a depender, primero, del tipo de ácido nucleico, de su matriz o procedencia, o incluso del uso al que se va a destinar.

5. ¿Cuáles son las etapas de un procedimiento general de extracción de ácidos nucleicos?

Pulverizado
Adición de buffer de extracción
Incubación con agitación
Centrifugación (desproteinización)
Recuperación del ácido nucleico

Preguntas frecuentes

¿Por qué es más difícil trabajar con ARN que con ADN?

Principalmente por la inestabilidad del ARN y por la gran abundancia de ARNasas altamente estables que lo degradan rápidamente. Por eso hay que trabajar en condiciones de máxima asepsia.

¿Cómo se evita la degradación del ARN por ARNasas?

Hay que trabajar en condiciones de máxima asepsia y tratar los reactivos y materiales con agua libre de ARNasas, mediante tratamiento con dietil pirocarbonato (DEPC).

¿Qué etapas tiene un procedimiento general de extracción de ácidos nucleicos?

Pulverizado de la muestra, adición de tampón de extracción, incubación con agitación, centrifugación para la desproteinización y recuperación del ácido nucleico.