Identificación de Bacterias Patógenas en Nasofaringe: Pruebas de Laboratorio y Sensibilidad Antibiótica

Nasofaringe: hábitat de bacterias y virus patógenos

El análisis microbiológico de la nasofaringe incluye el examen directo de la muestra al microscopio, el cultivo, la caracterización fisiotaxonómica (bacteriológica y química) y las pruebas de sensibilidad antimicrobiana.

La muestra teñida con Gram aporta información sobre su contenido. Los cultivos permiten observar la morfología de las colonias, que se complementa con las pruebas C y D.

Fisiotaxonomía bacteriana

La fisiotaxonomía bacteriana estudia el comportamiento de las bacterias vivas a través de alteraciones tecnológicas de indentificación bioquímica, definiendo géneros y especies mediante:

• Fermentación de carbohidratos: glucosa, lactosa, sacarosa, manitol, sorbitol y citrato (-).
• Productos finales: indol, CO2, H2S y acetilmetilcarbinol (-).
• Enzimas: catalasa, ureasa, ixi y coagulasa (-/+).
• Sensibilidad: bacitracina, optoquina y novobiocina (+).

Grampositivos: Micrococcaceae y Staphylococcus

Los Gram positivos importantes incluyen a los miembros de la familia Micrococcaceae: cocos Gram positivos, esféricos, en racimos, catalasa positivos, halotolerantes.

Aislamiento de S. aureus

• Agar sangre enriquecido: se observa la hemólisis por lisis. S. aureus produce halos de hemólisis rojos (alfa toxina). S. epidermidis no presenta hemólisis; Micrococcus tampoco.
• Agar manitol salado (select): el pH vira al rojo en Micrococcus y Staphylococcus halotolerantes. La fermentación del manitol se observa por color amarillo: S. aureus produce colonias amarillas. Micrococcus y S. epidermidis no fermentan el manitol.

En ambos medios debe confirmarse con tinción de Gram. Cuando se sabe que es Gram positivo se realiza una prueba bioquímica; si se sospecha Staphylococcus, se realiza la prueba de coagulasa.

Prueba de coagulasa

Es una prueba de patogenicidad. Con la técnica en tubo, se incuba plasma de conejo con gotas del cultivo de Staphylococcus; la aparición de coagulación positiva ocurre en 4 horas (coagulasa libre). Con la técnica en portaobjeto, sobre una gota de agua se coloca una suspensión del cultivo y una gota de plasma de conejo; es positiva si en 20 segundos hay aglutinación (coagulasa unida a membrana).

Streptococcus

Streptococcus son cocos Gram positivos, en cadenas, catalasa negativos. Según su actividad hemolítica: beta (halos limpios), alfa (halos incompletos verdes) y gamma (no produce hemólisis).

• La constitución antigénica de la pared celular permite la clasificación de Lancefield, según la composición química y antigénica de los hidratos de carbono presentes en la pared.
• Streptococcus pyogenes: produce toxinas y enzimas responsables de su poder patógeno (amigdalofaringitis).
• Streptococcus pneumoniae: causa neumonía lobar. Es un diplococo no esférico cuya virulencia está dada por una cápsula. Presenta alfa hemólisis.
• Enterococcus: habitan en el intestino, no son hemolíticos, crecen en alta salinidad, pH básico y sales biliares.

Aislamiento y características de S. pyogenes

En agar sangre se observa hemólisis clara. Se confirma mediante Gram la presencia de cocos Gram positivos, luego la sensibilidad a bacitracina: Streptococcus beta hemolítico pyogenes es sensible (antibiograma). La serología de pyogenes debe confirmarse mediante reacción con antisueros.

Prueba de bilis esculina NaCl

Los enterococos crecen en NaCl, toleran las sales biliares e hidrolizan la esculina. Si la prueba es positiva, el tubo se torna color chocolate.

Difusión en agar (método cualitativo) y antibiograma

Se basa en la inoculación sobre una placa donde se colocan discos de papel estériles impregnados con una concentración de antibiótico. En un punto, el antibiótico inhibe el crecimiento, formando una zona circular o halo de inhibición.

• Bacitracina: antibiótico que interfiere con la síntesis de peptidoglicano. Se difunde en agar sangre; se coloca un disco, se incuba de 16 a 24 horas y se mide el halo. Sensible: halo > 10 mm. Resistente: halo < 10 mm (Micrococcus, Staphylococcus).
• Optoquina: compuesto químico que pone a prueba la fragilidad de la membrana celular y permite diferenciar Streptococcus pneumoniae, que es sensible. Se utiliza un disco de optoquina en agar sangre, se incuba y se mide el halo: > 14 mm indica S. pneumoniae.
• Novobiocina: antibiótico oral para el tratamiento de infecciones por S. aureus e infecciones urinarias. Es bacteriostático y actúa sobre la síntesis de la pared bacteriana; puede provocar reacciones adversas.

Tratamiento antibiótico según localización

• Amoxicilina + ácido clavulánico: tratamiento a corto plazo de infecciones del tracto respiratorio superior (S. pneumoniae, H. influenzae, M. catarrhalis, S. pyogenes) e inferior (bronquitis crónicas).
• Infecciones abdominales y genitourinarias: cistitis, aborto séptico (E. coli, S. saprophyticus, Enterococcus spp.).
• Infecciones de piel y tejido blando: celulitis (S. aureus, S. pyogenes, Bacteroides spp.).