Recuento de Células Sanguíneas: Materiales y Procedimientos

Fases del Recuento de Células Sanguíneas

Cualquier método de recuento de células sanguíneas abarca cuatro fases:

• Dilución de la sangre.
• Toma de un volumen determinado de sangre diluida.
• Recuento de células en ese volumen.
• Cálculos para determinar el número de células, bien por mm³ o por litro.

Material Necesario para el Recuento en Cámara

Líquido de Dilución

La dilución de la muestra de sangre se hace con un líquido cuya naturaleza varía según el tipo de célula que se vaya a contar. Para el recuento de hematíes se usan líquidos isotónicos para no dañar las células. El diluyente más usado es el líquido de Hayem, que contiene sustancias para destruir los leucocitos y preservar los hematíes. Si no se dispone del líquido de Hayem, se puede usar NaCl al 0,9%. Para el recuento de leucocitos se utilizan líquidos que tiñen ligeramente los núcleos y que hemolizan (rompen) los hematíes. La solución habitual es la de Türk. Y para el recuento de plaquetas se emplea un líquido que impide la agregación plaquetaria y que sea hemolizante.

Pipetas Dilutoras

También llamadas pipetas de Thoma, se utilizan para diluir una pequeña cantidad de sangre y cargar la cámara de recuento con la muestra diluida. Hay dos tipos que se diferencian por su distinta capacidad, según sean para recuento de glóbulos rojos o glóbulos blancos. El diseño de ambas es similar: son de vidrio, tienen un capilar calibrado que se continúa con una dilatación ambular o bulbo, y terminan con otro pequeño capilar por donde se conectan al sistema de aspiración. El volumen que puede contener el bulbo es siempre un múltiplo entero del correspondiente al capilar.

• Pipeta para recuento de hematíes: el bulbo tiene una capacidad 100 veces superior a la del capilar, permitiendo una dilución 1/100.
• Pipeta para recuento de leucocitos: el bulbo tiene una capacidad 10 veces superior a la del capilar, permitiendo una dilución 1/10.

Si se llena la pipeta de sangre hasta la marca 1 del capilar y se completa con líquido de dilución, ambas pipetas llevan un enrase en la mitad del capilar. Este enrase es de 0,5, con lo cual se puede realizar, enrasando en él la muestra de sangre, diluciones al doble de las citadas anteriormente: 1/200 para glóbulos rojos y 1/20 para glóbulos blancos. Las dos pipetas tienen en el interior de la ampolla una perla de vidrio para facilitar la mezcla de sangre con el líquido de dilución. En el caso de la pipeta para eritrocitos, la perla es de color rojo, y en la de leucocitos, de color blanco. Para que las diluciones sean exactas, hay que realizar enrases perfectos al pipetear, tanto de la sangre como del líquido de dilución. Para facilitar esto, se utiliza como accesorio un tubo aspirador para pipetas cuentaglóbulos.

Goma de Aspiración o Sistema de Aspiración

Es un tubo de goma que se conecta a la pipeta por un extremo y por el otro se conecta a una boquilla para facilitar el aspirado. El tubo debe ser lo suficientemente largo para que sea fácil ver las marcas de las pipetas en el momento del aspirado. Después de su uso, las pipetas deben lavarse pasando agua jabonosa o lejía diluida y agua destilada, agitando en cada paso la pipeta. El secado se efectúa con una corriente de aire seco o en la estufa. La ampolla está seca si la perla de vidrio se mueve libremente. Las pipetas automáticas actuales permiten medir de forma exacta un volumen muy pequeño, por lo que pueden sustituir a las pipetas de dilución clásicas.

Cámara Cuentaglóbulos o Hemocitómetro

Existen distintos tipos, todos ellos tienen un diseño similar. Esencialmente, es una lámina de vidrio rectangular y de mayor grosor que un portaobjetos. En el centro de sus caras hay una plataforma en la que está grabado el retículo de recuento. Sobre el retículo se coloca un cubreobjetos, dejando un espacio entre el cubre y la cámara de 0,1 mm de altura. Para ello, la plataforma central tiene a ambos lados dos separaciones con un surco y otras dos plataformas. Las dos plataformas laterales son 0,1 mm más altas que la central, por lo que, al apoyar el cubre sobre ellas, queda sobre el retículo un hueco de 0,1 mm de altura. La cámara cuentaglóbulos puede ser simple o doble. La doble tiene un surco transversal que divide la placa central en dos partes, con un retículo en cada una de ellas. Hay distintos tipos de modelos de retículos de recuento:

• Retículo de Thoma: de diámetro 1 mm².
• Retículo de Bürker: de diámetro 9 mm².
• Retículo de Neubauer: de diámetro 9 mm².