Validación y Verificación de Métodos Analíticos: Fundamentos y Procedimientos

¿Por qué es necesaria la validación analítica?

Propósito

• Generar confianza.
• Obtener métodos reproducibles y confiables.

¿Qué es la Validación de Métodos Analíticos?

Validación

Confirmación mediante el suministro de evidencia objetiva de que se han cumplido los requisitos para la utilización o aplicación específica.

Validación de un procedimiento analítico

Procedimiento para establecer pruebas documentadas que demuestren científicamente que un método analítico tiene las características de desempeño adecuadas para cumplir los requerimientos de las aplicaciones analíticas.

La validación consiste en

• Comprobar varios aspectos del comportamiento del método.
• Establecer que sirve para el fin previsto.

Implica

La demostración de la determinación de las fuentes de variabilidad y del error sistemático y al azar de un procedimiento, no solo dentro de la calibración sino en el análisis de muestras reales.

¿Qué es la Verificación de Métodos?

Verificación

Aportación de evidencia objetiva de que se han cumplido con los requisitos especificados.

Consiste en

Proceso que lleva a cabo el laboratorio para demostrar su capacidad de ejecutar correctamente un método normalizado cuando lo realiza exactamente como está descrito en la norma.

¿Por qué validar un método analítico?

Para cumplir requisitos de normas y/o estándares nacionales o internacionales:

• BPM (Industria Farmacéutica).
• Norma ISO 17025.
• Norma ISO 15189.
• Otros organismos internacionales.

Definiciones clave

• Técnica: Aplicación de un principio científico del cual se ha demostrado su utilidad para proveer información analítica.
• Método: Adaptación de una técnica para una medición específica con un fin determinado.
• Procedimiento: Conjunto de instrucciones detalladas necesarias para llevar a la práctica un método, presentadas en forma escrita.
• Protocolo: Conjunto de instrucciones que se deben seguir sin excepción para garantizar resultados uniformes de un procedimiento en cualquier laboratorio.

Tipos de Métodos

1. Métodos Normalizados

Método analítico desarrollado por un organismo de normalización u otro organismo reconocido cuyos métodos son generalmente aceptados por el sector técnico correspondiente. Nota: El desarrollo del método incluye la etapa de validación.

2. Métodos No Normalizados

Método analítico desarrollado por un tercero o adaptado por el laboratorio a partir de un método normalizado. Nota: El desarrollo del método y su adaptación incluyen la etapa de validación.

3. Métodos desarrollados por el laboratorio

Método analítico que no se encuentra en normas ni publicaciones de terceros y que ha sido desarrollado por el propio laboratorio. Nota: El desarrollo del método incluye la etapa de validación.

¿Qué métodos se validan?

1. Métodos No Normalizados.
2. Métodos diseñados por el laboratorio.
3. Métodos Normalizados modificados por el laboratorio o utilizados fuera del alcance previsto.

La validación debe

• Reflejar las condiciones reales de ensayo.
• Depender del método y su aplicación.
• Ser realizada por personal capacitado y calificado.
• Considerar la descripción del método de ensayo como parámetro de validación.

Grado de Validación / Verificación

Parámetros principales:

• Selectividad y Sensibilidad.
• Recuperación y Exactitud (sesgo).
• Repetibilidad (precisión).
• Rango de aplicación y Aplicabilidad.
• Incertidumbre de la medición.
• Límite de detección del método.

¿Qué métodos se verifican?

1. Métodos Normalizados.
2. Métodos Oficiales.
3. Métodos de organismos nacionales o internacionales reconocidos.

Importante

• Es recomendable utilizar métodos normalizados cuando estén disponibles y sean apropiados.
• El laboratorio debe confirmar que puede aplicar correctamente los métodos normalizados antes de las pruebas o calibraciones.
• Si el método cambia, la confirmación se repetirá.

¿Cómo seleccionar e implementar un método?

1. Preferentemente que sea un método normalizado vigente.
2. Que sea apropiado para el tipo de mensurando.
3. Contar con personal capacitado e instalaciones adecuadas.
4. Definir procedimientos estadísticos, control de calidad y criterios de aceptación/rechazo.

Requisitos previos a la validación

• Equipos calibrados.
• Métodos documentados.
• Patrones de referencia confiables.
• Analistas calificados.
• Integridad del ítem.
• Plan de validación.

Parámetros de Desempeño del Método

Son propiedades, características o capacidades cuantificables que indican el grado de calidad del método:

• Exactitud, Precisión y Repetibilidad.
• Reproducibilidad y Especificidad.
• Límite de detección y Límite de cuantificación.
• Linealidad, Sensibilidad y Robustez.

Procedimiento e Informe de Validación

Procedimiento

• Declaración de propósito y alcance.
• Responsabilidades y método de ensayo documentado.
• Procedimiento experimental y análisis estadístico.
• Criterio de aceptación para cada parámetro.

Informe de Validación

Debe contener: Objetivo, alcance, parámetros evaluados, descripción de actividades, resultados (repetibilidad, reproducibilidad, error normalizado) y conclusiones.

Pruebas Estadísticas

Prueba de Repetibilidad

Consiste en comparar las mediciones obtenidas de dos calibraciones realizadas a un instrumento bajo calibración, a distintos tiempos, por el mismo metrólogo. Se utiliza la prueba t de Student.

Prueba de Reproducibilidad

Consiste en comparar mediciones obtenidas entre distintos metrólogos. Se utiliza ANOVA. Criterio de aceptación: F calculada ≤ F crítica.

Prueba de Error Normalizado (En)

Evalúa el error sistemático y la incertidumbre. Criterios: Valor absoluto entre 0 y 1 (confiable); valor mayor a 2 (no confiable).